Hindi Karaciğerinden NADPH-Sitokrom P450 Redüktaz Enziminin Saflaştırılması, Karakterizasyonu ve Bazı Kimyasal Maddelerin Enzim Aktivitesi Üzerine Etkilerinin İncelenmesi
Purification and Characterization of NADPH Cytochrome P450 Reductase Enzyme from Turkey Liver and Investigation of The Effects of Some Chemical Substances on Enzyme Activity
- Tez No: 322528
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 153
Özet
NADPH-Sitokrom P450 redüktaz (CPR; EC 1.6.2.4) enzimi detoksifikasyon metabolizmasında elektron transferini katalizleyen kilit bir enzimdir. Bu tez kapsamında CPR enziminin hindi karaciğer mikrozomlarından saflaştırılması için iki farklı yöntem kullanılmıştır. İlk yöntemde hindi karaciğer dokusundan elde edilen mikrozamal pelet emulgen kullanılarak çözündürülmüş ve 2?, 5?-ADP Sepharose 4B afinite kolonuna yüklenerek enzim %23,43 verimle 114,15 kat saflaştırılmıştır. İkinci yöntemde ise hindi karaciğer dokusundan elde edilen mikrozamal pelet emulgen kullanılarak çözündürülmüş DE52-Selüloz kolonuna ardından da 2?, 5?-ADP Sepharose 4B afinite kolonuna yüklenerek enzim %8 verimle 124 kat saflaştırılmıştır. Enzim saflığı her iki yöntemde de SDS-PAGE ile kontrol edilmiştir. Saflaştırılan enzimin karakteristik ve kinetik özellikleri tespit edilmiştir. Hindi karaciğer mikrozomlarından saflaştırılan NADPH-sitokrom P450 redüktaz enzim aktivitesi üzerine Ag+, Tl+, Cu+2, Zn+2, Cd+2, Hg+2, Co+2, Pb+2, Ni+2, Mn+2, Mg+2, Ca+2, Al+3 ve As+5 metal iyonlarının inhibisyon etkisi in vitro şartlarda araştırılmıştır. Ag+, Hg+2 ve Cu+2 metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerinde inhibisyon etkisi gösterdiği belirlenmiştir. İnhibisyon etkisi gösteren metal iyonları için IC50 değerleri sırasıyla 1,60, 13,52 ve 227 µM Ki sabitleri ve inhibisyon tipleri ise sırasıyla 0,02967±0,0067; yarışmalı, 10,37±2,24350; yarışmalı ve 251±108,6247; yarışmasız olarak tespit edilmiştir. Daha sonra çalışma kapsamında enzim aktivitesi üzerine oksitetrasiklin dihidrat, kanamisin sülfat, gentamisin sülfat, enrofloksasin, tiylosin, kloramfenikol, sefuroksim sodyum, sefazolin sodyum, amikasin sülfat, linkomisin HCl, seftriakson disodyum ve vankomisin HCl antibiyotiklerinin inhibisyon etkisi in vitro şartlarda araştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
NADPH-cytochrome P450 reductase (CPR; EC 1.6.2.4) is the key enzyme that catalyzes the electron transfer in detoxification metabolism. Within the scope of this thesis, two different methods were used for purification of CPR enzyme from turkey liver microsomes. By the first method, the enzyme was solubilized by detergent from microsomal fraction of turkey liver and was purified 114.15 fold with a yield of 23.43% using 2?, 5?-ADP Sepharose 4B affinity column. By the second method, CPR was solubilized by detergent from microsomal fraction of turkey liver and was purified 124-fold with a yield of 8% using DE52-cellulose column and 2?, 5?-ADP Sepharose 4B affinity column. The purity of the enzyme was verified by SDS-PAGE in both methods. Characteristics and kinetic properties of the purified enzyme were determined. In addition, the effects of metal ions Ag+, Tl+, Cu2+, Zn2+, Cd2+, Hg2+, Co2+, Pb2+, Ni2+, Mn2+, Mg2+, Ca2+, Al3+ and As5+ on NADPH-cytochrome P450 reductase enzyme activities purified from turkey liver microsomes were investigated in in vitro conditions. IC50 value and Ki constants were calculated for the metals which show inhibition effects. It was determined that Ag+, Hg2+ and Cu2+ metal ions showed inhibitory effects on the enzyme activity. IC50 values were determined as 1.60, 13.52 and 227 µM respectively; Ki constants and inhibition types were found as 0.02967±0.0067; competitive, 10.37 ± 2.24350; competitive and 251±108, 6247 µM; noncompetitive for the metals which showed inhibitory effects. Then, in the scope of the study inhibitory effects of some antibiotics; oxytetracycline dihydrate, kanamycin sulfate, gentamicin sulfate, enrofloxacin, tiylosin, chloramphenicol, cefuroxime sodium, cefazolin sodium, amikacin sulfate, linkomisin HCl, disodium ceftriaxone and vancomycin HCl, on the enzyme activity were investigated in in vitro conditions.
Benzer Tezler
- Glutatyon redüktaz enziminin hindi karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of glutathione reductase enzyme from Turkey liver
PINAR TAŞER
- Hindilerde tibial dyschondroplasia ve açısal kemik deformasyonları (valgus varus) ile canlı ağırlık ve canlı ağırlık artışı arasındaki ilişkiler
The Relationship among tibial dyschondroplasia, valgus varus, body weight and body weight gain in Turkeys
MUSTAFA SERCEM SEVİM
- Hindi (Meleagris gallopavo, Linnaeus, 1758) konjunktiva mast hücrelerinin lokalizasyonları ve histokimyasal özellikleri
Localization and histochemical features of conjunctiva mast cells in Turkey (Meleagris gallopavo, Linnaeus, 1758)
FUNDA PEKMEZCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. KENAN ÇINAR
- Osmanlı dönemi kısas-ı enbiyalarına göre Hz. Muhammed: Hindi Mahmud kısas-ı enbiya örneği
According to the kısas-ı enbiya of the Ottoman period Hz.Muhammad: Example of Hindi Mahmud kısas-ı anbiya
SEMANUR PETEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
TarihAnkara Üniversitesiİslam Tarihi ve Sanatları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEYFETTİN ERŞAHİN
- Hindi etlerinin marinasyonunda bazı doğal antioksidan kaynaklarının kullanımı
Application of some natural antioxidant sources on marination of turkey meat
YASEMİN BOR
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Gıda MühendisliğiAfyon Kocatepe ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. VELİ GÖK