Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of ribulokinase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari
- Tez No: 332105
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Anoxybacillus, Ribulokinase, Expression
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 57
Özet
Ribulokinazlar (transferazlar, EC 2.7.1.16) L-ribulozu, L-ribuloz 5 fosfata; D-ribulozu, D-ribuloz 5 fosfata dönüşümünü sağlayan enzimlerdir. Bu enzimin katalizlediği reaksiyonlar sonucunda oluşan ürünler, pentoz fosfat yolunda kullanılır.Bu çalışma Anoxybacillus kestanbolensis AC26 sarı ribulokinaz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. Yapılan bu çalışmada Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazını kodlayan 1695 nt'lik genin baz dizilimi belirlenerek pET-28a(+) vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21 (DE3) pLysS hücresine aktarılarak ribulokinaz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saf ribulokinaz, 60°C ve pH 9'da optimum aktivite gösterdi. Enzimin, D-ribuloz için Km değeri 0,94 mM olarak belirlendi. Enzimin aktivitesi üzerine Mg+2, Ca+2, Li, K, Zn+2 metal iyonlarının, ß-merkaptoetanol ve EDTA'nın etkileri araştırıldı. Mg+2 ve ß-merkaptoetanol'ün aktiviteyi arttırdığı, Zn+2'in aktiviteyi inhibe ettiği, Ca+2, Li, K, EDTA'nın ise aktiviteyi etkilemediği görüldü. A. kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinazının moleküler ağırlığı 61,96 kDa olarak tespit edildi.
Özet (Çeviri)
Ribulokinases (transferase; EC 2.7.1.16) convert L-ribulose to L-ribulose 5 phosphate and D-ribulose to D-ribulose 5 phosphate. The products as a result of reactions catalyzed by this enzyme are used in pentose phosphate pathway.This study describes the cloning of a ribulokinase gene from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari, isolation, and characterization of the gene product. A 1695 nt gene coding for ribulokinase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari sequenced and cloned into pET-28a(+) vector. Vector encoding ribulokinase gene was transformed into E.coli BL21 (DE3), expressed and purified. The purified ribulokinase showed optimal activity at 60°C in pH 9. Km value for D-ribulose was determined to be 0.94 mM. Effects of metal ions (Mg2+, Ca2+, Li, K, Zn2+), ß-mercaptoethanol and EDTA on the enzyme activity were studied. Enzyme activity was increased by Mg2+ and ß-mercaptoethanol, and inhibited by Zn2+. In addition, Ca2+, Li, K, and EDTA had no effect on the enzyme activity. Molecular mass of A. kestanbolensis AC26 Sari ribulokinase was determined to be 61.96 kDa.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus kestanbolensis ac26 sarı l-arabinoz izomeraz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characteisation of l-arabinoseisomerase from anoxybacillus kestanbolensis ac26 sari
NAZAN DALKIRAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Anoxybacillus kestanbolensis AC26sarı suşundan arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve enzimin karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of thermophilic ?-L arabinofuranosidase from anoxybacillus kestanbolensis AC26sari
MURAT KAÇAĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- recN, flaA ve ftsY genlerine göre Anoxybacillus cinsinin moleküler analizi
Molecular analysis of the genus Anoxybacillus based on the sequence similarity of te genes recN, flaA and ftsY
DİLŞAT NİGAR ÇOLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Bazı termofolik bakterilerdeki katalaz aktivitesinin incelenmesi
Investigation of catalase activities from some thermophilic bacteria
BARBAROS DİNÇER
- Gönen, Kestanbol ve Diyadin kaplıcalarından termofilik bakterilerin izolasyonu, moleküler yöntemlerle karakterizasyonu ve tanımlanması
Isolation, characterization with molecular methods and description of thermophilic bacteria from Çönen, Kestanbol and Diyadin hot springs
SABRİYE ÇANAKÇI DÜLGER
Doktora
Türkçe
2003
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ