Anoxybacillus kestanbolensis ac26 sarı l-arabinoz izomeraz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characteisation of l-arabinoseisomerase from anoxybacillus kestanbolensis ac26 sari
- Tez No: 315552
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Mikrobiyoloji, Biochemistry, Biology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 67
Özet
L-arabinoz izomeraz (L-AI; intramoleküler oksidoredüktazlar; EC 5.3.1.4) hücre içi bir enzimdir ve pentoz fosfat yan yolu için L-arabinozun L-ribuloza veya D-galaktozun D-tagatoza geri dönüşümlü izomerizasyonu sağlar. Mikrobiyal L-arabinoz izomerazlar özellikle D-tagatoz sentezlenmesi açısından endüstriyel açıdan oldukça ilgi çekmektedir. Endüstriyel kullanım için özellikle termofilik bakterilerin enzimleri tercih edilmektedir. Yüksek sıcaklıklarda gerçekleşen endüstriyel enzimatik reaksiyonlar, kontaminasyon riskini ve substrat viskositesini azaltmaktadır.Bu çalışma Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı L-arabinoz izomeraz geninin klonlanmasını, gen ürününün izolasyonunu ve karakterizasyonunu konu almaktadır. Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı L-arabinoz izomerazını kodlayan 1503 nt` lik genin baz dizilimi belirlenerek pET28a+ vektörüne klonlandı. Geni içeren vektör, E.coli BL21(DE3)pLysS hücresine aktarılarak L-arabinoz izomeraz ekspres edildi ve saflaştırıldı. Saflaştırılan L-AI'ın optimum sıcaklığı 65ºC ve optimum pH'ı 8,5 olarak belirlendi. L-arabinoz için Km değeri 6,5 mM olarak belirlendi. Mn+2, Co+2, Mg+2, Fe+2,Ca+2, Cu+2, Li, K ve Zn+2 metal iyonlarının etkisi incelendi. A. kestanbolensis AC26 Sarı L-arabinoz izomeraz moleküler ağırlığı 55,6776 kDa olarak tespit edildi. Elde edilen veriler ışığında, enzimin biyokimyasal özellikleri, enzimin önemli bir endüstriyel enzim olabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
L-arabinose isomerase (intramolecular oxidoreductases; EC 5.3.1.4) is an intracellular enzyme and provides reversible isomerization of L-arabinose to L-ribulose or D-galactose to D-tagatose for pentose phosphate pathway. Microbial L-arabinose isomerases draw great attention in terms of synthesis of D-tagatose in industry. Particularly, thermophilic enzymes are preferred for industrial use. Industrial enzymatic reactions that occur at high temperatures reduce the risk of contamination and viscosity of substrate.This work describes the cloning, isolation, and characterization of L-arabinose isomerase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari. A 1503 nt L-arabinose isomerase gene coding for L-arabinose isomerase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 SARI sequenced and cloned into pET28a+ vector. Vector encoding this gene was transformed into E.coli BL21(DE3)pLysS, expressed and purified. It was determined that the purified L-arabinose isomerase optimum temperature is 65 °C and optimum pH is 8.5. It was determined that the enzyme had Km (6.5 mM) for L-arabinose. Metal ion effects to L-AI were observed with cloride salts of Mn+2, Co+2, Mg+2, Fe+2, Ca+2, Cu+2, Li, K and Zn+metal ions. The molecular mass of the L-AI was determined to be 55.6776 kDa on SDS-PAGE. In the light of all data it has been suggested that the enzyme?s biocatalytic properties proved to be one of the important industrial enzymes.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus kestanbolensis AC26sarı suşundan arabinofuranosidaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve enzimin karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of thermophilic ?-L arabinofuranosidase from anoxybacillus kestanbolensis AC26sari
MURAT KAÇAĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sarı ribulokinaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu
Cloning, expression and characterization of ribulokinase from Anoxybacillus kestanbolensis AC26 Sari
MÜSLÜM TOKGÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
- recN, flaA ve ftsY genlerine göre Anoxybacillus cinsinin moleküler analizi
Molecular analysis of the genus Anoxybacillus based on the sequence similarity of te genes recN, flaA and ftsY
DİLŞAT NİGAR ÇOLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Bazı termofolik bakterilerdeki katalaz aktivitesinin incelenmesi
Investigation of catalase activities from some thermophilic bacteria
BARBAROS DİNÇER
- Gönen, Kestanbol ve Diyadin kaplıcalarından termofilik bakterilerin izolasyonu, moleküler yöntemlerle karakterizasyonu ve tanımlanması
Isolation, characterization with molecular methods and description of thermophilic bacteria from Çönen, Kestanbol and Diyadin hot springs
SABRİYE ÇANAKÇI DÜLGER
Doktora
Türkçe
2003
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ