Geri Dön

Development and molecular analysis of CMT4B1 drosophila model

CMT4B1 drosophila modelinin geliştirilmesi ve moleküler analizleri

PDF İndir

  1. Tez No: 338920
  2. Yazar: MERVE KILINÇ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ESRA BATTALOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 94

Özet

Charcot-Marie-Tooth (CMT) hastalığı çevresel sinir sisteminin en sık görülen hastalığıdır. Bu hastalıkla ilişkilendirilen yaklaşık 40 gen arasında, MTMR2 mutasyonları CMT4B1 alt tipi olarak sınıflandırılmıştır. Bu genin protein ürünü, fosfatidil inositol (PI) metabolizmasında yer alan fozfatazlar olan myotubularinlere aittir. Bu çalışmanın amacı mutant MTMR2?nin hastalık mekanizmasındaki etkisini araştırmak amacıyla CMT4B1 için Drosophila modeli geliştirmektir. Öncelikle, MTMR2?nin sinek homoloğu olan mtm?in mevcut olan kısmi delesyonlu mutant sinekleri, nöromusküler morfoloji ve fonksiyon bağlamında, sırasıyla immünohistokimya ve FM 1-43 boya alımı testleriyle analiz edilmiştir. Nöromusküler bağlantılar ve nöronların uçlarının kaslarla yaptığı yuvarlak bağlantılar olan butonlar incelenmiştir. Üçüncü evredeki mutant larvaların normalde görülmeyen fazla sayıda uydu butonlara ve buton altı yapılara sahip olduğu gözlemlenmiştir. Aynı zamanda, immunohistokimya analizlerinde mtm anlatımının bütün organizmada ya da sinirlerde RNAi yöntemi ile seçici azaltılması sonucu da uydu butonları göstermiştir. İkinci olarak, mtm?in sineklerde kesin delesyonunu yaratmak ve daha sonra mtm?in herhangi bir genle değişimini sağlayabilmek için hedefleme vektörü ve integraz aracılığıyla gen silinmesi yöntemi (IAGSY) kullanılmıştır. Bu çalışmada, mtm-hedefleme vektörü, mtm?in alt ve üst bölgelerinin pP{White-STAR} vektörüne klonlarak hazırlanmıştır. Üçüncü kromozom hedef olarak seçilmesine rağmen, vektör X kromozomuna rastlantısal olarak entegre olmuştur. Hedefleme vektörü bu sineklerde mobilize edilmeye çalışılmış, ancak rekombinant sinek gözlenmemiştir. mtm-eksik sinekler elde etmek için daha fazla sinek taranmalıdır. Bu sinekler elde edildiğinde yabanıl tip MTMR2 ve CMT?ye sebep olan mutant MTMR2, mtm?in konumuna yerleştirilerek CMT hastalığına ve MTMR2?ye bağlı nörodejenerasyona sebep olan moleküler mekanizmalara ışık tutulabilecektir.

Özet (Çeviri)

Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease is the most common inherited disorder of the peripheral nervous system. Among about 40 genes associated with the disease, MTMR2 loss-of-function mutations are classified as CMT4B1 subtype. Its protein product belongs to the myotubularins, which are phosphatases in phosphatidyl inositol metabolism. The aim of this study was to generate a Drosophila model for CMT4B1 to understand the pathogenesis of this subtype by investigating how mutant MTMR2 contributes to the disease as well as furthering the current knowledge on myotubularin proteins. Firstly, already available mutant flies with partial deletion alleles of mtm, the fly homolog for MTMR2, were analyzed in terms of neuromuscular junction (NMJ) morphology and function using immunohistochemistry and FM1-43 dye uptake assays, respectively. The boutons in the NMJs, which are the connections of motor neuron terminals to muscle cells, were studied and in the NMJs of the third instar mutant larvae, excess number of satellite boutons and subboutonic structures were observed. The immunohistochemical findings with the ubiquitous and neuronal down-regulation of mtm showed also satellite boutons. Secondly, to generate precise deletion of mtm in flies, integrase-mediated approach for gene knock-out (IMAGO) was used because the targeting vector carries attachment sites, which enable the replacement of mtm with any gene. In this study, the mtm-targeting vector was prepared by cloning the homology up- and downstream sequences of mtm into pP{white-STAR} vector. It was randomly integrated into the X chromosome even though third chromosome was targeted. The targeting construct was tried to be mobilized; however, no recombinant flies were obtained after screening the progeny and more flies should be screened to obtain mtm deficient lines. Once these flies are generated, it will be possible to knock in wild type MTMR2 and CMT-causing mutant MTMR2 in place of mtm to shed light on the molecular mechanisms leading to MTMR2-associated neurodegeneration in CMT4B1.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    646344

    Berrak hücreli tip renal hücreli karsinom'da RNA temelli biyobelirteçlerin biyoinformatik ve moleküler analiz yöntemleri ile araştırılması

    Research with bioinformatic and molecular analysis methods of RNA based biomarkers in clear cell renal cell carcinoma

    UFUK ÜNAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Tıbbi BiyolojiUludağ Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLŞAH ÇEÇENER

  2. Tez No

    342076

    Fare embriyonik kök hücrelerinden faklılaştırılan keratinositlerin diyabetik yara modeli iyileşmesi üzerine etkisinin moleküler düzeyde analizi

    Molecular analysis of the effect of keratinocytes from mice embriyonic stem cells onto wound model

    ŞÜKRÜ KASAP

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiDokuz Eylül Üniversitesi

    Plastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ BARUTÇU

  3. Tez No

    682818

    Nörofibromatozis tip 1 tanılı hastalarda klinik bulgular ve moleküler analiz sonuçlarının değerlendirilmesi

    Evaluation of clinical findings and molecular analysis results inpatients diagnosed with neurofibromatosis type 1

    YASEMİN ÜNAL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ESRA KILIÇ

  4. Tez No

    200346

    Development and application of techniques on molecular analysis of genetically modified products

    Genetiği değiştirilmiş ürünlerin analizinde moleküler tekniklerin geliştirilmesi ve uygulanması

    ATAKAN ERTUĞRUL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2007

    BiyomühendislikSabancı Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SELİM ÇETİNER

  5. Tez No

    620856

    Combined network analysis and molecular dynamics simulations study for characterization of prevalent somatic mutations in breast cancer: Sf3b1 case study

    Meme kanserinde bir hayli mutasyona uğramış bir geni karakterize etmek için birleşik ağ analizi ve moleküler dinamik simülasyonları çalışması: Sf3b1 örnek olay incelemesi

    ASMAA SAMY MOHAMED MAHMOUD

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Bilim ve Teknolojiİstanbul Medipol Üniversitesi

    Biyomedikal Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    Assoc. Prof. Dr. MEHMET KEMAL ÖZDEMİR

Geri Dön