Development and molecular analysis of CMT4B1 drosophila model
CMT4B1 drosophila modelinin geliştirilmesi ve moleküler analizleri
- Tez No: 338920
- Danışmanlar: PROF. DR. ESRA BATTALOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Charcot-Marie-Tooth (CMT) hastalığı çevresel sinir sisteminin en sık görülen hastalığıdır. Bu hastalıkla ilişkilendirilen yaklaşık 40 gen arasında, MTMR2 mutasyonları CMT4B1 alt tipi olarak sınıflandırılmıştır. Bu genin protein ürünü, fosfatidil inositol (PI) metabolizmasında yer alan fozfatazlar olan myotubularinlere aittir. Bu çalışmanın amacı mutant MTMR2?nin hastalık mekanizmasındaki etkisini araştırmak amacıyla CMT4B1 için Drosophila modeli geliştirmektir. Öncelikle, MTMR2?nin sinek homoloğu olan mtm?in mevcut olan kısmi delesyonlu mutant sinekleri, nöromusküler morfoloji ve fonksiyon bağlamında, sırasıyla immünohistokimya ve FM 1-43 boya alımı testleriyle analiz edilmiştir. Nöromusküler bağlantılar ve nöronların uçlarının kaslarla yaptığı yuvarlak bağlantılar olan butonlar incelenmiştir. Üçüncü evredeki mutant larvaların normalde görülmeyen fazla sayıda uydu butonlara ve buton altı yapılara sahip olduğu gözlemlenmiştir. Aynı zamanda, immunohistokimya analizlerinde mtm anlatımının bütün organizmada ya da sinirlerde RNAi yöntemi ile seçici azaltılması sonucu da uydu butonları göstermiştir. İkinci olarak, mtm?in sineklerde kesin delesyonunu yaratmak ve daha sonra mtm?in herhangi bir genle değişimini sağlayabilmek için hedefleme vektörü ve integraz aracılığıyla gen silinmesi yöntemi (IAGSY) kullanılmıştır. Bu çalışmada, mtm-hedefleme vektörü, mtm?in alt ve üst bölgelerinin pP{White-STAR} vektörüne klonlarak hazırlanmıştır. Üçüncü kromozom hedef olarak seçilmesine rağmen, vektör X kromozomuna rastlantısal olarak entegre olmuştur. Hedefleme vektörü bu sineklerde mobilize edilmeye çalışılmış, ancak rekombinant sinek gözlenmemiştir. mtm-eksik sinekler elde etmek için daha fazla sinek taranmalıdır. Bu sinekler elde edildiğinde yabanıl tip MTMR2 ve CMT?ye sebep olan mutant MTMR2, mtm?in konumuna yerleştirilerek CMT hastalığına ve MTMR2?ye bağlı nörodejenerasyona sebep olan moleküler mekanizmalara ışık tutulabilecektir.
Özet (Çeviri)
Charcot-Marie-Tooth (CMT) disease is the most common inherited disorder of the peripheral nervous system. Among about 40 genes associated with the disease, MTMR2 loss-of-function mutations are classified as CMT4B1 subtype. Its protein product belongs to the myotubularins, which are phosphatases in phosphatidyl inositol metabolism. The aim of this study was to generate a Drosophila model for CMT4B1 to understand the pathogenesis of this subtype by investigating how mutant MTMR2 contributes to the disease as well as furthering the current knowledge on myotubularin proteins. Firstly, already available mutant flies with partial deletion alleles of mtm, the fly homolog for MTMR2, were analyzed in terms of neuromuscular junction (NMJ) morphology and function using immunohistochemistry and FM1-43 dye uptake assays, respectively. The boutons in the NMJs, which are the connections of motor neuron terminals to muscle cells, were studied and in the NMJs of the third instar mutant larvae, excess number of satellite boutons and subboutonic structures were observed. The immunohistochemical findings with the ubiquitous and neuronal down-regulation of mtm showed also satellite boutons. Secondly, to generate precise deletion of mtm in flies, integrase-mediated approach for gene knock-out (IMAGO) was used because the targeting vector carries attachment sites, which enable the replacement of mtm with any gene. In this study, the mtm-targeting vector was prepared by cloning the homology up- and downstream sequences of mtm into pP{white-STAR} vector. It was randomly integrated into the X chromosome even though third chromosome was targeted. The targeting construct was tried to be mobilized; however, no recombinant flies were obtained after screening the progeny and more flies should be screened to obtain mtm deficient lines. Once these flies are generated, it will be possible to knock in wild type MTMR2 and CMT-causing mutant MTMR2 in place of mtm to shed light on the molecular mechanisms leading to MTMR2-associated neurodegeneration in CMT4B1.
Benzer Tezler
- Ovulasyon indüksiyonu tedavisinde folliküler gelişimin ultrasonografik takibi
Başlık çevirisi yok
MERİH BAYRAM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1987
Kadın Hastalıkları ve DoğumGazi ÜniversitesiKadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MÜLAZIM YILDIRIM
- Makro besin elementlerinin (NPK) İzmir'de Mayıs ayında açığa dikilen 4-6 cm çevre büyüklüğündeki Gladiolus cinsine ait“hunting song”ve“Novalüx”kültür çeşitlerinin yumrularının gelişmeleri üzerine etkileri
Başlık çevirisi yok
TAHA ALİ AMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
ZiraatEge ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ADNAN HATİPOĞLU
- Sanayi politikaları ve planlı dönemde imalat sanayine etkileri
Başlık çevirisi yok
AHMET CAFOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
EkonomiGazi ÜniversitesiEndüstri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YALÇIN EROL
- Pulmoner hipertansiyon etyopatogenezinde prostasiklin ve lökotrien C4'ün rolü
Possible role of leukotrien C4 and prostacyclin in the development of pulmonary hypertension
ÜLKÜ AYBERK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1987
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıGazi ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı