Hepatoselüler kanser gelişiminde sitokrom P4501A1 (CYP1A1), hepatit bx (HBX) ve nüklear faktör kappa b (NF-kB etkileşimlerinin roiü
The role of interactions of CYP1A1, HBX and NF-kB in the development of hepatocelular carcinoma
- Tez No: 348551
- Danışmanlar: PROF. DR. ALAATTİN ŞEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Hepatoselüler karsinom, Hepatit B X protein, Sitokrom P450, Hepatit B X protein, Cytohrome P450 1A1, Nuclear Factor Kappa B
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Pamukkale Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 67
Özet
Bu çalışmada, Hepatit B X (HBX), Sitokrom P450 1A1 (CYP1A1) ve Nüklear Faktör kappa B (NF-kB) proteinlerinin Hepatit B Virüs aracılı insan karaciğer kanser hücre hattında (HepG2) protein-protein etkileşim potansiyelinin moleküler yaklaşımlar ile aydınlatılması amaçlanmıştır. Bu amaçla HepG2 hücrelerine CYP1A1 ve NF-kB (ReLA) genlerinin geçici transfeksiyonu yapılmıştır. Transfeksiyondan sonra HBX, CYP1A1 ve ReLA genlerinin HepG2 hücrelerinde mRNA düzeyinde ifadelerinin saptanması Ters Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PZR) yöntemi ile belirlenmiştir ve CYP1A1 aktivitesi tayin edilmiştir. CYP1A1 ve ReLA genlerinin hücre yaşamı üzerine etkileri araştırılmıştır. CYP1A1 geninin protein düzeyinde ifadesi Westren Blot yöntemi ile saptanmıştır. CYP1A1, HBX proteinlerinin protein-protein etkileşimleri İmmün Çöktürme analizi ile tayin edilmiştir. Deneyler sonucunda HepG2 hücrelerine aktarılan CYP1A1 ve ReLA genlerinin transfeksiyon verimliliğinin %20-%40 olduğu tespit edilmiştir. CYP1A1 ve ReLA genlerinin mRNA düzeyinde ifadelerinin ve CYP1A1 enzim aktivitesinin olduğu belirlenmiştir. CYP1A1 ve ReLA genlerinin HepG2 hücrelerine toksik etki göstermediği saptanmıştır. Yapılan Western Blot çalışmalarında CYP1A1?in protein düzeyinde ifadesinin insan karaciğer kanser hücrelerinde az miktarda olduğu belirlenmiştir. İmmün çöktürme çalışması HepG2 hücrelerinde CYP1A1 ve HBX?in protein-protein etkileşimlerinin olmadığını göstermiştir. Sonuç olarak, HBX geni aktarılmış insan karaciğer kanser hücresinde HBX geni ile CYP1A1 geninin protein düzeyinde protein-protein etkileşimlerinin olmadığı tespit edilmiştir. Bu durumun da, HBV mekanizmasında CYP1A1 geninin rol oynamadığını düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, the potential interactions among Hepatitis BX (HBX), Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) and Nuclear Factor Kappa B (NF-?B) proteins in Hepatitis B virus mediated human liver cancer cell line (HepG2) were studied using molecular approaches. For this purpose, CYP1A1 and NF-kB (RelA) genes were transiently transfected into HepG2 cells. After transfection, HBX, CYP1A1 and RelA levels were detected by measuring the related mRNA expressions using Reverse Transcriptase Polymerase Change Reaction (RT-PCR). In addition, CYP1A1 protein level was also determined by measuring CYP1A-directed EROD activity and western blot using specific anibodies against human CYP1A1. Similarly, RelA expressions were investigated by westren blotting. Furthermore, the effect of CYP1A1 and RelA expressions on the survival of HepG2 cells were monitored using cytotoxicity assays. Finally, the protein-protein interactions between CYP1A1 and HBX was determined by co-immunoprecipitation analysis. The transfection efficiency of CYP1A1 and RelA genes in HepG2 cells were observed between 20%-40%. The level mRNA expression of CYP1A1 and RelA genes and EROD activity further confirmed the low level of tranfection efficiencies. CYP1A1 and RelA did not show any toxic effects on the survival of the HepG2 cells. Western blot studies demonstrated the low level expression of CYP1A1 protein in these cells. Co-immunoprecipitation analysis clearly depicted that there is no protein-protein interaction between CYP1A1 and HBX in the HepG2 cells. Therefore, HBX CYP1A1 proteins do not interact with each other in HBX transfected human liver cancer cells. Consequently CYP1A1 gene may not play a role in the mechanism of HBV.
Benzer Tezler
- CHEK2 genindeki mutasyonlar ile hepatoselüler kanser ve kolorektal kanser arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation on the relation of the mutations in CHEK2 gene to hepatocellular and colorectal cancers
SÜLEYMAN BAYRAM
Doktora
Türkçe
2010
BiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HİKMET AKKIZ
PROF. DR. MEHMET TOPAKTAŞ
- Heterogeneity of hepatocellular malignant phenotype
Hepatoselüler malignansi fenotipinin heterojenliği
NURİ ÖZTÜRK
Doktora
İngilizce
2006
Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÜZTÜRK
- Güneydoğu Anadolu Bölgesinde kronik hepatit D virüs infeksiyonu olan vakaların epidemiyolojik ve klinik özellikleri
Epidemiological and clinical features of patients with chronic hepatitis D virüs infection in South - Eastern Region of Anatolia
KENDAL YALÇIN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
GastroenterolojiDicle ÜniversitesiGastroenteroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALİL DEĞERTEKİN
- Kronik karaciğer hastalarımızda Diabetes Mellitus
Diabetes Mellitus in chronic liver disease
ÖZGÜR YILMAZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2011
GastroenterolojiCelal Bayar Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN YÜCEYAR
- Hepatoselüler karsinom gelişiminde oksidatif stres ile ilişkili sinyal yolaklarının rolü
The role of signaling pathways associated with oxidative stress in the progression of hepatocellular carcinom
AYŞİM GÜNEŞ
Doktora
Türkçe
2016
GenetikDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY