Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı guanozintrifosfat siklohidrolaz-I geninin klonlanması ve ekspresyonu
Cloning and expression of guanosintriphosphate cyclohydrolase-I from anoxybacillus flavithermus
- Tez No: 352020
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. FATİH Ş. BERİŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Moleküler Tıp, Biotechnology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Anoxybacillus flavithermus, GTP, GTP siklohidrolaz I, enzim karakterizasyonu, Anoxybacillus flavithermus, GTP, GTP cyclohydrolase I, enzyme characterization
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 56
Özet
Bu çalışma, termofilik orjinli Anoxybacillus flavithermus bakterisine ait guanozin trifosfat siklohidrolaz I enziminin karakterizasyonunu içermektedir. Klonlanan gchI geni 603 baz çifti büyüklüğünde toplam 200 amino asidi kodlayan tek bir açık okuma dizinidir. GTP?den dihidroneopterin trifosfat dönüşümünü katalizler. Enzim ekspresyonu pET28a(+) vektörüne klonlandıktan sonra E. coli BL21(DE3)pLysS hücresinde 1 mM IPTG indüksiyonu ile tamamlanmış, saflaştırılması için 6xHis kuyruğuna özel Ni-NTA kolonu kullanılmıştır. Yapılan karakterizasyon sonucunda enzimin 24 kDa büyüklüğünde olduğu SDS-PAGE analizi ve amino asit sekansı hesaplamaları doğrulanmıştır. Enzim en iyi aktivite gösterdiği sıcaklık değeri 65?C ve en uygun pH değeri ise 8,0 olarak belirlendi. Enzime ait kinetik verilere bakıldığında, Vmax?ı 100,93 ± 3,5 nM/dak/mg protein ve Km?si 243 ± 23,25 ?M olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
This study was included the characterization of guanosin triphosphate cyclohydrolase I from thermophilic bacteria, Anoxybacillus flavithermus. We cloned the gchI gene that was 603 bp and its open reading frame has 200 amino acids. This enzyme catalyzed from GTP to dihydroneopterin triphosphate. We cloned into pET28a(+) expression vector with 6xHis tags and transform in E. coli BL21(DE3)pLysS host cells to express with 1 mM IPTG induction. We purified the enzyme with Ni-NTA resin. We determined that GCH-I is 24 kDa, its optimum pH is 8.0 and temperature is 65?C. Under optimal conditions, GCH-I exhibited a low enzymatic activity with Km- and Vmax- values of 243 ± 23,25 ?M and 100,93 ± 3,5 nM/min/mg protein, respectively.
Benzer Tezler
- Termofilik Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı β-glukozidaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning and expression of Afbgl gene from, Anoxybacillus flavithermus and biochemical characterization of thermophilic β-glucosidase
AYTÜL UZUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Anoxybacillus flavithermus WK1 AfCDA geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve biyokimyasal karakteriasyonu
Cloning, expression, purification and enzymatic characterization of AfCDA gene from Anoxybacillus flavitheermus WK1
AYŞENUR EMİNOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CEMAL SANDALLI
- Termofilik Anoxybacillus flavithermus DSM 2641T bakterisinin ptps geninin klonlanması, ekspresyonu ve enzimin biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning and expression of PTPS genefrom thermophilic Anoxybacillus flavithermusdsm 2641T and biochemical characterization of its enzyme
EFSUN ÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Anoxybacillus gonensis G2T CTP sentetaz geninin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve amonyak-bağımlı CTP sentetaz aktivitesinin karakterizasyonu
Cloning, expression, purification of ctp synthetase from Anoxybacillus gonensis G2T and characterization of NH3-dependent activity of CTP synthetase
AYŞEGÜL SARAL
- Sıcak su kaynaklarından bakteri izolasyonu, tanımlanması ve Alicyclobacillus acidocaldarius subsp. Rittmanii'nin b-galaktozidaz enziminin saflaştırılması
Identification, isolation of bacteria from the hot spring and the purification of ß-galactosidase in Alicyclobacillus acidocaldarius subspecies Rittmanii
REYHAN GÜL GÜVEN