Geri Dön

Paraksonaz enzimi kullanılarak transkripsiyonel aktivite belirlenmesinde yararlanılacak bir aday haberci sisteminin oluşturulması

Generating a candidate reporter system using paraoxonase enzyme for determination of transcriptional activity

PDF İndir

  1. Tez No: 352057
  2. Yazar: CEYLAN TOPRAK
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. HATİCE YILDIRIM
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 90

Özet

Paraoksonaz (PON) hem arilesteraz, hem de paraoksonaz (arildialkil fosfataz; E.C.3.1.8.1) aktivitesine sahip, karaciğerde sentezlenen bir serum estereazdır. Paraoksonaz gen ailesi; PON1, PON2 ve PON3 olmak üzere bilinen üç üyeye sahiptir. İnsan serum paraoksonazı (PON1), 43 kDA molekül ağırlığında 354 amino asitlik bir proteindir ve ailede en populer olan üyedir. Tezimizde amaçlanan transkripsiyonel aktivitenin belirlenmesinde kullanılacak alternatif bir salınan haberci sisteminin oluşturulmasıdır. Salınan haberci sistemlerin çalışma prensibinde temel olarak salınan haberci bir vektör bulunur. Bu vektör salınan lusiferaz geni ve onun üst kısmına promotor elementlerinin eklenmesine izin veren çoklu klonlama bölgesini (MCS) içerir. Salınan lusiferazın ekspresyonunu, ilgili promotor elementinin etkinliğini gösterir ve bu etkinlik tranfekte edilmiş hücrelerden alınan medyum örneğinden belirlenir. Çalışmamızda hedeflenen var olan sistemde kullanılan lusiferaz enzimi yerine paraoksonaz enziminin kullanımıdır. İlk olarak haberci vektörde bulunan lusiferaz geni kesilerek çıkartılmış ve yerine PON1 geni klonlanmıştır. Vektördeki promotor klonlamaları için uygun olan MCS bölgesine CAIX promotor bölgesi klonlanarak haberci vektör rekombinant hale getirilmiştir. Hepatoma hücre hattı olan Hep3B hücrelerine transfeksiyonlar yapılarak yeni oluşturulan sistemin aktivitesi belirlenmiştir. Ayrıca PON1 geninin protein analizleri SDS page ve western blot çalışmalarıyla tespit edilmiştir. ANAHTAR KELİMELER:paraoksonaz(PON), lusiferaz, promotor, spektrofotometre, luminometre

Özet (Çeviri)

Paraoxonase (PON) has both arylesterase and paraoxonase activity that is synthesized in liver. The paraoxonase (PON) gene family contains three members PON1, PON2 and PON3. Human serum paraoxonase(PON1 ) is a protein of 354 amino acids with a molecular mass of 43 kDa and most popular member of the family. Aim of the our thesis is to generate a candidate secreted reporter system using paraoxonase enzyme for determination of transcriptional activity. There is a secreted reporter vector in the these secreted systems as a principle. These vectors contain a secreted lusiferace gene followed the multiple cloning site (MCS) used for the cloning of the promoter elements. Expression of the secreted lusiferace indicates the activation of the promoter elements and can be determined from the samples collected from the culture mediums. The purpose of the this study is to use paraoxonase enzyme instead of lusiferace enzyme. First of all, the luciferace gene is removed from the vector by resriction digestion and PON1 gene was cloned. The vector has recombined by cloning of the CAIX promoter to the MCS site of the vector, activation of the novel system is tested by transfections to the hepatoma cell line, Hep3B. Protein analysis of the PON1 was also done by SDS PAGE and western blot analysis. KEYWORDS:paraoxonase(PON), luciferase, promoter, spectrophotometer, luminometer

Benzer Tezler

  1. Tez No

    449386

    Paraoksonaz (PON1) enziminin üç faz ayrımı (ÜFA) yöntemiyle saflaştırılması, karakterize edilmesi ve karadut (Moris nigra) ekstraktları immobilize edilmiş γ-Fe2O3 nanopartiküllerinin PON1, glioblastoma ve primer rat korteks sinir hücreleri üzerine etkilerinin araştırılması

    Characterization and purification of paraoxonase (PON1) enzyme by TPP (Three phase partitioning) and investigation of effects of black mulberry (Moris nigra) extracts are immobilized of γ-Fe2O3 nanoparticles on PON1, glioblastoma and primary rat cortex nerve cells

    SEMRA ÇİÇEK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HAYRUNNİSA NADAROĞLU

  2. Tez No

    352066

    Karbazol ß-laktam türevlerinin paraoksonaz enzimi üzerine etkilerinin araştırılması

    Investigating of effect of carbazole ß-lactam derivaties on paraoxonase enzyme

    BAŞAK GÖKÇE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyokimyaBalıkesir Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OKTAY ARSLAN

  3. Tez No

    236928

    Tavşan karaciğer paraoksonaz enziminin saflaştırılarak kinetik özellikleri, endojen substratları ve antioksidan özelliklerinin araştırılması.

    Purification of rabbit liver paraoxonase enzyme and investigation of its kinetic properties, endogenous substrates and antioxidant properties.

    TÜLİN BAYRAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EDİZ DEMİRPENÇE

  4. Tez No

    194732

    Egzersiz yapan sıçanlarda oksidatif stres ve paraoksonaz enzimi

    Oxidative stress and paraoxonase activity with exercise in rats

    IŞKIN DİCLE DEMİRAYAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyokimyaPamukkale Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. BÜNYAMİN KAPTANOĞLU

  5. Tez No

    245515

    Sığır serum paraoksonaz enziminin saflaştırılması ve immobilizasyonu

    The purification and immobilization of bovine serum paraoxonase

    MURAT SAYIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaBalıkesir Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ÖZEN ÖZENSOY GÜLER

Geri Dön