Helicobacter pylori cagA proteininin hücre Unfolded Ptotein Response (UPR) sinyal yolağı üzerine etkisinin incelenmesi
Effects of helicobacter pylori cagA on the cellular Unfolded Protein Response (UPR) signaling pathway
- Tez No: 359783
- Danışmanlar: PROF. DR. HASAN ACAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Mikrobiyoloji, Onkoloji, Genetics, Microbiology, Oncology
- Anahtar Kelimeler: Gastrik kanser, Helicobacter pylori, CagA, UPR, ER stresi, Gastric cancer, Helicobacter pylori, CagA, UPR, ER stress
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Selçuk Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 66
Özet
Gastrik (mide) kanser dünyada dördüncü sık görünen ve ikinci ölümcül kanser tipidir. Gastrik kanser oluşumunda Helicobacter pylori (Hp) CagA proteini birçok hücre içi fizyolojisine müdahale ederek mide hücre tümörleşmesinde önemli bir role sahip olduğu düşünülmektedir. Ayrıca unfolded protein response (UPR) olayı, hücre tümörleşmesindeki rolü ispatlanmıştır. Ancak eksojen CagA proteinin UPR yolağı üzerindeki etkisine dair literatürde herhangi bir çalışma bulunmamaktadır. Gastrik kanser gelişiminde ve progresyonunda etkisi bilinen Hp CagA proteinin hücrede UPR yolağı üzerindeki etkisi incelenmesi amaçlanmıştır. Mevcut projemizde, eksojen CagA proteinin, normal hücre hattı olan HEK293 ve gastrik kanser kökenli non metastatik AGS ve metastatik MKN45 hücrelerinde Unfolded Protein Response (UPR) üzerinde etkisi incelendi. Bu yolak üzerindeki temel elamanlar moleküler biyolojik ve genetik yöntemler kullanılarak incelendi. Bunun için; hücrelere 2 ve 4 saat 1 µg/ml rekombinant C-terminus CagA ile muamele edildi ve UPR faktörleri ATF4,CHOP, GRP78 ve GRP94 gen ekspresyonunu real time qPCR ile incelendi. Ayrıca XBP1 mRNA işlenmesini PCR-elektroforez sistemi ve ATF6 proteinin translokasyonu ise immünofloresans boyama yöntemi ile araştırıldı. Hücre proliferasyonu 24, 48 ve 72 saat muamele sonunda MTT assay uygulanarak değerlendirildi. Çalışmadan elde edilen bulgulara göre eksojen CagA proteini, UPR elemanlarının ekspresyonunu artırdığı tespit edildi. Aynı zamanda, eksojen CagA bütün hücrelerde XBP1 genin mRNA işlenmesi ve HEK293 ve AGS hücrelerinde ATF6 translokasyonu gerçekleştirdiği tespit edildi. Bu bulgular, eksojen CagA'nın UPR genleri up-regüle ettiğin gösterildi. Ayrıca, MTT analizi sonucu, eksojen CagA'nın hücre proliferasyonunu inhibe ettiği tespit edildi. Elde edilen bulgulara göre eksojen CagA, gastrik kanser hücrelerinde UPR yolağını up-regüle ederek hücre ölümüne sebep olmaktadır. Bu bulgular çerçevesinde,CagA'nın eksojen formunda başka hücre yolakları üzerine etkisinin araştırılması ve ER hedefli kemoterapi ilaçlarınınin in vitro hücre sistemlerinde etkisinin incelenmesi ve de Hp CagA+ gastrik kanser hayvan modellerinde araştırılmasını gerekmektedir.
Özet (Çeviri)
Gastric cancer is the fourth common and second deadliest cancer type worldwide. Helicobacter pylori (Hp) CagA has a key role in development of gastric cancer by intrusion in many cellular processes regarding to cell death and survival. Unfolded protein response (UPR) is an essential process for protein regulation and prevents tumorgenesis by promotion apoptosis that failure is associated with many cancers. However, in the literature, there are no reports regarding to the effects of the CagA proteinon the pathways of UPR and ER stress in cancer models cells and normal cells. In this project, it was hypothesized that there was an effect of CagA protein, which was known the development and progression of gastric cancer, on the cellular UPR. In this study, we aimed to investigate exogenous Hp CagA effects on the UPR signaling of gastric cancer cells as well as normal cell line. The cells were treated with 1 µg/ml of CagA for 2 and 4 hours and then transcriptional expression analysis of ATF4, CHOP, GRP78 and GRP94 genes were carry out by applying real time qPCR technique. The mRNA splicing of XBP1 was investigated by using PCR and SDS-PAGE systems and ATF6 protein translocation was analyzedby by using the immunofluorescence assay. The effect of CagA protein on the cell proliferation rate was also determined by using the MTT assay. The results showed that exogenous CagA could promote expression of, ATF4, CHOP, GRP78, and GRP49, genes in cancer cell lines. The mRNA splicing of XBP1 was also determined in the cells, which were treated with exogenous CagA protein. Addionally, translocation of ATF6 protein was detected only in HEK293 and AGS cells. Moreover, reduced proliferation rate under the influence of exogenous CagA was determined in all cell types. All results suggest that exogenous CagA protein up-regulatesthe signal of UPR and also actuated the cells to death through promotion UPR. We suggest that the examine of exogenous form of HP CagA on human cells also assisment of UPR targeted drugs in in vitro cells and Hp+ animal models with gastric cancer may give more prospering outcomes.
Benzer Tezler
- Helicobacter pylori enfeksiyonunda bakteriyel dış membran proteinlerinin incelenmesi
Investigation of bacterial outer membrane proteins in Helicobacter pylorı infection
DARYOUSH DAVOUDI OSKOUEI
Doktora
Türkçe
2020
MikrobiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZLEM YILMAZ
- Multiplex-PCR based screening and computational modeling of virulence factors and T cell mediated immunity in Helicobacter pylori infections for accurate clinical diagnosis
Helicobacter pylori enfeksiyonlarının doğru klinik tanısı için virülans faktörleri ile T hücreye bağımlı bağışıklığın çoklu-PZT ile taranması ve biyoinformatik modellemesi
SİNEM ÖKTEM OKULLU
Doktora
İngilizce
2017
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN
PROF. DR. ZÜHTÜ TANIL KOCAGÖZ
- Investigation of helicobacter pylori virulence genes and t-cell responses in pediatric gastritis patients
Pediatrik gastrit hastalarında helikobakter pylori virülans genleri ve t-hücre cevaplarının araştırılması
NİRAN ÖZDEMİR
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYÇA SAYI YAZGAN
DR. ÖĞR. ÜYESİ SİNEM ÖKTEM OKULLU
- Examination of the correlation between Helicobacter pylori and T cell response with the determination of PD-1 expression level in gastric pathologies
Mide patolojilerinde PD-1 ekspresyon seviyesinin tayini ile Helikobakter pylori ve T hücre cevabı arasındaki korelasyonun incelenmesi
TEVRİZ DİLAN DEMİR
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN
- The role of chemerin in Helicobacter pylori induced gastric pathogenesis
Helicobacter pylori ile indüklenen gastrik patogenezde kemerinin rolü
MANTASHA TABASSUM
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN