İnsan eritrositlerinden saflaştırılan asetilkolinesteraz enzim aktivitesi üzerine bazı kimyasal maddelerin etkilerinin incelenmesi
Investigation of the effects of some chemi̇cal substances on acetylcholinesterase enzyme activity purificed from human erythroctes
- Tez No: 361156
- Danışmanlar: PROF. DR. HASAN ÖZDEMİR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Kimya, Biochemistry, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Asetilkolinesteraz, insan eritrositi, karakterizasyon, inhibisyon, Acetylcholinesterase, human erythrocte, characterization, inhibition
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 167
Özet
Asetilkolinesteraz enzimi (AChE; E.C.3.1.1.7) insan eritrositlerinden CNBr ile aktive edilen Sepharose 4B-L-Tirozin-Takrin afinite kromatografisi ile 658 kat, %23,5 verimle saflaştırıldı. Enzim saflığı SDS-PAGE ile kontrol edildi ve tek bant bulundu (70 kDa )AChE enzimi için optimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık, stabil pH sırasıyla 7,6, 0,3 M, 50°C, 8,0 olarak tespit edildi. Ayrıca AChI ve DTNB substratları için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0,11 mM, 0,031 mM ve 0,082 EÜ/ml, 0,16 EÜ/ml olarak hesaplandı. AChE enzim aktivitesi üzerine vankomisin HCl, amikasin sülfat, pantoprazol, sefuroksim, diltizem HCl, tenoksikam antibiyotikleri, essitalopram, mirtazapin, fluoksetin, trazodon HCl, sodyum valproat, risperidon antidepresanları, BHA ve BHT sentetik antioksidanları, 2,6-diizopropilfenol(propofol), 2,6-dimetilfenol, 2,6-ditertbutilfenol, lidokain, bupivakain anestezikleri, etil alkol, aseton ve DMSO organik çözücüleri gibi farklı maddelerin inhibisyon etkileri incelendi. In vitro inhibisyon etkisi gösteren maddeler essitalopram okzalat, mirtazapin, risperidon, fluoksetin, pantoprazol, 2,6-diizopropilfenol, 2,6-dimetilfenol, 2,6-ditertbutilfenol, lidokain, bupivakain, BHA, BHT, etanol, aseton, dimetilsülfoksit için IC50 değerleri sırasıyla 1,06 mM, 0,019 mM, 0,428 mM, 1,62 mM, 1,97 mM, 5,94 µM, 6,96 µM, 36,3 µM, 260 µM, 5 µM, 32,85 µM, 36,3 µM, 2,24 M, 0,51 M, 0,51 M olarak hesaplandı. Aynı maddeler için sırasıyla ortalama Ki sabiti 1,30 mM, 0,012 mM, 0,23 mM, 1,48 mM, 1,26 mM, 3,93 µM, 2,06 µM, 18,9 µM, 14,3µM, 13,4 µM, 30,9 µM, 17,35 µM, 1,28 M, 0,19 M, 0,37 M olarak hesaplandı. İnhibisyon tipleri lidokain ve bupivakain anestezikleri için yarışmasız, diğer maddelerin tamamı için yarışmalı inhibisyon olarak tespit edildi. 2014, 149 sayfa
Özet (Çeviri)
Acetylcholinesterase enzyme (AChE: EC 3.1.1.7) was purified 658 fold with 23,5% yield from human ertyhroctes by Sepharose 4B-L-tyrosine-tacrine afinity column chromatograhphy that activated with CNBr. The purity enzyme was checked by SDS-PAGE and one band was observed (70 kDa). For AChE enzyme optimal pH, optimal temperature, stabil pH was determined as 7.6, 0.3 M, 50°C, 8.0 respectively. Also KM and Vmax values was calculated for AChI and DTNB substrates 0,11 mM, 0,031 mM ve 0,082 EU/mL, 0,16 EU/mL. On AChE enzyme activity were investigated the inhibitory effects of different substances such as vancomycn HCl, amicasin sulphate, pantoprazole, cefuroxime, diltizem hydrochlorid, tenoxicame antibiotics, escitalopram oczalate, mirtazapine, fluoxetine, trazodone hydrochlorid, sodium valproate, risperidone antidepressants, BHA and BHT unnative antioxidants, 2,6-dimethylphenol, 2,6-diisopropylphenol, 2,6-ditertbutylphenol, lidocain, bupivacain anesthezics, etylalcohol, aceton and dimethylsulfoxide organic solvents. IC50 values were calculated as 1,06 mM, 0,019 mM, 0,428 mM, 1,62 mM, 1,97 mM, 5,94 µM, 6,96 µM, 36,3 µM, 260 µM, 5 µM, 32,85 µM, 36,3 µM, 2,24 M, 0,51 M, 0,51 M for escitalopram oxalate, mirtazapine, risperidone, fluoxetine, pantoprazole, BHA, BHT, 2,6-diisopropylphenol, 2,6-dimethylphenol 2,6-ditertbutylphenol, lidocain, bupivacain, etylalcohol, aceton and dimethylsulfoxide substances which showed in vitro inhibitory effects respectively. Average Ki values were calculated as 1,30 mM, 0,012 mM, 0,23 mM, 1,48 mM, 1,26 mM, 3,93 µM, 2,06 µM, 18,9 µM, 14,3µM, 13,4µM, 30,9µM, 17,35µM, 1,28M, 0,19M, 0,37M for same substances respectively. Inhibition types were determined as uncompetitive inhibition for lidocain and bupivacain anesthezics, the other chemicals demonstrated competitive inhibition. 2014, 149 pages
Benzer Tezler
- Bazı arı ürünlerinin (bal, polen, propolis, arı sütü ve arı ekmeği) LC/MS-MS ile sekonder metabolitlerinin ve biyolojik aktivitelerinin belirlenmesi
Determination of the secondary metabolites by LC/MS-MS and bioligic activities of some bee products (Honey, pollen, propolis, royal jelly and bee bread)
EBUBEKİR İZOL
- Bazı antibiyotiklerin asetilkolin esteraz ve glutatyon S-transferaz enzim aktiviteleri üzerine in vitro etkilerinin araştırılması
Investigation of the in vitro effects of some antibiotics on acetylcholine esterase and glutathione S-transferase enzyme activities
GURBET ÇELİK
- Shogaol'ün antioksidan ve antiproliferatif aktivitelerinin belirlenmesi ve bazı metabolik enzimler üzerinde etkisinin araştırılması
Determination of antioxidant and antiproliferative activities of Shogaol and investigation of its effect on some metabolic enzymes
İSMAİL YAPICI
- Bazı kumarin türevleri: antioksidan kapasiteleri ve insan karbonik anhidraz izoenzimleri (hCA I ve II) ile asetilkolinesteraz enzimi üzerine etkileri
Some coumari̇n derivatives: theirs antioxidant capacities and investigation of their efects on human carbonic anhydrase izoenzymes (hCA I and II) and acetylcholinesterase enzyme
LOKMAN DURMAZ
- Glikozit biriminin antioksidan moleküllerde aktivite üzerindeki etkisi – luteolin ve luteolin glikozitlerinin biyolojik aktiviteleri üzerine karşılaştırmalı bir çalışma
The effect of glycoside unit on antioxidant molecules' activity – a comparative study on the biological activities of luteolin and luteolin glycosides
ADEM ERTÜRK
