Geri Dön

Investigation on immunoprotectivity of recombinant vaccine candidates glutamine-binding periplasmic protein and putative peptidoglycan binding-protein in mouse model

Rekombinant aşı adayları glutamin-bağlanma proteini GlnH ve pütatif periplazmik-bağlanma proteini BP0020'in immün koruyuculuğunun fare modellerinde araştırılması

PDF İndir

  1. Tez No: 371713
  2. Yazar: MUSTAFA ÇİÇEK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ, DR. ERKAN ÖZCENGİZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bordetella pertussis boğmaca (pertussis) hastalığına neden olan gram negative, kokobasil bir bakteri türüdür. 1940'lı yıllarda gerçekleştirilen yoğun aşılama çalışmaları hastalığın insidansını yüksek oranda düşürmüştür ancak B. pertussis'in insan popülasyonu içerisindeki dolaşımı tam olarak ortadan kaldırılamamıştır. İlk asiların geliştirilmesinin ardından yeni aşıların üretilmesi yönündeki çalışmalar hız kazanmıştır. Söz konusu tam hücre (Pw) ve aselüler (Pa) pertussis aşıları hayat boyu süren bir koruyuculuk sağlama açısından yetersizdirler. Bu nedenle subklinik enfeksiyonlar engellenemektedir ve bağışıklık geliştirememiş yeni doğanlar ile erişkinler açısından risk devam etmektedir. Koruyucu proteinler içeren ve yüksek immün koruyuculuk kapasitesine sahip olan daha etkin aselüler aşıların geliştirilmesi yönündeki çalışmalar günümüzde giderek hız kazanmaktadır. Periplazmik glutamin–bağlanma proteini GlnH'nin immünojenik özellikler taşıdığı grubumuz tarafından daha önce gerçekleştirilen immünoproteom çalışmalarında gösterilmişti. Buna ek olarak; varsayımsal peptidoglikan bağlayıcı protein (BP0020) daha önce yapılan çalışmalarda immün-koruyucu olduğu gösterilen proteinlerde bulunan Lysm bölgesini içermektedir. Şimdiki çalışmada söz konusu proteinlerin immün koruyuculukları fare modeli ile tespit edilmeye çalışılmıştır. GlnH ve BP0020 proteinlerini kodlayan genler B. pertussis genomik DNA'sı kullanılarak PCR yöntemi ile çoğaltılmış ve pGEM®-T Easy vektörüne klonlanıp sekanslanmıştır. İlgili genlerin Escherichia coli BL21(DE3) hücrelerinde anlatımlarının gerçekleştirilmesi için pET-28a (+) ekspresyon vektörüne yerleştirilmiştir. IPTG indüksiyon yöntemi uygulanarak rekombinant anlatımları sağlanmıştır. His-tag afinite kromatografi ve diyaliz yöntemlerinin uygulanması ile rekombinant proteinler saflaştırılıp Western blot ile doğrulukları test edildikten sonra aşılamaya hazır hale getirilmiştir. BALB/c fareleri (16-18 gr) GlnH ve BP0020 proteinlerinin her birinden 10 µg içeren kombine aşı ile 0 ve 21. günlerde aşılanmış, ardından B. pertussis Saadet hücrelerinin (2.5 x 109) kullanımı ile intranasal yolla enfekte edilmişlerdir. Farelerin B. pertussis Saadet canlı hücreleri ile enfekte edilmesini takip eden 5 ve 8. günlerde akciğer alımları gerçekleştirilmiş ve bakteriyel kolonizasyon incelenmiştir. GlnH ve BP0020 proteinlerinin her birinden 10 µg içeren kombine aşı ile immünize edilmiş farelerin akciğerlerindeki bakteri kolonizasyonu kontrol grupları ile karşılaştırıldığında oldukça düşük çıkmıştır.Seruma özgü IgG seviyelerinin ölçümü için ELISA yöntemi kullanılmıştır. ELISA sonuçlarına göre; immünize edilen farelerin IgG seviyesinde kaydadeğer bir artış gözlenmiştir. Ayrıca kontrol grupları ile ile karşılaştırıldığında aşılanmış farelerin serum IFN-γ seviyelerinin de yükselmiş olduğu gözlenmiştir.

Özet (Çeviri)

Bordetella pertussis is a gram negative coccobacillus that causes pertussis known as whooping cough. After mass-vaccination started in 1940s, incidence of the disease has decreased. However, B. pertussis circulation in population has not been prevented completely. Starting from the first vaccination, development of several vaccines have been performed. These whole cell (Pw) and acellular pertussis (Pa) vaccines are not completely effective in terms of sustained, lifelong immunity and thus failure in eliminating subclinical infections poses a threat for both unimmunized infants and adults. The requirements for more effective acellular pertussis vaccines with protective proteins have raised the number of the studies to develop vaccines with high immune protective capacities. Recently, a surface antigen, namely glutamine-binding periplasmic protein GnlH was found to be among novel immunogenic proteins as shown by our immunoproteome group. Besides; another surface antigen putative peptidoglycan binding protein BP0020 was shown to include Lysm domain which is found in some of protective immunogens. These proteins were chosen as novel recombinant vaccine candidates. In the present study these proteins were tested for their immunoprotective capacity in mouse model. In order to stimulate humoral and cellular responses against B. pertussiss infection, the genes coding for gnlH and BP0020 proteins were amplified from the genomic DNA of B. pertussis strains and cloned into pGEM®-T Easy vector and sequenced. For their expression in Escherichia coli BL21(DE3) cells, expression vector pET-28a (+) was used together with IPTG induction system. After the expression of the desired proteins His-tag affinity chromatography together with dialysis was used for the purification of the proteins. Following Western blot analysis, 10 µg of both GlnlH and BP0020 proteins were used to immunize BALB/c mice (16-18 g) at days 0 and 21. B. pertussis Saadet live cells were then administered intranasally to challenge mice. Bacterial colonization in mice was determined after the removal of the lungs at days 5 and 8. When compared to the control groups, bacterial colonization were found to be decreased in the lungs of the mice immunized with 10 µg recombinant GlnH and BP0020 proteins. ELISA for serum-specific IgG levels was performed after the collection of sera. The results showed that IgG levels were significantly higher in immunized mice. In addition; serum IFN-γ levels were found to be higher in vaccinated mice in comparision to control groups.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    35908

    Investigation on the marine turtle populations distributed in Fethiye beach

    Başlık çevirisi yok

    OĞUZ TÜRKOZAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1994

    BiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Biyoloji Eğitimi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM BARAN

  2. Tez No

    35784

    Investigation on the population of Lacerta danfordi (Reptilia: Lacertidae) distributed in Fethiye

    Başlık çevirisi yok

    MERAL MALSEVEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1994

    BiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    PROF.DR. İBRAHİM BARAN

  3. Tez No

    65493

    Investigation on the strengh of joints, welded by rutile, basic and solid wire electrodes

    Rutil, bazik elektrodları ve gözaltı teli ile yapılan kaynak dikişlerinin mukavemetlerinin incelenmesi

    AKIN AKBULUT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    Makine MühendisliğiDokuz Eylül Üniversitesi

    PROF. DR. SÜLEYMAN KARADENİZ

  4. Tez No

    77245

    Investigation on the neotectonic of west Anatolian-Aegean Sea using geophysical methods (case study İzmir bay)

    Batı Anadolu-Ege Denizi neotektoniğinin jeofizik yöntemlerle incelenmesi (İzmir-Körfezi örneğinde)

    CEM İBRAHİM GÜNAY

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    Su ÜrünleriDokuz Eylül Üniversitesi

    Deniz Bilimleri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ATİLLA ULUĞ

  5. Tez No

    93242

    Investigation on the kinetics of gypsum formation in the reaction of boric acid production from colemanite and sulphuric acid

    Kolemanit ve sülfürik asit'ten borik asit üretimi esnasında jips oluşum kinetiğinin araştırılması

    ERDOĞAN ÇETİN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2000

    Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İNCİ EROĞLU

Geri Dön