Contribution of notch signaling on hcc stem cell status and utilizing TLR agonists and notch inhibition to improve HCC therapy
Notch yolağının hcc kök hücrelerine katkısı ve HCC tedavisi için TLR ulaklarıyla notch baskılamasının kullanılması
- Tez No: 373009
- Danışmanlar: PROF. DR. İHSAN GÜRSEL, PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2014
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 113
Özet
Hepatosellüler karsinom (HSK) dünya genelinde en sık görülen kanserler sıralamasında yedinci, kanser kaynaklı ölümler göz önünde bulundurulduğunda ise üçüncü sırada yer almaktadır. Birçok solid tümörde görüldüğü gibi, HSK tümörlerinde de bir kanser kök hücresi altpopulasyonu barındırdığı bilinmektedir. Bu nedenle, HSK tümörlerinin radyoterapi ve kemoterapiye direnç geliştirmeleri bu kanser kök hücrelerinin düzeyleriyle sağlanmakta olduğu düşünülmektedir. Günümüzde HSK tedavisi için en etkin yol karaciğer naklidir. Ne yazık ki, uygun donör azlığı bu yaklaşımın etkin sağaltım sağlamasını sınırlı kılmaktadır. Bu bağlamda, karaciğer kanseri kök hücre altgruplarıın düzeyini belirleyip miktarını azaltacak stratejiler geliştirmek, etkili tedavi yöntemleri geliştirilmesine önemli katkılarda bulunacaktır. Bu çalışmada, HSK kökenli 17 hücre hattı kullanılarak bir kanser kök hücresi paneli oluşturulmuştur. İmmünoperoksidaz ve Akım Sitometresi tenikleriyle gerçekleştirilen tarama sonunda altı KKH'nın kabul edilen bir kanser kök hücresi (KKH) markörü olan CD133 ifadesi bakımından oldukça pozitif olduğu saptanmıştır. Daha sonra üç hücre hattı HepG2, Huh7 ve Hep3B-TR (TGF-beta-1 almaçı duyarsızlaştırılmış) seçilerek Notch yolağının etkinleştirilmesi veya bastırılması, kök hücre altgrubu düzeyine olan etkisi belirlenmiştir.. Elimizdeki veriler, Huh7 ve HepG2 hücre hatlarının DAPT (bir tür gamma-sekretaz inhibitörü) ile muamelesi sonucunda CD133+/EpCAM+ KKH altpopulasyonun yarı yarıya azaldığını, buna karşın Hep3B-TR hücrelerinde herhangi bir değişim saptanmadığı gözlenmiştir. Bu veriler, TGFβ1 reseptörünün KKH oluşumunda ve devamlılığında rolü olabileceği ihtimalini önermektedir. Seçilen hücre hatlarının Jagged-1 (Notch ligandı) ile muamelesi sonucunda ise KKH altpopulasyonu üzerine bir etki oluşturmamıştır. Bu hücre hatlarının bazal toll-benzeri reseptör (TLR) ifade düzeyleri PZR metoduyla incelendiğinde, TLR5 ve TLR7 transkriptlerinin yüksek olduğu bulunmuştur. Bu ulaklarla hücreleri muamele edilince de, TLR3, 7/8 ve 9 genlerinin daha fazla arttırdığı gözlenmiştir. Bu sonuçların ışığında Notch inhibitörüyle, TLR ulaklarının kullanıldığı bir kombine tedavinin HSK tümörü geliştirilmiş atimik farede denenmesi planlanmıştır. Çalışmanın son bölümünde, Huh7 hücreleri farelere zenograft edilerek, ya sadece TLR ligand kokteyli, veya DAPT eklenmiş şekilde, iki kez peritümöral enjeksiyonu sonunda (bir hafta arayla) tümör düzeyleri takip edilmiştir. Sonuç olarak, TLR3, TLR7/8 ve TLR9 ligandlarının DAPT ile kombine terapisinin uygulandığı hayvanlardaki tümör boyutlarının önemli derecede gerilediği bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the seventh most common cancer type worldwide, and ranked third place among cancer-related deaths within both sexes. As in many solid tumors, HCC shelters a cancer stem cell subpopulation, and is held responsible for the resistance developed during chemo-and-radio-therapy of HCC. The only option to cure HCC is liver transplantation, which is the bottleneck to provide a remedy to patients due to limited availability. Understanding the stem cell behavior of HCC would critically contribute to develop effective eradication strategies. In this study, a panel of 17 HCC cell lines was evaluated for their CSC status. Of these cell lines, six of them were determined to be positive for CD133 expression, a cardinal CSC marker. Next, HepG2, Huh7 and Hep3B-TR, (a desensitized TGF-beta-1 receptor clone) were selected and Notch activity vs. CSC fraction was investigated by analyzing CD133+/EpCAM+ levels. Our results revealed that DAPT (a notch inhibitor) led to a drop in CD133+/EpCAM+ levels in HepG2 and Huh7 by half, but not in Hep3B-TR cells, implicating a possible TGFβ1R involvement on CSC generation/maintenance. Treatment of cells with a notch ligand, Jagged-1, however, had little or no positive effect on CD133+/EpCAM+ expressions in all tested cells. Additionally, HCC cells' response to different TLR ligands and the resulting transcript expressions of TLRs were investigated by PCR. Of note, TLRs are widely used in immunotherapy of cancers. Here we aimed to combine Notch inhibitor along with selected TLR ligand, thereby improving tumor clearance in athymic mice xenografted with HCC. We found that in three selected cell lines upon TLR2 ligand stimulation, TLR5 and TLR7 were highly upregulated. Afterwards, treating these HCC cell lines with these ligands we observed that TLR3, TLR7/8 and TLR9 levels were activated. In the final part of this study, tumor-bearing mice with Huh7, were subjected to a combination therapy with TLR ligands +/- DAPT. We demonstrated that combination therapy comprising TLR3, 7/8 and 9 ligands and DAPT (only two injections, a week apart) induced significant tumor regression.
Benzer Tezler
- Expression of notch signaling pathway receptors and ligands in human breast cancer cell lines and human breast tumors
İnsan meme kanseri hücre hatlarında ve meme tümörlerinde notch yolağı reseptör ve ligandlarının ekspresyonu
ÖZDEN YALÇIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2004
Tıbbi Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Ksenograft kolorektal kanserde notch, IL-1 ve leptin (NILCO) inhibisyonunun etkisi
Başlık çevirisi yok
RUMEYSA ÖZYURT
Doktora
Türkçe
2019
FizyolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiFizyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİLÜFER ERKASAP
- The investigation of angiogenic mechanisms associated with miRNA-126 signalling pathway molecules in atherosclerosis
Aterosklerozda miRNA-126 sinyal yolağı molekülleri ile ilişkili mekanizmaların araştırılması
ÇİĞDEM SEZER ZHMUROV
Doktora
İngilizce
2016
Bilim ve Teknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN BERMEK
DOÇ. DR. TUNÇ ÇATAL
- Kablo TV sistemi koaksiyonel dağıtım elemanlarında işaret seviyelerinin bulunması
Başlık çevirisi yok
AYTEN KARAHAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1998
Elektrik ve Elektronik Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiElektronik ve Haberleşme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Negative regulation of müller reprogramming by SIK2
Müller programlamanın SIK2 ile negatif kontrolü
ASLI UĞURLU
Doktora
İngilizce
2016
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KOYAŞ BİLGE