Geri Dön

Bacillus thuringiensis SY49-1 suşuna ait cry1 ve cry2 genlerinin klonlanması, ifadesi ve böcek öldürücü etkilerinin belirlenmesi

Cloning, expression and insecticidal activity of cry1 and cry2 genes from bacillus thuringiensis SY49-1 strain

PDF İndir

  1. Tez No: 377186
  2. Yazar: UĞUR AZİZOĞLU
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ, DOÇ. DR. SEMİH YILMAZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Bt SY49-1, Gen klonlama, Rekombinant Cry1Ab ve Cry2 proteini, E. kuehniella, C. pipiens İnsektisidal aktivite, Bt SY49-1, Gene clonning, Recombinant Cry1Ab and Cry2 proteins, E. kuehniella, C. pipiens, Insecticidal activity
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 173

Özet

Bacillus thuringiensis (Bt) birçok zararlı böcek üzerinde toksik etki gösteren gram pozitif bir bakteridir. Bt'in birçok suşu birden fazla cry gen bulundurur ve farklı konukçu spektrumuna sahiptir. Bu çalışmaya konu olan Bt SY49-1 suşu cry1, cry2, cry4, cry5 ve cry9 olmak üzere beş adet cry gen taşımaktadır. Bu çalışma Ephestia kuehniella ve Culex pipiens larvalarına karşı cry1 ve cry2 gen ürünlerinin toksisite seviyelerini belirlemek için planlanmıştır. Bu nedenle Bt SY49-1 suşunun cry1Ab ve cry2 genleri pET28a(+) ifade vektörüne ligasyon yapılarak pET-cry1Ab ve pET-cry2 rekombinant plazmitleri elde edilmiştir. Bu plazmitler CaCl2 metodu ile kompetan hale getirilmiş E. coli BL21(DE3) suşuna aktarılmıştır. Bu genlerin E. coli BL21(DE3) suşunda ifadesini güçlendirmek amacıyla IPTG indüklemesi yapılmıştır. İndükleme sonucunda sırasıyla ~130 ve ~70 kDa büyüklüğünde rekombinant Cry1Ab ve Cry2 proteinleri elde edilmiştir. Yapılan aktivite denemlerinde E. kuehniella larvalarına karşı Cry1Ab ve Cry2 toksinlerinin 1000 µg\g'lık dozu % 64 oranında ölüme sebep olmuştur. Aynı toksinler eşit hacimde karıştırılıp (Cry1Ab+Cry2) uygulandığında ise % 65 oranında ölüm meydana gelmiştir. Bt SY49-1 suşunun spor-kristal karışımının aynı dozu uygulandığında ise larvaların % 90'ı ölmüştür. Plazmit taşımayan E. coli BL21(DE3) uygulandığında ise aynı dozda önemli bir ölüm oranı (% 10) gözlenmemiştir. Bt SY49-1 spor-kristal karışımının 500 µg\ml'lik dozu C. pipiens larvalarının tamamına yakınını (% 97) öldürmüşken, rekombinant Cry2 proteini ve E. coli BL21 (DE3) suşu aynı zararlı üzerinde sırasıyla % 37 ve % 10 oranında ölüme neden olmuştur.

Özet (Çeviri)

Bacillus thuringiensis (Bt) is a gram positive soil bacteria and has insecticidal activity against many important insect pests. Many strains of the Bt may harbour more than one cry genes and has different host spectrum. Bacilus thuringiensis SY49-1 strain , used in this study, has five cry genes being cry1, cry2, cry4, cry5 and cry9. This study has planned to determine the toxicity levels of cry1Ab and cry2 genes against Ephestia kuehniella and Culex pipiens larvae. For this purpose pET-cry1Ab and pET-cry2 recombinant plasmids were constructed thorugh ligating the cry1Ab and cry2 genes of Bt SY49.1 strain into pET28a(+) expression vector. Consequently, the recombinant plasmids were transfered to E. coli BL21(DE3) strain rendered competent with CaCl2 method. IPTG induction was carried out to improve the expression of the genes in E. coli BL21(DE3). As a result of induction ~130 and ~70 kDa Cry1Ab and Cry2 proteins were obtained, respectively. The bioassay results indicated that recombinant Cry1Ab and Cry2 toxins at dose of 1000 µg\g caused 64 % mortality on E. kuehniella larvae. When the same proteins were mixed (Cry1Ab+Cry2) at the equal amount and applied to the same pest, 65 % mortality rates were obtained. However, the same dose of spor crystal mixture of the Bt SY49-1 strain caused 90 % mortality. Plasmid free E. coli BL21(DE3) strain used as controls did not cause significant mortality (% 10) at the same dose. In the bioassay conducted with C. pipiens, while 500 µg\ml dose of Bt SY49-1 spor-crystal mixture caused nearly complate mortality (97 %), recombinant Cry2 and E. coli BL21 (DE3) strains had only 37 % and 10 % mortality, respectively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    484355

    Bacillus cinsine ait yerel bakteri izolatlarında kitinaz genlerinin taranması ve bu izolatların antifungal aktivitelerinin araştırılması

    Screening of chitinase genes from local Bacillus isolates and testing their antifungal activity

    ZEHRA BÜŞRA AZİZOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ

  2. Tez No

    387478

    Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki ve Bt SY49.1 suşlarının farklı yetiştirme koşullarındaki spor kristal konsantrasyonlarının ve protein profillerinin araştırılması

    Investigation of spore crystal concentration and protein profiles of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and Bt SY49.1 strains in different growth conditions

    ENFAL ÇÖMLEKÇİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ

    DOÇ. DR. SEMİH YILMAZ

  3. Tez No

    266002

    Çeşitli habitatlardan izole edilen Bacillus thuringiensis suşlarının moleküler karakterizasyonu ve bazı zararlı böceklere karşı mücadelede kullanımı

    Molecular characterization of Bacillus thuringiensis strains isolated from different locations and their effectiveness on some pest insects

    SEMİH YILMAZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ

    YRD. DOÇ. DR. MİKAİL AKBULUT

  4. Tez No

    759142

    Biocontrol studies on fall webworm (Hyphantria cunea Drury) by using the spore-cry toxins of the Bacillus thuringiensis strains from Turkey

    Amerikan beyaz kelebeğinin (Hyphantria cunea Drury) biyokontrolü amacıyla Türkiye'den izole edilen Bacillus thuringiensis (Bt) suşlarının spor-cry toksinlerinin kullanımı üzerine araştırımalar

    ESRAA MAHDI SALEH AL-OBAIDI

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    ZiraatErciyes Üniversitesi

    Tarım Bilimleri ve Teknolojileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ İRFAN İLBAŞ

    PROF. DR. SEMİH YILMAZ

  5. Tez No

    438897

    Çeşitli Bacillus thurigensis şuşlarına ait spor kristal karışımlarının un güvesi Ephestia kuehniella'nın farklı yaşlardaki larvaları üzerine etkilerinin incelenmesi

    Effects of spore crystal mixtures of different Bacillus thuringiensis strains on different stages of the Ephestia kuehniella larvae

    RASHA ABDULATEEF QAYS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ

Geri Dön