Bacıllus fitazının klonlanması ve ekspresyonu
Bacillus fitazinin klonlanmasi ve ekspresyonu
- Tez No: 377278
- Danışmanlar: PROF. DR. SADIK DİNÇER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Genetik, Biology, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Fitaz, pET22b, Bacillus subtilis, klonlama, phytase, pET22b, Bacillus subtilis, cloning
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 79
Özet
Fitaz enzimi fitatın fosfomonoester bağını hidrolize ederek myo-inositol fosfat ve inorganik fosfatın ortaya çıkmasına sebep olur. Hayvanların büyümeleri, üremeleri ve kemiklerinin şekillenmesi için önemli minerallerden biri fosfordur. Yapılan bu araştırmada fitaz aktivitesine sahip olan doğal Bacillus sp. biyokimyasal ve 16srDNA sekans analizi ile Bacillus subtilis olarak tanımlanmıştır. Primerler NCBI sitesinde olan Bacillus subtilis bakterisinin fitazına göre dizayn edilmiştir. PCR amplifikasyonundan sonra fitaz geni ekspresyon vektörü olan pET22b vektörüne ligasyonu yapılmıştır ve Rekombinanat vektör ısı şoku metodu ile E. coli Rosetta 2(DE3) pLysS bakterisine aktarılmıştır. Kullanılan PCR ürünü ve vektör ligasyonu yapılmadan önce Hind III ve BamH1 enzimleri ile kesimleri gerçekleştirilmiştir. Rekombinant fitaz 37oC, pH 7'de optimum aktivite göstermiştir. Enzimin 60oC'de aktivitesinin %73'nü ve 100 oC'de ise aktivitesinin %5'ni korumuştur. Enzim pH 5.8-8 aralığında stabildir. Rekombinant enzimin aktivitesi 5mM CoCl2 ile artmıştır ama MgCl2, CuCl2, HgCl2, NiCl2, MnCl2, FeCl2 ve EDTA ile aktivitesi düşmüştür. Rekombinant fitazın moleküler ağırlığı SDS-PAGE analizi ile 45 kDa olarak belirlenmiştir. Bu araştırmanın sonuçlarına göre elde edilen rekombinant fitazın yem katkısı olarak kullanılabilirliği ortaya konulmuştur.
Özet (Çeviri)
Phytases catalyze the hydrolysis of phosphomonoester bonds of phytate (myo-inositol hexakisphosphate), thereby creating lower forms of myo-inositol phosphates and inorganic phosphate. Phosphorus is one of the necessary mineral nutrients for animals during their growth, reproduction and calcification of the bones. In this research, one native Bacillus sp. isolate containing phytase activity was identified as a Bacillus subtilis by biochemical and 16srDNA sequence analysis. Primer pairs were designed according to phytase gene sequence of Bacillus subtilis present in NCBI web site. After amplification by PCR the gene was ligated to pET22b vector as expression vector and transformed to E. coli Rosetta 2(DE3) pLysS by heat shock method. In preparation of PCR product and vector for ligation two restriction enzymes (Hind III and BamH1) were used. The optimum activity of recombinant phytase was emerged at 37oC and pH 7. Thermo stability with more than 73% residual activity at 60oC, and about 5% residual activity at 100∘C. The enzyme was stable over the pH range of 5.8 to 8. Recombinant phytase activity significantly stimulated with 5mM CoCl2, but decreased activity with MgCl2, CuCl2, HgCl2, NiCl2, MnCl2, FeCl2 and EDTA. Molecular weight of recombinant phytase was estimated as 45 kDa on SDS-PAGE analysis. These results of this study showed that, recombinant phytase could be an interesting candidate for feed applications.
Benzer Tezler
- Termofilik Bacillus Licheniformis bakterisinden fitaz enzim üretimi
Production of fi̇tase enzyme from thermophilic Bacillus Licheniformis bacteria
SERAP ŞABAHAT
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyomühendislikKafkas ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ CEM ÖZİÇ
- Role of growth phase in physiochemical properties and adhesion capacities of Escherichia coli and Bacillus subtilis cells at the nano- and macro- scales
Büyüme fazinin Escherichia coli ve Bacillus subtilis hücrelerinin fizyokimyasal özelliklerinde ve adezyon kapasitelerindeki rolünün nano ve makro ölçekte incelenmesi
GAMZE NUR ASPAR
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
Biyofizikİzmir Ekonomi ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA PINAR GÖRDESLİ DUATEPE
- Toprak bakterilerinden izole edilen fitazların özellikleri
Characterization of phytases isolated from soil bacteria
ESEN BİLGİN
- Doğal Bacillus thuringiensis suşlarının bakteriyosin benzeri peptid üretim potansiyellerinin araştırılması
Investigation of bacteriocin-like peptide production potentials of natural Bacillus thuringiensis strains
SARAH BASIM JAWAD AL- BAGHDADI
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyolojiMuğla Sıtkı Koçman ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE GÜNEŞ
- Modelling of malic acid production in Bacillus methanolicus MGA3 and technoeconomic analysis
Bacillus methanolicus MGA3'te malik asit üretiminin modellenmesi ve teknoekonomik analizi
GÜLSÜM MERVE BASTEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyomühendislikMarmara ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERNA SARIYAR AKBULUT
DOÇ. DR. NİHAT ALPAGU SAYAR