Geri Dön

Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması glutaraldehit ile immobilizasyonu ve bazı ağır metallere karşı ilgisinin araştırılması

Purification of lactoperoxidase, immobilization with glutaraldehyde of lactoperoxidase and investigation of some heavy metals effects onto the enzyme affinity

PDF İndir

  1. Tez No: 395610
  2. Yazar: HESNA ECEM SAYIT
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. SERAP UZUNOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bu çalışmada laktoperoksidaz enzimi afinite kromatografisi tekniğine göre Oktay Arslan tarafından sentezlenen CNBr ile aktive edilmiş Sepharose-4B-L-trozin-sülfanilamid kimyasal yapısına sahip afinite kolonu kullanılarak işlem görmemiş inek sütünden saflaştırılmış ve gluteraldehit ile immobilizasyonu sağlanmıştır. Amonyum sülfat çöktürmesi ve afinite kromatografisi ile saflaştırılan laktoperoksidaz enzimi % 28,69 verimle ve 407,94 saflaştırma derecesi ile elde edilmiştir. Enzimin saflığı SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiş ve 78 kDa civarında tek bant gözlenmiştir. Laktoperoksidaz enziminin kinetik sabitleri (KM ve Vmax ) 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin–6-Sülfonik asit) (ABTS) bileşiği substrat olarak kullanılarak belirlenmiştir ve Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilen KM ve Vmax değerleri sırasıyla 2x10-3M ve 5000 U/mldak olarak bulunmuştur. CoCl2, CuSO4, MgSO4, CdCl2, NiCl2, HgCl2, MnCl2, FeCl3, bileşikleri ile laktoperoksidaz enzimi üzerindeki in vitro etkileri araştırılmıştır. Çalışılan bileşiklerden inhibisyona neden olan bileşiklerin IC50 değerleri CoCl2 için 5,11 x10-4M, CuSO4 için 7,70x10-4M, CdCl2 için 4,63x10-4M, NiCl2 için 8,00 x10-4M, HgCl2 1,29 x10-4M ve FeCl3 5,08 x10-4M olarak bulunmuştur. Ayrıca MgSO4 ve MnCl2 bileşikleri laktoperoksidaz enziminin aktivitesini artırmışlardır. Enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 12 gluteraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. İmmobilize enzimin kinetik sabitleri, ABTS bileşiği substrat olarak kullanılarak Lineweaver-Burk grafiğinden elde edilmiştir. KM ve Vmax değerleri sırasıyla 1,67x10-3 M ve 3333,33 U/mL.dak olarak bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

In this study, the enzyme Lactoperoxidase was purified by Sepharose-4B-L-tyrosine-sulfonamide. This gel synthesized by Arslan O. according to affinity chromatography technique. Lactoperoxidase was purified and immobilization on glutaraldehyde was investigated. Lactoperoxidase which was purified by ammonium sulfate precipitation and affinity chromatography was obtained with 28,69 % yield and 407,94 degree of purification. Purity of the enzyme was checked by SDS polyacrylamide gel electrophoresis and a single band was observed around 78 kDa. Lactoperoxidase enzyme kinetic constants (KM and Vmax) were determined by using 2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin–6-Sülfonik asit) (ABTS) compound as substrate. KM and Vmax values obtained from the Lineweaver-Burk graph were 2x10-3M and 5000 U/ml.min respectively. In vitro effects of CoCl2, CuSO4, MgSO4, CdCl2, NiCl2, HgCl2, MnCl2, FeCl3 compounds on xanthine oxidase enzyme were investigated and IC50 values were 5,11 x10-4M for CoCl2, 7,70x10-4M for CuSO4, 4,63x10-4M for CdCl2, 8,00 x10-4M for NiCl2, 1,29 x10-4M for HgCl2 and 5,08 x10-4M for FeCl3. In addition, MgSO4 and MnCl2 were increased the enzyme activity. The enzyme was immobilized on different percentages of glutaraldehyde and maximum enzyme activity of the immobilized enzyme was observed in the rate of 12 % glutaraldehyde. Immobilized enzyme's kinetic constants were obtained from Lineweaver-Burk graph using ABTS compound as substrate. KM and Vmax values were found 67x10-3 M and 3333,33 U / mL.min respectively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    16594

    Değişik tür çiğ sütlerin dayanıklılığının artırılmasında laktoperoksidaz sisteminden yararlanma olanakları üzerinde araştırılması

    Enhancing the keeping quality of different raw milk by activation of the lactoperoxide system

    ZEHRA SAVCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1991

    Gıda MühendisliğiAnkara Üniversitesi

    PROF.DR. EMEL SEZGİN

  2. Tez No

    30148

    Ankara bölgesi çiftliklerinden alınan sütlerde tiyosiyanat miktarları ve kimyasal kalite kontrolleri üzerinde araştırmalar

    Research on the amounts of thiocyanates and chemical quality controls in the milks from Ankara region farms

    AYTEN AKDOĞAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1995

    Veteriner HekimliğiGazi Üniversitesi

    Eczacılık Temel Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYSEL BAYHAN

  3. Tez No

    47818

    Koyun sütünün farklı yöntemlerle muhafazası

    Preservation of sheep (ewe) milk by dipperent methods

    BİRGÜL ÖZTÜRKLER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1996

    ZiraatAnkara Üniversitesi

    PROF.DR. CELALETTİN KOÇAK

  4. Tez No

    47748

    Değişik kaynaklardan elde edilmiş amilazlara uygun ekmek üretim koşullarının saptanması

    Determination of suitable bread making conditions for analyses from various sources

    ÖZDEN ÖZ (DOKUYUCU)

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    Gıda MühendisliğiAnkara Üniversitesi

    PROF.DR. HAZIM ÖZKAYA

  5. Tez No

    57911

    Çiğ süt korumasında laktoperoksidaz sisteminin kullanımı

    Başlık çevirisi yok

    AYŞE ARZU AKKAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1996

    Gıda MühendisliğiMersin Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NAFİ ÇOKSÖYLER

Geri Dön