Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of lactoperoxdase enzyme from bovinemilk and investigation of some kinetics properties
- Tez No: 96435
- Danışmanlar: PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2000
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 47
Özet
ÖZET Laktoperoksidaz enzimi (LPO) (E.C. 1.1 1.1.7), sığır sütünden kromatografik ve biyokimyasal yöntemler kullanılarak saflaştınlmış ve bazı kinetik özellikleri araştırılmıştır. Laktoperoksidaz enziminin sığır sütünden saflaştırılması için aşağıdaki prosedürler takip edildi: Amberlite CG-50 H* reçinesiyle kısmı saflaştırma, % 0-90 doygunlukta I.amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz, CM-Sephadex C-50 iyon değişim kromatografisi, % 0-90 doygunlukta n.amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz, Sephadex G-100 jel filtrasyon kromatografisi, % 0-90 doygunlukta Ill.amonyum sülfat çöktürmesi ve diyaliz. Enzim saflığı, sodyum dodesilsülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yöntemi ile kontrol edildi. Laktoperoksidaz enzimi, saflaştırma işlemleri sonucunda 1 litre yağı alınmış taze sütten 11,6 kat saflaştınldı ve 6,7 mg (Rz=0,7) elde edildi. Enzim saflaştırılması esnasında aktivite tayinleri için olan 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin-6-sülfonik asit) (ABTS) substratı (S4i2nm = 32400 M-1 cm“1) kullamldı. Substrat olarak ; p-fenilendiamin, ABTS, epinefrin, pirogallol ve katekol seçildi. Optimum pH değerleri p-fenilendiamin ve katekol için 7,5 ; ABTS için 6,0 ; pirogallol için 6,8 ve epinefrin için 8 olarak bulundu. Optimum sıcaklık değerleri; p-fenilendiamin için 45°C, ABTS için 42°C, epinefrin için 50°C, pirogallol için 60°C ve katekol için 45°C olarak bulundu. Optimum pH ve 20°C'da substratlann Km değerleri, p-fenilendiamin, ABTS, epinefrin, pirogallol ve katekol substratlan için sırasıyla; 0,197mM, 0,063 mM, 0,64 mM, 25,2 mM ve 63,95 mM olarak bulundu. p-Fenilendiamin, ABTS, epinefrin, pirogallol ve katekol substratlan için Vmax değeri sırasıyla; 3,5xl0”5 EU/ml, 4,0xl0"5 EU/ml, 5,8x10^* EU/ml, 8,4x1ü-4 EU/ml ve l,01xl0'3 EU/ml olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
11 SUMMARY Lactoperoxidase enzyme (LPO)(E.C. 1.1 1.1.7), from bovine milk,.“ was purified by chromatographic and biochemical techniques and its kinetic features were investigated. The following steps were applied for the purification of lactoperoxidase enzyme: partial purification with Amberlite CG-50 H* resine, I.ammonium sulfate precipitation by using 0-90 % saturated ammonium sulfate and dialysis, CM-Sephadex C-50 ion-exchange chromatography, Il.ammonium sulfate precipitation by using 0-90 % saturated ammonium sulfate and dialysis, Sephadex G-100 jel filtration chromatography, Il.ammonium sulfate precipitation by using 0-90 % saturated ammonium sulfate, and dialysis. Enzyme purity was controlled with sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Lactoperoxidase enzyme was purified 11.6 times from 1 liter defatted milk and 6.7 mg of enzyme was obtained. 2,2'-azino-bis (3-etilbenztiazolin-6-sulfonik asit) (ABTS) substrate (E4i2nm = 32400 M*1 cm”1) was used for the enzyme activity assays during enzyme purification i processes; As substrates, p-phenylendiamine, ABTS, epinefrin, pyrogallol, and catechol were choosen. The values of optimum pH were 7.5 for p-phenylendiamine and catechol, 6.0 for ABTS, 6.8 for pyrogallol, and 8.0 for epinefrin. The values of optimum temperature were 45°C for p- phenylendiamine, 42°C for ABTS, 50°C for epinefrin, 60°C for pyrogallol, and 45°C for catechol. Km values at optimum pH and 20°C were 0.197mM, 0.063 mM, 0.64 mM, 25.2 mM ve 63.95 mM for p-phenylendiamine, ABTS, epinefrin, pyrogallol, and catechol, respectively. Vmax values at optimum pH and 20°C were 3.5xl0“5 EU/ml, 4.0xl0”5 EU/ml, 5.8X10“4 EU/ml, 8.4x10^* EU/ml ve l.OlxlO”3 EU/ml for p-phenylendiamine, ABTS, epinefrin, pyrogallol, and catechol, respectively.
Benzer Tezler
- Sığır sütünden laktoperoksidaz (LPO) enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaçlara karşı kinetik özelliklerinin belirlenmesi ve bazı patojen mikroorganizmalara karşı antibakteriyal ve antifungal etkisinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase (LPO) from bovine milk, and investigation of its kinetic LPO behavior for some drungs and its antibacterial and antifungal activities againts some patogenic microorganisms
METİN TANSU UĞUZ
- Sığır sütünden saflaştırılan laktoperoksidaz enziminin bazı ilaçlar ve aktif katyonlara karşı kinetik özelliklerinin belirlenmesi
Determination of kinetic properties of lactoperoxidase purified from bovine milk against active cation and some drugs
AYŞE ÖZKAN YILDIRIM
- Laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı bileşiklerin bu enzim üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme and investigation effects of some compounds on this enzyme
BESTE ŞİPAL
Doktora
Türkçe
2016
BiyokimyaBalıkesir ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. SEMRA IŞIK
DOÇ. DR. SERAP BEYAZTAŞ UZUNOĞLU
- Farklı memeli sütlerinden laktoperoksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, suda çözünen organik çözücülerdeki davranışı, sekonder ve tersiyer hidroperoksitleri indirgeme kinetiğinin incelenmesi
Purification and characterization of lactoperoxidase from different mammalians milk: Investigation of LPO behavior in water-misciple solvents and reduction kinetics of seconder and tertiary hydroperoxides
HALİL İBRAHİM HACIBEYOĞLU
Doktora
Türkçe
2002
KimyaAtatürk ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. Ö. İRFAN KÜFREVİOĞLU
YRD. DOÇ. DR. HAMDULLAH KILIÇ
- Laktoperoksidaz enziminin kefirden afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması ve bazı kimyasallar üzerine etkilerinin araştırılması
Purification of lactoperoxidase enzyme from kefir by affinity chromatography technique and investigation of its effects on some chemicals
ÖZLEM ALBAYRAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Eczacılık ve FarmakolojiSüleyman Demirel Üniversitesiİlaç Araştırma ve Geliştirme Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BAŞAK GÖKÇE