Prolin-spesifik endopeptidazların saflaştırılması, karakterizasyonu ve proteolitik proseslerde kullanım potansiyelinin araştırılması
The purification, characterization and potential biological applications of proline-spesific endopeptidases
- Tez No: 405284
- Danışmanlar: PROF. DR. FİGEN ZİHNİOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Serin proteaz, Prolil oligopeptidaz, Bioaktif peptid, 6‐trinitrobenzen sülfonik asit, Serine protease, Prolyl oligopeptidase, Bioactive peptides, 6‐trinitrobenzene sulfonic acid
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 220
Özet
Prolil oligopeptidaz (POP, EC 3.4.21.26) prolin içeren küçük biyolojik peptidleri hidrolizleyen sitozolik bir serin proteazdır. Prolil oligopeptidaz ailesinin üyeleri, nörodejeneratif hastalıklar, peptid hormonları ve nöro peptidlerin yapımı ve yıkımı, öğrenme ve hafıza, DNA sentezi, hücre farklılılaşması ve sinyal iletimi gibi bazı fizyolojik proseslerde önemli rol oynarlar. Bu nedenle teröpatik olarak potansiyel kullanımını açıklayabilmek için çeşitli kaynaklardan saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir. Bu çalışmada E.coli'den eksprese edilen rekombinant Myxococcus xanthus Prolil oligopeptidaz metal-şelat affinite ve jel filtrasyon kromatografisi kullanılarak 224 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin molekül kütlesi 70 kDa (monomerik) ve izoelektrik noktası 6.3 olarak belirlendi. Optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 7.5 ve 37°C olarak bulundu. Z-Pro-Prolinal ve PMSF gibi çeşitli serin proteaz inhibitörlerinin enzim aktivitesini inhibe ettiği görüldü. Ayrıca saflaştırılan enzimin substrat spesifikliği (sentetik/doğal) ve stabilitesi (termal, pH ve depo kararlılığı) araştırıldı. Elde edilen sonuçlardan Myxococcus xanthus'dan saflaştırılan Prolil oligopeptidazın diğer kaynaklardan elde edilen prolil oligopeptidazlar ile benzerlik gösterdiği görülmektedir. Enzimin potansiyel kullanımı buğday gluten ununun hidrolizi ile test edildi. Bu amaçla buğday gluteni, koşullar optimize edildikten sonra Prolil oligopeptidaz enzimi ile enzimatik hidrolize maruz bırakıldı. Açığa çıkan gluten hidrolizatının antioksidan antimikrobiyal, tripsin ve prolil oligopeptidaz inhibisyon aktiviteleri araştırıldı.
Özet (Çeviri)
Prolyl oligopeptidase (POP, EC 3.4.21.26) is a cytosolic serine protease that hydrolyses proline containing small biological peptides. The members of prolyl oligopeptidase family play important roles in many physiological processes such as neurodegenerative diseases, maturation and degradation of peptide hormones and neuropeptides, learning and memory, DNA synthesis, cell differentiation and signal transduction. Thus the enzyme has been purified and characterized from various sources to elucidate the potential use as therapeutics. In this study recombinant Myxococcus xanthus Prolyl oligopeptidase expressed in E.coli was purified 224 fold, using metal-chelate affinity and gel permeation chromatography. The purified enzyme exhibited a monomeric molecular weight of 70 kDa, and an isoelectric point of 6.3. The optimum pH and temperature was estimated as 7.5 and 37°C, respectively. Enzyme activity was inhibited by various serin protease inhibitors such as Z-Pro-Prolinal and PMSF. Furthermore the substrate specificity (synthetic/natural) and the stability (thermal, pH and storage stability) of the purified enzyme were also investigated. The data showed that the Myxococcus xanthus Prolyl oligopeptidase is similar to Prolyl oligopeptidase isolated from other sources. The potential use of the enzyme was tested by the hydrolysis of the wheat gluten. For this purpose wheat gluten was subjected to enzymatic hydrolysis with Prolyl oligopeptidase, after optimizing the conditions. The resulting gluten hydrolysate were characterized by means of their antioxidant, antibacterial, trypsin inhibition and Prolyl oligopeptidase inhibition activities.
Benzer Tezler
- Designing of L-proline specific nanoparticles for L-proline detection from human serum
İnsan serumundan L-prolin tespiti için L-prolin spesifik nanopartiküllerin tasarlanması
MUSTAFA NERGİZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyomühendislikAdana Alparslan Türkeş Bilim Ve Teknoloji ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖZDE BAYDEMİR PEŞİNT
- Prolin bazlı yeni sentetik organokatalizörler
Proline based new synthetic organocatalysts
TOLGA ACAR YEŞİL
Doktora
Türkçe
2020
KimyaSüleyman Demirel ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA YAVUZ
DOÇ. DR. ERKAN ERTÜRK
- L-prolin graft edilmiş poli(HEMA) nanopolimerinin radyoaktif işaretlenmesi ve deney hayvanları üzerinde in vivo değerlendirilmesi
Radioactive labeling of L-proline-graft-poly (HEMA) nanopolymer and in vivo evaluation on experimental animals
TANER TÜRKYARAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
KimyaManisa Celal Bayar ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UĞUR AVCIBAŞI
- Sığır karaciğer arginazının kısmen saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin araştırılması
Partial purification of bovine liver arginase and investigation of some kinetic properties
AYŞEGÜL AKBAY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1997
BiyokimyaAnkara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSMAİL HAKKI GÖKHUN
- Mannheimia haemolytica'dan lökotoksin üretimi için yeni besiyeri tasarımı ve ürün karakterizasyonu
Design of new medium for the production of Mannheimia haemolytica leukotoxin and its characterization
HAJIR HAJIR BADAWI MOHAMMED AHMED