Geri Dön

Mikrobiyal kökenli proteaz üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

The production, prufication and characterization of microbial orginated protease

PDF İndir

  1. Tez No: 411280
  2. Yazar: MESUT TOLAN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. BİLGE HİLAL ÇADIRCI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biochemistry, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 121

Özet

Bu çalışmada proteaz üreticisi mikroorganizmalar topraktan izole edilmiş ve kalitatif olarak en yüksek proteolitik aktivite gösterdiği belirlenen suş, 16S rRNA dizi analizi ile Bacillus sp. olarak tanılanmış ve Bacillus sp. MT01 olarak adlandırılmıştır. Ekstraselüler olarak üretilen proteaz enzimi gradient (NH4)2SO4 çöktürmesi yöntemiyle %42.72 verimde 1,12 kat kısmi olarak saflaştırılmıştır. Sonrasında Sephacryl S-200 jel filtrasyon kromotografisi ve daha sonra DEAE Sepharose iyon değişim kromotografisi ile % 0.27 verimde 0,26 kat saflaştırılmıştır. Enziminin molekül kütlesi SDS-PAGE ile 32 kDa olarak tespit edilmiştir. Enziminin optimum reaksiyon sıcaklığı ve pH'sı sırasıyla 50 oC ve pH 7.5 olarak bulunmuştur. Proteaz enzimi 30oC'de 36 saat boyunca aktivitesinin %53'ünü koruduğu görülmlüştür. Enzim aktivitesi üzerine metal iyonlarının etkisi incelendiğinde, Fe+2, Na+1, Ca+2, Mn+2, Zn+2, Co+2 ve Mg+2 iyonlarının aktivatör etki gösterdiği, Cu+2 metal iyonunun ise inhibitör etki gösterdiği görülmüştür. Enzim aktivitesi üzerine organik çözücüler ve yüzey aktif maddelerin etkisi incelenmiş, Aseton, 2-Propanol ve Etil alkol varlığında sırasıyla aktivitede %46.6, 25.8 ve 17.8 oranında, DMSO, Toluen ve Benzen varlığında ise çok az aktivite kaybı gözlemlenmiştir. Artan H2O2 konsantrasyonu, proteolitik aktiviteyi artırırken, %1'lik Tween-80 ve Triton X-100 konsantrasyonu aktivite kaybına neden olmuştur. Enzim, kazein, BSA ve fibrinojen substratları arasından en yüksek aktiviteyi kazein substratı üzerinde göstermiştir. Enzim aktivitesi EDTA ile tamamen inhibe olurken, serin proteaz inhibitörü 5 mM PMSF ile %86,64 oranında inhibe olmuştur. Bu inhibisyon sonuçları enzimin metallo proteaz olduğunu düşündürmüştür. Enzimin Km ve Vm kinetik sabitleri ise sırasıyla 0.574 mg/ml ve 338.1234 µmol/ml dk şeklinde bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

In this study, protease producing microorganisms were isolated from soil and the strain which has the highest proteolytic activity by kalitative screening methods was identified as Bacillus sp. by 16S rRNA sequence analysis and called Bacillus sp. MT01. Extracellular protease was partially purified 1,12 fold by gradient (NH4)2SO4 precipitation method with 42.72 % efficiency. Protease was purified chromatographically 0,26 fold by Sephacryl S-200 gel filtration and then DEAE Sepharose ion exchange chromatography with a yield of 0.27%. The molecular mass of the enzyme was determined as 32 kDa by SDS-PAGE. Optimum reaction temperature and pH of the enzyme was found to be 50 ° C and pH 7.5, respectively. Protease enzyme showed its 53% of activity for 36 hours at 30 ° C. When the effect of metal ions on enzyme activity is analyzed, Fe + 2, N + 1, C +2, Mn +2, Zn +2, Co +2 and Mg +2 ions were detected as activators, and Cu+2 metal ions was observed as inhibitors. Effects of organic solvents and surfactants on enzyme activity were examined. In the presence of acetone, 2-propanol and ethanol, enzyme loses it activity by 46.6%, 25.8 % and 17.8 %, respectively. But, it is observed that precence of DMSO, toluene and benzene have very small activity lost. While the higher concentrations of H2O2 increased the activity Tween-80 and Triton X-100 has caused the loss of activity. Through the substrates like casein, BSA and fibrinogen, protease showed the highest activity against casein. While EDTA completely inhibits enzyme activity, the serine protease inhibitor PMSF inhibited the 86,64% of the activity. The results of this inhibition suggests that the Bacillus sp. MT01 protease is a metallo protease. The kinetic constants of the enzyme Km and Vm is measured as 0.574 mg/ml, 338.1234 µmol/ml.min, respectively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    267452

    Mezenkimal stromal hücrelerin crohn hastalığı modelinde inflamatuar ve proinflamatuar sitokinlere etkisi ve tedavide kullanımı

    The effect of mesenchymal stromal cells to inflamatuar and proinflamatuar cytokines at crohn disease model and their role in therapy

    İBRAHİM VOLKAN ŞENKAL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    GastroenterolojiYeditepe Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CENGİZ PATA

  2. Tez No

    458198

    Mastitisli sütlerden izole edilen enterokokların biyofilm üretiminin araştırılması

    Investigation of slime production of enterococcus spp. strains isolated from mastitis milk

    ECEM MALTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    MikrobiyolojiAdnan Menderes Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SERAP SAVAŞAN

  3. Tez No

    389653

    Bitkisel ve mikrobiyal kökenli preparatların kültür mantarı [Agaricus bisporus (Lange) Imbach]'nda yaş kabarcık (Mycogone perniciosa) ve kuru kabarcık (Verticillium fungicola) hastalık etmenlerine etkilerinin ın vıvo ve ın vıtro koşullarında değerlendirilmesi

    Bitkisel ve mikrobiyal kökenli preparatlarin kültür mantari [Agaricus bisporus (Lange) imbach]'nda yaş kabarcik (Mycogone perniciosa) ve kuru kabarcik (Verticillium fungicola) hastalik etmenlerine etkilerinin in vivo ve in vitro koşullarinda değerlendirilmesi

    GAMZE KURT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    ZiraatAkdeniz Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MÜRSEL ÇATAL

  4. Tez No

    65182

    Manisa ili ve çevresindeki bitkilerde belirlenen mikrobiyal kökenli galler

    Microbial galls determined on plants in Manisa province

    CEM AZERİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    BiyolojiCelal Bayar Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. A. ÜSAME TAMER

  5. Tez No

    802413

    Süt molar dişlerin atravmatik restoratif tedavisinde enzim bazlı kemomekanik yöntemin etkinliğinin değerlendirilmesi

    Evaluation of the atraumatic restorative treatment of primary molars using enzyme-based chemomechanical method

    MERVE KOÇ

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Diş HekimliğiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Pedodonti Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MERVE ABAKLI İNCİ

Geri Dön