İnsan beyin asetilkolinesteraz enziminin klonlanması, E. coli'de ekspresyonu ve enzimin karakterizasyonu
Cloning, expression in E. coli, and characterization of human brain acetylcholinesterase
- Tez No: 426073
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Asetilkolinesteraz, Gen klonlama, Rekombinant protein üretimi, Acetylcholinesterase, Gene cloning, Recombinant protein production
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Asetilkolinesteraz (AChE), sahip olduğu çoklu fonksiyonlarından ve özellikle kolinerjik sistemde üstlenmiş olduğu önemli rolünden dolayı dikkat çekmektedir. Bu çalışmada, insan beyin AChE cDNA'sı pET SUMO vektörüne klonlandıktan sonra protein üretimi gerçekleştirildi. Oluşturulan rekombinant konstrakt çapraz PCR ile doğrulandı. Elde edilen rekombinant klon Escherichia coli BL21 (DE-3)'de ifade ettirildi. İzopropil β-D-1-tiyogalaktopiranozit (IPTG) indüksiyonu ile üretilen hekzahistidin (6xHis) kuyruğuna sahip füzyon proteini nikel (Ni2+) afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Anti-His antikorları kullanılarak yapılan western blot sonucunda yaklaşık 90 kDa'luk füzyon proteini tespit edildi. Ellman metodu ile yapılan aktivite deneylerinde optimum sonuç pH 9 Glisin-NaOH tamponunda, oda sıcaklığında elde edildi. Kinetik parametre, KM ve Vmax, değerleri sırası ile 0.63 ve 0.69 olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
The molecular structure of acetylcholinesterase (AChE) attracts respectable interest, because of its versatility and significant role in cholinergic system. The objective of the present study was to clone full-length cDNA sequence of human brain acetylcholinesterase (hAChE) into pET SUMO vector and expressed successfully. The integrity of the constructed plasmid was confirmed by cross PCR. This recombinant clone was over expressed in Escherichia coli BL21 (DE-3). In this work, we produced hexahistidine (6xHis) tagged fusion protein by Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) induction and purified using nickel (Ni2+) affinity chromatography. Using anti-His antibody, we detected ~90 kDa fusion protein. The expression of the hAChE gene in a microbial host resulted in good biological activity. Using Ellman method, the recombinant AChE exhibited activity with optima at pH 9.0 glycine-NaOH buffer and room temperature. Kinetic parameters, KM and Vmax, determined as 0.63 and 0.69, respectively.
Benzer Tezler
- İzmir'de Mustafa Kemal Bulvarı'nın peyzaj mimarlığı açısından etüdü ve peyzaj projesi
Başlık çevirisi yok
ENGİN ALPARSLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Peyzaj MimarlığıEge ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ÜMİT ERDEM
- Çukurova bölgesinde biyoklimatik veriler kullanılarak açık ve yeşil alan sistemlerinin belirlenmesi ilkeleri üzerinde bir araştırma
A research on the determination of the principles in open and green spaces systems by using the bioclimatic data in Çukurova region
MEHMET FARUK ALTUNKASA
Doktora
Türkçe
1987
Çevre MühendisliğiÇukurova ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERDOĞAN GÜLTEKİN
- Konut bölgelerinde parsel düzeni uygulamasının kent topraklarının rasyonel kullanımı çerçevesinde mimari açıdan değerlendirilmesi
An Architeet's Criticism of the Currently Practised method of plot formation in residential areas from the point of View of rational utilization of urban deatories
SUZAN ESİRGEN
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Şehircilik ve Bölge PlanlamaGazi ÜniversitesiŞehir ve Bölge Planlama Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. UMUR ERKMAN
- Ankara-Kızılcahamam karayolunda meydana gelen trafik kazalarında insan faktörü
Başlık çevirisi yok
CELAL AKBULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
1987
UlaşımGazi ÜniversitesiKazaların Çevresel ve Teknik Araştırması Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. RIDVAN EGE