İnsan beyin asetilkolinesteraz enziminin klonlanması, E. coli'de ekspresyonu ve enzimin karakterizasyonu
Cloning, expression in E. coli, and characterization of human brain acetylcholinesterase
- Tez No: 426073
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 106
Özet
Asetilkolinesteraz (AChE), sahip olduğu çoklu fonksiyonlarından ve özellikle kolinerjik sistemde üstlenmiş olduğu önemli rolünden dolayı dikkat çekmektedir. Bu çalışmada, insan beyin AChE cDNA'sı pET SUMO vektörüne klonlandıktan sonra protein üretimi gerçekleştirildi. Oluşturulan rekombinant konstrakt çapraz PCR ile doğrulandı. Elde edilen rekombinant klon Escherichia coli BL21 (DE-3)'de ifade ettirildi. İzopropil β-D-1-tiyogalaktopiranozit (IPTG) indüksiyonu ile üretilen hekzahistidin (6xHis) kuyruğuna sahip füzyon proteini nikel (Ni2+) afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Anti-His antikorları kullanılarak yapılan western blot sonucunda yaklaşık 90 kDa'luk füzyon proteini tespit edildi. Ellman metodu ile yapılan aktivite deneylerinde optimum sonuç pH 9 Glisin-NaOH tamponunda, oda sıcaklığında elde edildi. Kinetik parametre, KM ve Vmax, değerleri sırası ile 0.63 ve 0.69 olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
The molecular structure of acetylcholinesterase (AChE) attracts respectable interest, because of its versatility and significant role in cholinergic system. The objective of the present study was to clone full-length cDNA sequence of human brain acetylcholinesterase (hAChE) into pET SUMO vector and expressed successfully. The integrity of the constructed plasmid was confirmed by cross PCR. This recombinant clone was over expressed in Escherichia coli BL21 (DE-3). In this work, we produced hexahistidine (6xHis) tagged fusion protein by Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) induction and purified using nickel (Ni2+) affinity chromatography. Using anti-His antibody, we detected ~90 kDa fusion protein. The expression of the hAChE gene in a microbial host resulted in good biological activity. Using Ellman method, the recombinant AChE exhibited activity with optima at pH 9.0 glycine-NaOH buffer and room temperature. Kinetic parameters, KM and Vmax, determined as 0.63 and 0.69, respectively.
Benzer Tezler
- Endüstriyel çalışma ortamlarında otomatik aydınlık kontrolü
Automatic lighting control on industry
METİN ORTATAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Mühendislik BilimleriBozok ÜniversitesiMekatronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ORHAN ER
- Kronik böbrek yetmezliği olan hastalarda hemodiyaliz işleminin trombosit aktivasyonu ve agregasyonu üzerine etkisi
Başlık çevirisi yok
MEHMET ARTAÇ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2002
NefrolojiAkdeniz Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İHSAN KARADOĞAN
- Osteoporoz osteoartrit ilişkisi
Başlık çevirisi yok
GÜNSEL SÜNBÜLOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1999
Fiziksel Tıp ve RehabilitasyonAkdeniz ÜniversitesiFiziksel Tıp ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İHSAN ARMAN
- The transformation of higher education by means of techno-parks: Case of Turkey
Yüksek öğretimin dönüşümü: Teknoparklar-Türkiye örneği
GAMZE SART
Doktora
İngilizce
2013
Eğitim ve ÖğretimBoğaziçi ÜniversitesiEğitim Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATMA GÖK
- Zaman yönetiminin hemşirelerin iş verimine etkisi (İzmir Dr. Behçet Uz Çocuk hastalıkları ve cerrahisi eğitim ve araştırma hastanesi örneği)
Effects of time management on nurses job efficiency (İzmir Dr. Behçet Uz Pediatric Desase and Surgery Training and Research Hospital Sample)
ELİF DALKIRAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
HastanelerBeykent Üniversitesiİşletme Yönetimi Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ŞEFİKA DEMİRKAN