İnsan beyin asetilkolinesteraz enziminin klonlanması, E. coli'de ekspresyonu ve enzimin karakterizasyonu
Cloning, expression in E. coli, and characterization of human brain acetylcholinesterase
- Tez No: 426073
- Danışmanlar: PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 106
Özet
Asetilkolinesteraz (AChE), sahip olduğu çoklu fonksiyonlarından ve özellikle kolinerjik sistemde üstlenmiş olduğu önemli rolünden dolayı dikkat çekmektedir. Bu çalışmada, insan beyin AChE cDNA'sı pET SUMO vektörüne klonlandıktan sonra protein üretimi gerçekleştirildi. Oluşturulan rekombinant konstrakt çapraz PCR ile doğrulandı. Elde edilen rekombinant klon Escherichia coli BL21 (DE-3)'de ifade ettirildi. İzopropil β-D-1-tiyogalaktopiranozit (IPTG) indüksiyonu ile üretilen hekzahistidin (6xHis) kuyruğuna sahip füzyon proteini nikel (Ni2+) afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Anti-His antikorları kullanılarak yapılan western blot sonucunda yaklaşık 90 kDa'luk füzyon proteini tespit edildi. Ellman metodu ile yapılan aktivite deneylerinde optimum sonuç pH 9 Glisin-NaOH tamponunda, oda sıcaklığında elde edildi. Kinetik parametre, KM ve Vmax, değerleri sırası ile 0.63 ve 0.69 olarak bulundu.
Özet (Çeviri)
The molecular structure of acetylcholinesterase (AChE) attracts respectable interest, because of its versatility and significant role in cholinergic system. The objective of the present study was to clone full-length cDNA sequence of human brain acetylcholinesterase (hAChE) into pET SUMO vector and expressed successfully. The integrity of the constructed plasmid was confirmed by cross PCR. This recombinant clone was over expressed in Escherichia coli BL21 (DE-3). In this work, we produced hexahistidine (6xHis) tagged fusion protein by Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) induction and purified using nickel (Ni2+) affinity chromatography. Using anti-His antibody, we detected ~90 kDa fusion protein. The expression of the hAChE gene in a microbial host resulted in good biological activity. Using Ellman method, the recombinant AChE exhibited activity with optima at pH 9.0 glycine-NaOH buffer and room temperature. Kinetic parameters, KM and Vmax, determined as 0.63 and 0.69, respectively.
Benzer Tezler
- Testing the toxicity and effectiveness of new treatment options for alzheimer's disease in a zebrafish brain model of amyloid toxicity
Alzheımer hastalığı için yeni tedavi seçeneklerinin toksik etkilerinin ve etkinliklerinin amiloid toksisite zebra balığı beyin modelinde test edilmesi
YUSUF KAAN POYRAZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HATİCE GÜNEŞ ÖZHAN
- Pestisitlerin oluşturduğu oksidatif karaciğer hasarına karşı lupeolün rolü
The role of lupeol against pesticides induced oxidative liver damage
MELİS ÇÖREMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Biyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİHAL ÖMÜR BULAN
- Karakaya Baraj Gölü'nün su kalitesinin ekotoksikolojik yaklaşımla değerlendirilmesi
The evaluation of water quality in Karakaya Dam Lake: An ecotoxicological approach
ABBAS GÜNGÖRDÜ
- Alzheimer hastalığı tedavisinde kullanılmak üzere donepezil yüklü PLGA-b-PEG nanopartiküllerinin hazırlanması ve beyne hedeflendirilmesi
Preparation and brain targeting of donepezil loaded PLGA-b-PEG nanoparticles for treatment of alzheimer's disease
İPEK BAYSAL
Doktora
Türkçe
2015
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SAMİYE YABANOĞLU ÇİFTÇİ
- Alzheimer hastalığında yeni aday asetilkolinesteraz inhibitör bileşiklerinin aktivitesinin teorik yöntemler ile tespit edilmesi
Determination of the activity of new candidate acetylcholinesterase inhibitor compounds by theoretical methods in Alzheimer's disease
ELİF KIZILPINAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
BiyomühendislikÜsküdar ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ VİLDAN ENİSOĞLU ATALAY