Geri Dön

Viral tanı kitlerinin geliştirilmesi için moloney murine leukemia virus (MMLV) revers transkriptaz enziminin rekombinant olarak üretilmesi

Expression of recombinant moloney murine leukemia virus (MMLV) reverse transcriptase enzyme for development of viral diagnostic kits

PDF İndir

  1. Tez No: 430861
  2. Yazar: ÖZLEM KAPLAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 81

Özet

Revers Transkripsiyon Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) yöntemi ile RNA virüslerinin tanısı erken evrede hızlı ve etkili bir şekilde yapılabilmektedir. Enfeksiyonun erken evrede ve hızlı bir şekilde tanısı salgın riskini azaltmanın yanı sıra tedaviye erken başlanması ve etkili ilaç tedavisini sağlar. Ayrıca RT-PCR yöntemi enfekte kişilerde virüs miktarının belirlenmesi ve kişilerin tedaviye verdikleri yanıtı takip etmede kullanılır. MMLV revers transkriptaz enzimi RT-PCR yöntemi için olmazsa olmaz bir unsurdur. Enzimin sağlık alanında öneminden yola çıkarak, bu çalışmada MMLV revers transkriptaz enziminin rekombinant olarak üretimini hedeflenmiştir. Bu çalışmayla MMLV revers transkriptaz enzimini kodlayan nükleotid dizisi Escherichia coli için kodon optimizasyonu yapılarak pTOLT ve pET22b vektör sistemine klonlanmıştır. Elde edilen rekombinant vektörlerle Origami hücreleri transforme edilmiş ve proteinin ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Protein afinite kromatografisiyle saflaştırılmış ve saflaştırılan enzimin ticari olarak kullanılan enzime benzer bir revers transkriptaz aktivitesi gösterdiği yapılan aktivite testiyle ortaya koyulmuştur. Ayrıca üretilen MMLV revers transkriptaz enziminin bir RNA virüsü olan deforme kanat virüsü (DWV) tayininde kullanılabilirliği de bu çalışma çerçevesinde gösterilmiştir. Sonuç olarak elde edilen MMLV revers transkriptaz enzimi ticari olarak kullanılabilir niteliktedir ve üretilen bu enzim PCR temelli tanı kiti geliştirmek için uygun özelliklere sahiptir.

Özet (Çeviri)

Diagnosis of RNA viruses can be performed quickly and effectively at an early stage by Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. The early stage and rapid diagnosis of infection provide early treatment and effective medication as well as reducing risk of outbreaks. RT-PCR technique is also used to the follow-infected individuals in their response to treatment, and measuring the amount of virus. MMLV reverse transcriptase enzyme is an essential element for the RT-PCR method. Based on the importance of the enzyme in the medical field, this study is aimed to product recombinant MMLV reverse transcriptase. In this work MMLV reverse transcriptase enzyme coding DNA fragment that are sequence optimised from rare codons for Escherichia coli organism, cloned to the pTOLT and pET22b expression systems. The Origami cells are transformed with the resulting recombinant vectors and expression of the protein are carried out. The protein is purified by affinity chromatography and, it is revealed that the purified enzyme has similar reverse transcriptase activity when we compare it against commercial enzyme through the activity test. Additionally, it is demonstrated that the produced MMLV reverse transcriptase is used for diagnosis of a deformed wing RNA virus (DWV). As a result, obtained MMLV reverse transcriptase enzyme quality might be used commercially and produced enzyme has suitable properties for the development of PCR based diagnostic assay kits.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    462482

    İshalli buzağı dışkılarında sığır coronavirusu ve sığır rotavirusunun hızlı tanı kiti ve TR-PCR ile araştırılması

    Investigation of bovine coronavirus and bovine rotavirus by rapid diagnosis kit and RT-PCR in diarrheic calf feces

    GÜLŞAH UYUNMAZ SAKLI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Veteriner HekimliğiSelçuk Üniversitesi

    Viroloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OYA BULUT

    PROF. DR. MUSTAFA HASÖKSÜZ

  2. Tez No

    778310

    Kırıkkale Üniversitesi Hayvan Hastanesine getirilen neonatal ishalli buzağılarda majör enteropatojenlerin prevalansının araştırılması

    Investigation of the prevalence of major enteropathogens in calves with neonatal diarrhea brought to Kırıkkale University Animal Hospital

    ZEKİ GÜRELİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Veteriner HekimliğiKırıkkale Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ERDAL KARA

  3. Tez No

    248785

    Karaciğer kitle lezyonlarının değerlendirilmesi

    Evaluation of liver mass lesions

    TUNCER TEMEL

    Tıpta Yan Dal Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    GastroenterolojiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞEGÜL ÖZAKYOL

  4. Tez No

    867729

    Myeloid kanserlerde kemik iliği mikroçevresinin metabolik profilinin incelenmesi

    Investigation of the metabolic profile of the bone marrow microenvironment in myeloid cancers

    ASUDE BAHAR ŞAHİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATMA VİSAL OKUR

  5. Tez No

    809569

    İstanbul'da bir hastaneye başvuran kişilerde yaş ve cinsiyet değişkenlerinin SARS-CoV-2 üzerine etkisinin araştırılması

    Investigation of age and gender variables effect on SARS-CoV-2 in people admitted to a hospital in İstanbul

    DEVRAN ŞENER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    MikrobiyolojiOrdu Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP KOLÖREN

    DOÇ. DR. ÜLKÜ KARAMAN

Geri Dön