Geri Dön

HAX-1 geni susturulan hücrelerde influenza virüsü replikasyonunun araştırılması

Investigation of influenza virus replication in HAX-1 gene knock down cells

  1. Tez No: 431596
  2. Yazar: HASAN UĞURLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. KADİR TURAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 116

Özet

Amaç: Bu tez çalışmasında Hax1 proteinin insan tipi influenza A/WSN/H1N1 ve kuş tipi inluenza A/Duck/Pen/H5N2 virüslerinin replikasyonları etkilerin moleküler düzeyde belirlenmesi amaçlandı. Bu amaç doğrultusunda HEK293 ve HeLa hücrelerinde Hax1 geni transkript düzeyi RNAi teknolojileri ile baskılanadı ve bu hücrelerde virüs çoğalması Western melezleme ve immunfloresan teknikler ile araştırıldı. Yöntem: Memeli hücrelerinde Hax1 transkript düzeyinin düşürülmesinde iki farklı yol izlendi. Birincisi, bu gene özgü shRNA kodlayan plamit vektörler oluşturuldu ve bu vektörler hücreler transfekte edilerek transkript düzeyi düşürüldü. İkincisinde hücreler ticari olarak sentez ettirilen siRNA ile transfekte edildi. Hax-1 transkript düzeyi düşürülen hücreler influenza virüsüleri ile enfekte edildi. Enfeksiyondan 8-12 saat sonra hücrelerden hazırlanan lizatlarda virüs miktarları Western melezleme tekniği ile karşılaştırıldı. Hax-1 proteini kodlayan bir plazmidin transfeksiyonu ile hücrelerdeki protein düzeyi arttırıldı ve bu artışın influenza virüs replikasyonuna etkileri araştırıldı. Diğer taraftan, konak hücrelerde Hax-1 protein düzeyindeki artış ya da azalışın, infuenza virüsü RNA polimeraz enzimine etkileri, bu virüs için geliştirilen minireplikon modelleri ile saptandı. Bulgular ve Sonuç: Hax1 transkript düzeyi düşürülen hücrlerde influenza virüs replikasyonunun beklenmedik bir şekilde baskılandığı saptandı. Aynı şekide Hax1 protein düzeyi arttırılan hücrelerde de influenza virüsü replikasyonunda yavaşlama görüldü. İnfluenza virüsü minireplikon modelleri ile yapılan testler de benzer sonuçlar veridi. HEK293 hücrelerinde Hax-1 proteinindeki artış viral RNA polimeraz aktivitelerini inhibe edici etki gösterdi. Elde edilen veriler Hax-1 proteininin her iki tip virüs replikasyonu üzerinde de negatif yönde etki ettiği sonucunu verdi.

Özet (Çeviri)

Aim: In this work, it was aimed to determine the effects of Hax1 protein on human type (A/WSN/H1N1) and avian type Influenza (A/Duck/Pan/H5N2) virus replication at the molecular level. For this purpose, Hax1 gene transcript levels in HEK293 and HeLa cells was suppressed by RNAi technology and the virus multiplication in these cells was investigated with Western hybridization and immunofluorescence techniques. Method: Two different methods were followed for reducing the Hax1 transcript levels in mammalian cells. First, the gene-specific siRNA-encoding plasmid vectors were generated and, transcript levels in the cells were reduced by transfection of these plasmids. The second, the cells were transfected with siRNA molecules synthesized commercially. Hax-1 gene knock down cells were infected with influenza viruses. 8 to 12 h post infection, the quantitiy of virus protein in lysates of infected cells was investigated with Western hybridization techniques. Hax-1 protein level in the cells was increased by transfection of plasmids encoding this proteins and the effects of this increase on influenza virus growth was also investigated. On the other hand, the effects of changes the amount of Hax1 protein in host cells on infuenza virus RNA polymerase enzyme were invastegated with minireplikon models developed for influenza viruses. Results and Conclusion: In was found that the influenza virus replication is unexpectedly suppressed in Hax1 gene knock down cells. The influenza virus growth was also negatively affected in the cells over-expressing Hax1 protein. The assays carried out with influenza virus minireplicons also gave the similar results. The over-expression of Hax1 protein in HEK293 showed inhibititory effects on viral RNA polymerase activity. From data obtained in this work, it was conclude that Hax1 proteins have negative regulatory effects on both human and avian types of influenza virus replication

Benzer Tezler

  1. Çocukluk çağı nötropenilerinin klinik izlemi, etiyolojik ve prognostik değerlendirilmesi

    Clinical follow-up, etiological and prognostic evaluation of childhood neutropenia

    ŞEYMA ÖZEL

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıMarmara Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖMER DOĞRU

  2. Ağır konjenital nötropeni tanıyla izlenen 21 vakanın demografik özellikleri, klinik, laboratuar bulguları ve klinik seyirleri

    Demographic features, clinical, laboratory findings and prognosis of 21 patients with severe congenital neutropenia

    İBRAHİM CEMAL MASLAK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıHacettepe Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İLHAN TEZCAN

  3. The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli

    Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu

    NAZLI DİLARA ERDOĞDU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  4. Meme kanserli hastaların arşiv dokularından HAX-1 gen ürünü protein düzeylerinin immunohistokimyasal olarak belirlenmesi

    Immunohistochemical determination of HAX-1 gene product protein in archive materials of breast cancer patients

    ABDWLQADR HAMAD

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Tıbbi BiyolojiGaziantep Üniversitesi

    Temel Tıp Bilimleri Bölümü

    PROF. DR. AHMET ARSLAN

    YRD. DOÇ. DR. FERİDUN AKKAFA

  5. Kronik nötropeni hastalarının tanı ve izlemindeki klinik ve laboratuvar verilerinin incelenmesi

    Retrospective examination of clinical and laboratory data in the diagnosis and follow-up of chronic neutropenia patients

    UĞUR ERKİN ZEYTİNOĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    HematolojiHacettepe Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ŞULE ÜNAL CANGÜL