HAX-1 geni susturulan hücrelerde influenza virüsü replikasyonunun araştırılması
Investigation of influenza virus replication in HAX-1 gene knock down cells
- Tez No: 431596
- Danışmanlar: PROF. DR. KADİR TURAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 116
Özet
Amaç: Bu tez çalışmasında Hax1 proteinin insan tipi influenza A/WSN/H1N1 ve kuş tipi inluenza A/Duck/Pen/H5N2 virüslerinin replikasyonları etkilerin moleküler düzeyde belirlenmesi amaçlandı. Bu amaç doğrultusunda HEK293 ve HeLa hücrelerinde Hax1 geni transkript düzeyi RNAi teknolojileri ile baskılanadı ve bu hücrelerde virüs çoğalması Western melezleme ve immunfloresan teknikler ile araştırıldı. Yöntem: Memeli hücrelerinde Hax1 transkript düzeyinin düşürülmesinde iki farklı yol izlendi. Birincisi, bu gene özgü shRNA kodlayan plamit vektörler oluşturuldu ve bu vektörler hücreler transfekte edilerek transkript düzeyi düşürüldü. İkincisinde hücreler ticari olarak sentez ettirilen siRNA ile transfekte edildi. Hax-1 transkript düzeyi düşürülen hücreler influenza virüsüleri ile enfekte edildi. Enfeksiyondan 8-12 saat sonra hücrelerden hazırlanan lizatlarda virüs miktarları Western melezleme tekniği ile karşılaştırıldı. Hax-1 proteini kodlayan bir plazmidin transfeksiyonu ile hücrelerdeki protein düzeyi arttırıldı ve bu artışın influenza virüs replikasyonuna etkileri araştırıldı. Diğer taraftan, konak hücrelerde Hax-1 protein düzeyindeki artış ya da azalışın, infuenza virüsü RNA polimeraz enzimine etkileri, bu virüs için geliştirilen minireplikon modelleri ile saptandı. Bulgular ve Sonuç: Hax1 transkript düzeyi düşürülen hücrlerde influenza virüs replikasyonunun beklenmedik bir şekilde baskılandığı saptandı. Aynı şekide Hax1 protein düzeyi arttırılan hücrelerde de influenza virüsü replikasyonunda yavaşlama görüldü. İnfluenza virüsü minireplikon modelleri ile yapılan testler de benzer sonuçlar veridi. HEK293 hücrelerinde Hax-1 proteinindeki artış viral RNA polimeraz aktivitelerini inhibe edici etki gösterdi. Elde edilen veriler Hax-1 proteininin her iki tip virüs replikasyonu üzerinde de negatif yönde etki ettiği sonucunu verdi.
Özet (Çeviri)
Aim: In this work, it was aimed to determine the effects of Hax1 protein on human type (A/WSN/H1N1) and avian type Influenza (A/Duck/Pan/H5N2) virus replication at the molecular level. For this purpose, Hax1 gene transcript levels in HEK293 and HeLa cells was suppressed by RNAi technology and the virus multiplication in these cells was investigated with Western hybridization and immunofluorescence techniques. Method: Two different methods were followed for reducing the Hax1 transcript levels in mammalian cells. First, the gene-specific siRNA-encoding plasmid vectors were generated and, transcript levels in the cells were reduced by transfection of these plasmids. The second, the cells were transfected with siRNA molecules synthesized commercially. Hax-1 gene knock down cells were infected with influenza viruses. 8 to 12 h post infection, the quantitiy of virus protein in lysates of infected cells was investigated with Western hybridization techniques. Hax-1 protein level in the cells was increased by transfection of plasmids encoding this proteins and the effects of this increase on influenza virus growth was also investigated. On the other hand, the effects of changes the amount of Hax1 protein in host cells on infuenza virus RNA polymerase enzyme were invastegated with minireplikon models developed for influenza viruses. Results and Conclusion: In was found that the influenza virus replication is unexpectedly suppressed in Hax1 gene knock down cells. The influenza virus growth was also negatively affected in the cells over-expressing Hax1 protein. The assays carried out with influenza virus minireplicons also gave the similar results. The over-expression of Hax1 protein in HEK293 showed inhibititory effects on viral RNA polymerase activity. From data obtained in this work, it was conclude that Hax1 proteins have negative regulatory effects on both human and avian types of influenza virus replication
Benzer Tezler
- Çocukluk çağı nötropenilerinin klinik izlemi, etiyolojik ve prognostik değerlendirilmesi
Clinical follow-up, etiological and prognostic evaluation of childhood neutropenia
ŞEYMA ÖZEL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıMarmara ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖMER DOĞRU
- Ağır konjenital nötropeni tanıyla izlenen 21 vakanın demografik özellikleri, klinik, laboratuar bulguları ve klinik seyirleri
Demographic features, clinical, laboratory findings and prognosis of 21 patients with severe congenital neutropenia
İBRAHİM CEMAL MASLAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıHacettepe ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLHAN TEZCAN
- The productıon and pegylatıon of recombinant human granulocyte colony-stımulatıng factor produced ın e. coli
Rekombinant insan granulosit koloni stimülan faktörünün e. coli'de üretimi ve pegilasyonu
NAZLI DİLARA ERDOĞDU
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Biyokimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Meme kanserli hastaların arşiv dokularından HAX-1 gen ürünü protein düzeylerinin immunohistokimyasal olarak belirlenmesi
Immunohistochemical determination of HAX-1 gene product protein in archive materials of breast cancer patients
ABDWLQADR HAMAD
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Tıbbi BiyolojiGaziantep ÜniversitesiTemel Tıp Bilimleri Bölümü
PROF. DR. AHMET ARSLAN
YRD. DOÇ. DR. FERİDUN AKKAFA
- Kronik nötropeni hastalarının tanı ve izlemindeki klinik ve laboratuvar verilerinin incelenmesi
Retrospective examination of clinical and laboratory data in the diagnosis and follow-up of chronic neutropenia patients
UĞUR ERKİN ZEYTİNOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
HematolojiHacettepe ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞULE ÜNAL CANGÜL