Farklı somatik hücrelerle kültüre tabi tutulan ve in vitro yöntemle üretilen sığır embriyolarında vitrifikasyon ile derin dondurma
Co-culturing of in vitro-produced cattle embryos with different somatic cells and deep-freezing with vitrification method
- Tez No: 434750
- Danışmanlar: PROF. DR. FATİN CEDDEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Ziraat, Agriculture
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Zootekni Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
Bu çalışmanın amacı, in vitro koşullarında yüksek kriyotoleransa sahip embriyoları üreterek dondurulmuş embriyo üretmektir. Çalışmada mezbahada kesilen sığırların ovaryumları kullanılmıştır. Aspirasyon yöntemi ile elde edilen oositler (1632 adet) TCM-199'da 24 saat süreyle %5 CO2, %5 O2, %90 N2 gaz atmosferinde 38,5 °C de in vitro olarak olgunlaştırılmışlardır. Bu amaçla sırasıyla 4 grup oluşturulmuştur. Her bir IVM ortamında maturasyonu yapılan KOK'ler rastgele bir biçimde 4 farklı IVF ortamının içine konularak rastgele blok tasarımı oluşturulmuştur. Olgun oositler 24 saat süreyle fertilize edilmişlerdir. Fertilizasyon sonrası 48. saatte cleavage %67,05 (865/1290) saptanmıştır. Embriyolar 7 gün süreyle %5 CO2, %5 O2, %90 N2 gaz karışımında blastosist (%34,91; 302/865) aşamasına kadar inkübe edilmişlerdir. Zigot ve embriyolar taşıma ortamından (TCM199) 500 µL vitrifikasyon solüsyon 1'in (VS1) (5 M etilen glikol içeren taşıma ortamı) içine aktarılıp 3 dk sonra VS2'nin (7 M etilen glikol, %18 fikol 70 ve 0.5 M galaktoz içeren taşıma ortamı) içine aktarılarak payete doldurma zamanı dahil 45 sn'lik süre boyunca bu ortamda tutulmuştur. Erken blastosist-blastosist aşamasına ulaşan 302 adet embriyodan 254 tanesi vitrifikasyon solüsyonunda maruz bırakılarak dondurulmuşlardır. Zigot ve embriyolar open pulled payete yüklendikten sonra sıvı nitrojen içine daldırılıp dondurulmuştur. Verilerin değerlendirilmesinde Z testi kullanılmıştır. Çözdürme sonrası, genişlemiş blastosist-zona pellucida duvarından çıkma safhasında en iyi gelişim %52,2 (35/67) ile Grup 1 de saptanırken, bunu %45,3 (29/64) ile Grup 2, %22,2 (14/63) ile Grup 3 ve %5 (3/60) ile Grup 4 takip etmiştir. Grup 1 ve 2 arasında önemli bir fark bulunmamıştır. Grup 1 ile Grup 3 arasındaki fark P
Özet (Çeviri)
The aim of this study is to produce deep-frozen embryos by producing of embryos with high cryotolerance in in-vitro conditions. In this study, slaughtered cattle ovaries were used. Oocytes (n=1632) obtained by using aspiration method were matured in their own group in TCM-199 medium for 24 h at a gas atmosphere of 5% CO2, 5% O2, and 90% N2 at 38.5°C. Four different groups were prepared then each of maturated COC group in every IVM medium were randomly distributed into 4 different IVF media for block design. Matured oocytes were fertilized for 24 h. After fertilization cleavage rate was found as 67.05% (865/1290) at 48th h. Embryos were cultured up to early blastocyst-blastocyst stage (34.91%; 302/865) for 7 days at a gas atmosphere of 5% CO2, 5% O2, and 90% N2 at 38.5 °C. Zygotes and embryos were transported from TCM199 media into 500 µL of vitrification solution 1 (VS1) (medium containing 5 M Ethylene glycol) then transferred into straws containing VS2(7 M Ethylene Glycol, %18 ficoll 70 and 0.5 M galactose) after 3 minute. Embryos were embedded into straws and remained in during 45 sec including embedding duration. Among 302 embryos, 254 embryos at early blastocyst stage were frozen after an exposure to vitrification solution. Zygotes and embryos are immersed into liquid nitrogen after disposing in open pulled straws. Z test was used in this study. Post thaw development to expanded blastocyst stage was highest in Group 1 with 52.2% (35/67) followed by Group 2 with 45.3% (29/64), Group 3 with 22.2% (14/63) and Group 4 with 5% (3/60). No significant difference was observed between Groups 1 and 2. The difference between Group 1 and 3 was found as at the level P
Benzer Tezler
- Sığırlarda in vitro koşullarında üretilen sığır embriyolarının kalitelerinin iyileştirilmesi olanakları
Possibilities for improving quality of in-vitro produced embryos in cattle
SHAHRAM BOHLOOLI
- Buğdayda (Tiriticum aestivum L.) protoplast izolasyonu, kültürü ve bitki regenerasyonu
Protoplast isolation, culture and plant regeneration on wheat (Triticum aestium L.)
AKİF ESKALEN
- Probiyotik bakterilerin mezenkimal kök hücreler üzerindeki immünomodülatör etkilerinin araştırılması
INVESTIGATION OF THE IMMUNOMODULATORY EFFECTS OF PROBIOTIC BACTERIA ON MESENCHYMAL STEM CELLS
GİZEM YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Bilim ve TeknolojiNecmettin Erbakan ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SURAY PEHLİVANOĞLU
- İnsab embriyonik kök hücrelerinin in vitro ortamda periodontal ligament fibroblast progenitörlerine farklılaştırılması
Differentation of human embriyonic stem cells to periodontal ligament fibroblast progenitos in vitro
BÜLEND İNANÇ
- Somatik hibridizasyon ile turunçgil tristeza virüsü (CTV)'ne tolerant anaç bitkiler elde edilmesi
Obtaining of citrus tristeza virus (CTV) tolerant rootstock plants via somatic hybridization
ÇİĞDEM ULUBAŞ