Rekombinant insanlaştırılmış anti tumör nekrozis faktör-α monoklonal antikor üretim prosesinin optimizasyonu
Optimization of humanized monoclonal antibody against human tumor necrosis factor-α production
- Tez No: 437884
- Danışmanlar: PROF. DR. MURAT ELİBOL
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 169
Özet
Tümör nekrozis faktör alfa (TNF-α) bağışıklık sisteminin önemli hücre sinyal bileşenidir. Anti-TNF-α monoklonal antikorlar (mAbs) kronik enflamatuvar hastalıkların tedavisinde sıklıkla kullanılmaktadır. Bu çalışmanın amacı, farklı üretim sistemleri ve farklı besleme stratejilerinin CHO hücre büyümesi, mAb verim/verimlilik ve kalitesine olan etkisinin araştırılarak ticari anti-TNF-α mAb üretimi için uygun bir proses tasarlamaktır. Bu tez çalışmasında, stabil olarak insanlaştırılmış anti TNF-α mAb salgılayan glutamin sentetaz (GS) vektör sistemine sahip Çin hamster yumurtalık (CHO) hücreleri kullanıldı. Hücreler öncelikle kesikli olarak faklı ticari kimyasal olarak tanımlanmış (CD) besi ortamlarında ve düşük kültür sıcaklıklarda (33, 35 ve 37°C) kültüre edildi. Ardından farklı kesikli-beslemeli (FB) kültür stratejilerinin hücrelerin üreme parametreleri, ürün verim/verimlilikleri ve ürün kalitesi üzerine etkileri belirlendi. 1L karıştırmalı tank biyoreaktörde pH, çözünmüş oksijen (DO), havalandırma hızı ve karıştırma hızı proses parametreleri optimize edildi. Hücrelerin farklı üretim sistemlerindeki büyüme potansiyellerinin belirlenmesi için, hücrelerin glikoz tüketim ve laktik asit üretimleri HPLC yöntemiyle, mAb üretimleri ise indirekt ELISA yöntemiyle belirlendi. Üretilen mAb'lar protein A affinite kromotografisi ile kısmi olarak saflaştırıldı. 4L üretimden elde edilen süpernatant çapraz akış filtrasyon sistemi ile konsantre edildi. Ürünün saflığı ve üretilen mAb'ın indirgenmiş kütlesi SDS-PAGE ile belirlendi. Ürün ayrıca konformasyonel olarak da karakterize edildi. Karıştırmalı tank biyoreaktörde, CD2 ortamında (CD-Forti-CHO, Gibco, Invitrogen, ABD)), FB5 stratejisinde (CHO CD EfficientFeed KitTM, Invitrogen, ABD)) ve bifazik 35°C kültür sıcaklığında yaklaşık olarak 2g/L mAb elde edildi. Biyoreaktör %40±10 DO ve pH 7,2±0,5'de kontrol edildi. Bu koşullarda üretilen mAb'ın, orjinatör molekülü (HUMIRA®) ile yüksek konförmasyonel benzerlik gösterdiği bulundu.
Özet (Çeviri)
Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is an important cell-signaling factor of the immune system. Anti-TNF-α monoclonal antibodies (mAbs) are frequently used as therapeutic agents in chronic immune-mediated inflammatory diseases. The aim of this study is to investigate the effects of the different production systems and different feeding strategies on the growth parameters of this cell line, product yield/productivity and quality of the product and accordingly to design a feasible process for anti-TNF-α mAb manufacturing. In this thesis, glutamine synthetase (GS) - Chinese hamster ovary (CHO) cells that constantly produce humanized anti-TNF-α mAb, were cultivated in different culture conditions including different commercially available chemically defined (CD) media in batch culture. To evaluate the effect of low culture temperature on mAb production, the cells were cultivated at 33, 35, and 37°C. Thereafter, different fed-batch cultivation approaches were used to cultivate the cells. pH, dissolved oxygen (DO), aeration rate and stirring speed were optimized in 1L stirred tank bioreactor. mAb production process was successfully scaled up to 4L. In order to assess the growth parameters of the cells in different production systems glucose consumption, lactate production were determined by HPLC and mAb productivities of the systems were determined by indirect ELISA. mAbs were partially purified by protein A affinity chromatography. The supernatants from the 4L bioreactor were concentrated by cross flow filtration system. SDS- PAGE was applied to prove the both purity of the product and mAbs' reduced size. Products were also characterized according to their conformational structure. Approximately 2 g/L mAb was observed in CD2 medium with FB5 cultivation mode by using biphasic 35°C culturing temperature in 1L bioreactor. The bioreactor was controlled at 40±10% DO and the culture pH was kept at 7,2±0,5. The produced mAb under those conditions gave high conformational similarity with its originator molecule (HUMIRA®).
Benzer Tezler
- Recombinant expression, purification and characterization of TNFR1
TNFR1'in rekombinant üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
YAĞMUR ÖZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Development of a novel humanized bioactive monoclonal antibody against HER2
HER2'ye karşı insanlaştırılmış yeni bioaktif monoklonal antikor geliştirilmesi
AYBİKE ERDOĞAN ATAY
Doktora
İngilizce
2024
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiGenom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ EZGİ KARACA EREK
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Rekombinant anti-HER2 antikoru üretimi için ekspresyon vektörü geliştirilmesi ve konak hücrede ekspresyonunun gösterilmesi
Development expression vector for recombinant anti-HER2 antibody production and demonstration of expression in the host cell
AYTÜL GÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyomühendislikEge ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. SULTAN GÜLÇE İZ
- Development of anti-cancer single-domain antibody toolbox
Anti-kanser tek domainli antikor takımlarının geliştirilmesi
NAZLI EDA ESKİER
Doktora
İngilizce
2024
BiyomühendislikDokuz Eylül ÜniversitesiGenom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖKHAN KARAKÜLAH
- Kanser tedavisi için rekombinant protein temelli aday ilaçların geliştirilmesi
Development of recombinant protein based drug candidates for cancer therapy
AYBİKE ERDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK