Geri Dön

Kanser tedavisi için rekombinant protein temelli aday ilaçların geliştirilmesi

Development of recombinant protein based drug candidates for cancer therapy

PDF İndir

  1. Tez No: 458325
  2. Yazar: AYBİKE ERDOĞAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Tıbbi Biyoloji, Biology, Biotechnology, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 83

Özet

Biyoterapötik ilaçların kanser tedavisinde en çok ilgi gören alanı hedefe özgünlükleri nedeniyle monoklonal antikorlardır (mAb). Projemizin amacı, meme kanseri tedavisinde kullanılabilecek mAb-temelli ilaç adayları geliştirmektir. Meme kanseri, dünya çapında yaygın görülmesi ve gelişmekte olan ülkelerde kadınların ölüm nedenlerinde ikinci sırada yer alması sebebiyle önemlidir. Meme kanserinde %20-25 HER2 geninin aşırı ifadesi görülmektedir. Bu gen, HER2 (ErbB2) tirozin kinaz reseptörünü kodlar. HER/ErbB ailesine ait diğer reseptörler gibi homodimerizasyon veya heterodimerizasyon ile aktive olur. Aktif hale gelen protein kinazlar ilgili sinyal iletiminin aşağı basamaklarında yer alan aracı molekülleri uyararak zincir reaksiyonları başlatırlar. Böylece, proliferasyon, sağ kalım, hücre farklılaşması, anjiyogenez ve apoptoz engellenmesi gibi sonuçlar doğuran farklı sinyal yolakları etkinleşir. Çoğalması kontrol edilemeyen hücreler zamanla tümör hücreleri haline gelir. HER2 hedefli meme kanseri tedavisine alternatif olması amacıyla var olan monoklonal antikorlardan farklı bir HER2 hücre dışı bölgesi tanıyan beş özgün antikor üreten fare hibridoma klonları grubumuz tarafından önceden geliştirilmiştir. Bu araştırmada üretilen monoklonal antikorların hedefi özgün olarak tanımada rol oynayan amino asit dizilimleri (CDR) belirlenerek, antikorun insanlaştırılması için ilk adımların atılması hedeflenmiştir. Hibridoma klonlarından dördünün HER2'yi özgün olarak tanıdıkları immünofloresans deneyi ile gösterilmiştir. Bu hücrelerden RNA izole edildikten sonra immünoglobulin ağır ve hafif zincirlerinin değişken bölgeleri RT-PCR ve PCR yöntemi ile çoğaltılmıştır. Sanger sekanslaması yöntemiyle elde edilen DNA dizilimlerinin dönüştürülmesi sonucunda ağır ve hafif zincir değişken bölge amino asit dizilimleri dört farklı antikor için elde edilmiştir. Bir klonda sadece füzyon partneri olan myeloma hücresinden gelen endojen hafif zincir yapısına rastlanmıştır. Hedefi özgün olarak tanıdığı bilinen bir antikor için ise hafif zincir dizlimi açığa çıkarılamamıştır. Hedefi HER2 hala özgün olarak tanıdığı gösterilen iki monoklonal antikorun antijeni tanınmasında rol oynayan CDR alanları bulunmuştur. Geliştirilen fare antikorları ile aynı izotipe sahip IgG1/kappa insan immünoglobulini ifade eden vektörün modifiye edilecek yerleri belirlenmiştir. Modifikasyon sonrası vektör, fare tarafından üretilen antikorlar ile aynı CDR dizilimlerine sahip olacaktır. Böylece memeli hücrelerinde ifade edilebilecek HER2'yi hedef alan insanlaştırılmış antikor için moleküler temeller atılmıştır.

Özet (Çeviri)

Monoclonal antibodies (mAbs) are the most demanded field of biotherapeutic drugs in cancer therapies because of their specificity to target. Aim of our project is to develop mAb-based drug candidates for the treatment of breast cancer. Breast cancer is significant since it is commonly observed worldwide and it takes second place in the causes of women death in developing countries. About 20-25% of breast cancer, HER2 gene overexpression was observed. This gene encodes HER2 (ErbB2) tyrosine kinase receptor. It is activated by homodimerization or heterodimerization like other receptors in the HER/ErbB family. Activated tyrosine kinases initialize signaling cascade by inducing downstream intermediary elements involved in signal transduction. Hence, multiple signaling pathways leading proliferation, survival, cell differentiation, angiogenesis and prevention of apoptosis were triggered. Uncontrolled growth of cells eventually results in tumor formation. In order to be an alternative to HER2-targeted breast cancer treatment, mouse hybridoma clones producing five specific antibodies recognizing a different HER2 extracellular domain from existing mAbs have been previously developed by our group. The aim of this study was to identify the amino acid sequences (CDR) that specifically recognize the target of monoclonal antibodies and to take the first steps towards humanization of monoclonal antibody. Four of hybridoma clones, specifically identify HER2, were shown by immunofluorescence. After isolation of RNA from these cells, immunoglobulin heavy and light chain variable regions were amplified through RT-PCR and PCR. Amino acid sequences of heavy and light chain variable regions were acquired for four different antibodies in the result of translation of DNA sequence obtained by Sanger sequencing. Only endogen light chain molecule belongs to fusion partner, myeloma cells was encountered for one clone. A clear light chain sequence result could not be exposed for one antibody which was known to specifically recognize the target. Complementarity determining regions (CDRs) which play a role in the antigen recognition were found for two monoclonal antibodies specific to HER2. The modified regions of IgG1 / kappa human immunoglobulin expression vector having the same isotype as the murine antibodies developed were identified. After modification, the vector will have the same CDR sequences with the antibodies produced by the mouse. Thus, the molecular basis for the humanized HER2 targeted antibody that can be expressed in mammalian cells has been established.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    498389

    Azurinin Lactococcus lactis'te rekombinant üretimi, antimikrobiyal ve sitotoksik etkisinin araştırılması

    Recombinant production of azurin in Lactococcus lactis, investigation of its antimicrobial and cytotoxic effects

    MELİKE YILDIZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HAKAN AŞKIN

  2. Tez No

    691311

    Meme kanseri tedavisinde kullanılmak üzere Lu-177 ile radyoişaretlenecek yeni bir radyofarmasötik kitinin geliştirilmesi

    Development of a new radiopharmaceutical kit to be radiolabelled with Lu-177 for use in breast cancer treatment

    EMRE ÖZGENÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Eczacılık ve FarmakolojiEge Üniversitesi

    Radyofarmasi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EVREN ATLIHAN GÜNDOĞDU

  3. Tez No

    736147

    Rekombinant HER3 antijeninin üretilmesi ve saflaştırılması

    Production and purification of recombinant HER3 antigen

    AHMET KAAN DİKİCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ARZU ATALAY

  4. Tez No

    437694

    AMHR2 reseptörünün EAPPNRRTCVFFEAPGVRGS ve NLTQDRAQVEMQGCRDSDEP peptitlerini hedef alan monoklonal antikorların üretilmesi

    Production of monoclonal antibodies specific for EAPPNRRTCVFFEAPGVRGS and NLTQDRAQVEMQGCRDSDEP peptides in receptor of the AHMHR-2

    ALİ TURAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Tıbbi BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇAĞRI ŞAKALAR

  5. Tez No

    881821

    Beyin tümörlerinde hücresel senesens ve hücre ölüm mekanizmalarının araştırılması

    Investigation of cellular senescence and cell death mechanism in brain tumors

    BURAK GİZEM GÖLEŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Onkolojiİstanbul Üniversitesi

    Onkoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NECAT VAKUR OLGAÇ

    PROF. DR. HÜLYA YAZICI

Geri Dön