İnsan diş pulpa mezenkimal kök hücrelerinin koşullu besiyeri aracılığıyla osteojenik olarak farklılaştırılması: deneysel çalışma
The osteogenic differentiation via conditioned medium of human dental pulp mesenchymal stem cells: Experi̇mantal study
- Tez No: 458071
- Danışmanlar: PROF. DR. YUSUF ÖZKUL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 73
Özet
Bu çalışmanın amacı, osteojenik farklılaşmış hücrelerin koşullu besiyerlerinin, farklılaşmamış mezenkimal kök hücre (MKH)'ler üzerine uygulanması sonucu bu hücreleri osteojenik farklılaşmaya yönlendireceği hipotezi üzerinden yola çıkılarak, osteojenik yönde farklılaştırılmış insan diş pulpası kaynaklı kök hücre (iDPKH)'lerin koşullu besiyerlerinin iDPKH 'ler üzerindeki etkilerini araştırmaktır. iDPKKH'ler akım sitometri, immün boyama ve farklılaşma testleri gibi analizlere tabi tutularak karakterize edildi. Klonejenik özelliklerini göstermek amacıyla CFU-F assay yapıldı. Hücreleri karakterize etmek için CD90, CD44, CD45, CD105 ve CD34 mezenkimal kök hücre belirteçleri kullanıldı. Çalışmamızda, iDPKKH'ler osteojenik farklılaşma besiyeri ile farklılaştırıldı. 14. gün sonunda farklılaşma; alizarin red boyama, osteolmage mineralization assay kit ile (Lonza, MD, USA) ve gen ekspresyonu düzeyinde RUNX2, Osteopontin ve Osteonektin genleri β- aktin'e normalize edilerek değerlendirildi. Farklılaşmış hücre hattından 3'er gün aralıklarla koşullu besiyeri ve RNA izolasyonu için hücre toplandı. Toplanan koşullu besiyerleri farklılaşmamış iDPKKH 'ler üzerine uygulandı. Bu gruptan da 3'er gün aralıklarla hücreler alınarak RNA izolasyonu yapıldı. 7. ve 14. günlerde hücrelerin senesense girip girmediklerini belirlemek amacıyla β-Gal boyama, canlılık aktivitesi ölçümü ve deney sürecinde hücrelerde oksidatif stres ve hasar olup olmadığını belirlemek için mitokondriyal aktiviteye bakıldı. 14 gün sonunda deney sonlandırıldı. Koşullu besiyeri uygulanan hücre grubundaki farklılaşma; alizarin red boyama, osteolmage mineralization assay kit ile (Lonza, MD, USA) ve gen ekspresyonu düzeyinde RUNX2, Osteopontin ve Osteonektin genleri β- aktin'e normalize edilerek değerlendirildi. Dental pulpa dokusundan elde edilen kök hücrelerin CD90+, CD44+, CD105+ ve CD45-, CD34- oldukları akım sitometri ve immünofloresan boyama ile tespit edildi. Hücrelerin klonojenik olarak çoğaldıkları CFU-F assay ile gösterildi. Ayrıca bu hücrelerin adipojenik, osteojenik ve kondrojenik olarak farklılaştırıldıkları adipo red, alizarin red, safranin O ve toluidin blue pozitif boyanmaları ile belirlendi. Osteojenik besiyeri ile 14 gün muamele sonrası ortamda biriken minerallerin alizarin red ve floresan tabanlı mineralizasyon boyama ile pozitif boyamaları gösterildi. İndüksiyon sonrası 14. gün sonunda toplanan hücrelerde RUNX2, Osteopontin ve Osteokalsin genlerinin ekspresyon seviyelerinin arttığı, kontrol grubunda ise değişmediği real time PCR analizi ile gösterildi. Gruplar arasında istatistiksel analizler sonucu anlamlı fark bulundu (p
Özet (Çeviri)
The aim of this study was to investigate the effect of conditioned media of osteogenic differentiated cells on undifferentiated mesenchymal stem cells, resulting from the hypothesis that these cells would lead to osteogenic differentiation, resulting in osteogenic differentiated human dental pulp derived stem cells (hDPSC) to investigate the effects of conditioned media hDPDSC. hDPSCs were characterized by subjecting them to analyzes such as flow cytometry, immunostaining and differentiation assays. CFU-F assay was performed to demonstrate clonogenic properties. CD90, CD44, CD45, CD105 and CD34 mesenchymal stem cell markers were used to characterize the cells. In our study, hDPSCs were differentiated with osteogenic differentiation medium. At the end of 14 days, differentiation was assessed by alizarin red staining, osteolmage mineralization assay kit, and RUNX2, Osteopontin and Osteonectin genes normalized to β-actin at gene expression level. Cells were collected for conditional nutrient and RNA isolation at 3 day intervals from differentiated cell lines. Collected conditional media were applied on undifferentiated hDPSCs. Cells were removed from this group at intervals of 3 days and RNA isolation was performed. On days 7 and 14, β-Gal staining was assessed to determine if the cells had entered senescence, and mitocondrial activity whether oxidative stress and damage were present in the cells during the experiment. After 14 days the experiment was terminated. The differentiation in the conditioned medium group was assessed alizarin red staining, osteolmage mineralization assay kit (Lonza, MD, USA) and RUNX2, Osteopontin and Osteonectin genes by normalizing to β-actin at gene expression level. The stem cells obtained from the dental pulp tissue were CD90 +, CD44 +, CD105 + and CD45-, CD34- by flow cytometry and immunofluorescence staining. The CFU-F assay showed that the cells were clonogenic. In addition, these cells were identified by adipogenic, osteogenic and chondrogenically differentiated adipo-red with alizarin red, safranin O and toluidine blue-positive stains. After 14 days of treatment with osteogenic medium, minerals deposited on the media were positively stained with alizarin red and osteolmage mineralization assay. Real-time PCR analysis showed that expression levels of RUNX2, Osteopontin and Osteocalcin genes were increased in cells collected at the end of 14 days after induction but not in the control group. There was statistically significant difference between the groups (p
Benzer Tezler
- Kitosan/biyomimetik bor nano hidroksiapatit doku iskelesinin diş pulpa-dentin kompleksinin rejenerasyonunda kullanılması
Pulp–dentin complex regeneration by boron doped biomimetic nano hydroxyapatite coated chitosan scaffolds
FARZIN ASGHARI SANA
Doktora
Türkçe
2016
Diş HekimliğiHacettepe ÜniversitesiNanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARLİN SERPUHİ KİREMİTCİ
- Trombositten zengin fibrin ile kombine edilmiş borik asidin dental pulpa kök hücrelerı̇nin farklılaşması ve canlılığı üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of boric acid combined with platelet rich fibrin on the difference and vitality of dental pulp stem cells
GÖZDE KOTAN
Diş Hekimliği Uzmanlık
Türkçe
2022
Diş HekimliğiBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiEndodonti Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BETÜL AYCAN UYSAL
- İnsan diş pulpası kaynaklı mezenkimal kök hücreler (DPSCS) ile meme kanseri (MCF7) kök hücreleri kokültüründe kanibalizm ve dormansi ilişkisi incelenmesi
Investigation of the relationship between cannibalism and dormancy in coculture of human dental pulp-derived mesenchymal stem cells (DPSCS) and human breast cancer (MCF7) stem cells
GİZEM İNETAŞ
- Parkinson tedavisi için nöral farklılaşmış diş pulpası kök hücreleri-enjekte edilebilir polimer modeli: in-vitro çalışmalar
A model of neural differentiated dental pulp stem cells-injectable polymer gel for treatment of parkinson's disease: In-vitro studies
MERVE ÇAPKIN YURTSEVER
Doktora
Türkçe
2016
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Influence of micropatterns on human mesenchymal stem cell fate
Mikrodesenlerin insan mezenkimal kök hücrelerinin yazgısı üzerine etkileri
ONUR HASTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
BiyomühendislikOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. VASIF NEJAT HASIRCI
PROF. DR. NESRİN HASIRCI