Geri Dön

Rekombinant HER3 antijeninin üretilmesi ve saflaştırılması

Production and purification of recombinant HER3 antigen

PDF İndir

  1. Tez No: 736147
  2. Yazar: AHMET KAAN DİKİCİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ARZU ATALAY
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Biyoteknoloji Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 80

Özet

HER3, Epidermal Büyüme Faktörü Reseptör ailesinin dört üyesinden biridir. HER1, HER2, HER3 ve HER4'ü içeren bu reseptör tirozin kinaz ailesi, birçok kanser türü için terapötik bir hedeftir. HER3'ün meme, akciğer, kolon ve pankreas gibi çeşitli insan kanserlerinde aşırı ifadesi metastatik potansiyelin artışına ve tümör gelişiminin desteklenmesine yol açarak tedavide başarısızlığın ana nedenini oluşturur. Son yıllarda yapılan birçok çalışma HER3'ün önemini göstermiş ve HER3'ü hedef alan tedavilerin geliştirilmesine yönelik çok sayıda preklinik ve klinik çalışmanın başlamasını sağlamıştır. Artan HER3 ifadesi, kanser tedavisi sırasında anti-EGFR/HER1 ve anti-HER2 terapötiklerine karşı dirence neden olur. Bu direncin üstesinden gelmek ve terapötik etkinliği artırmak için HER3 sinyal yolağı temel aşağı akış mediyatörlerinin etkili inhibisyonu gereklidir. Bu nedenle, daha fazla HER3 inhibitörü terapötik ajan geliştirme çalışmasına ihtiyaç vardır. Bu reseptörlere bağlanan monoklonal antikorlar geliştirilmiş olmasına ve bunları geliştirmeye yönelik çalışmalar halen devam etmesine rağmen, HER3'ü hedef alan bir monoklonal antikor henüz onaylanmamıştır. Anti-HER3 monoklonal antikor geliştirmeyi hedeflediğimizden, bu çalışmada ilk adım olarak rekombinant HER3 antijen olarak klonlanmış ve ifade edilmiştir. HER3 hücre dışı alanı, ligand bağlanmasının özgüllüğünü belirleyen iki sistein açısından zengin bölge (II ve IV) ve iki yan bölge (I ve III) içeren dört alt alandan (I-IV) oluşur. Escherichia coli'de 6xHis taq füzyonlu rekombinant antijeni ifade edebilmek için 1869 nükleotidlik uzunluktaki HER3 hücre dışı alanı pET-30a(+) plazmitine klonlanmıştır. Klonlama için E.coli DH5α-TR1 bakteri suşu kullanılmıştır. Klonlama doğrulaması sonrası BL21(DE3) suşunda rekombinant protein ifadesi gerçekleştirilmiştir. Bakteriyel pET30 ekspresyon sisteminde ifadesi gerçekleştirilen rekombinant HER3-ECD proteini Ni-NTA rezin kullanılarak saflaştırılmıştır. Üretilen rekombinant protein başka bir çalışmada anti-HER3 nötralizan monoklonal antikor geliştirilmesi için antijen olarak kullanılacaktır.

Özet (Çeviri)

HER3 is one of the four members of the Epidermal Growth Factor Receptor family. This receptor tyrosine kinase family, which includes HER1, HER2, HER3, and HER4, is a therapeutic target for many types of cancer. Overexpression of HER3 in various human cancers such as breast, lung, colon, and pancreas promotes tumor development, increases metastatic potential and is the main cause of treatment failure. In recent years, many studies indicated the importance of HER3, and numerous preclinical and clinical studies for the development of HER3-targeted treatments have begun. Increased HER3 expression causes resistance to anti-EGFR/HER1 and anti-HER2 therapeutics during cancer treatment. Effective inhibition of key downstream mediators of the HER3 signaling pathway is required to overcome this resistance and increase therapeutic efficacy. Therefore, more HER3 inhibitor therapeutic agent development studies are required. Although monoclonal antibodies binding to these receptors have been developed and studies to improve them are currently in progress, a monoclonal antibody targeting HER3 has not yet been approved. Since we aimed to develop an anti-HER3 monoclonal antibody, we first cloned and expressed recombinant HER3 as antigen. The HER3 extracellular domain consists of four subdomains (I-IV), which include two cysteine-rich regions (II and IV) and two flanking regions (I and III) that determine the specificity of ligand binding. The 1869 nucleotide full-length HER3 extracellular domain was cloned into pET-30a(+) plasmid, in order to express the recombinant antigen fused to 6xHis taq in Escherichia coli. E.coli DH5α-TR1 bacterial strain was used for cloning. After verification of cloning, recombinant protein was expressed in BL21(DE3) strain. Recombinant HER3-ECD protein expressed in the bacterial pET30 expression system was purified using Ni-NTA resin. The produced recombinant protein will be used as an antigen for the development of anti-HER3 neutralizing monoclonal antibody in the further study.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    164278

    Farelerde sepsis modelinde rekombinant insan aktive protein C tedavisinin apoptozis üzerine etkisi

    Effects of recombinant human activated protein C apoptosis at experimental sepsis model in mice

    LEVENT SEPİT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    Göğüs HastalıklarıCelal Bayar Üniversitesi

    Göğüs Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. AYŞIN ŞAKAR

  2. Tez No

    115443

    Malign solid tümörlü çocuklardaki aneminin tedavisinde rekombinant insan eritropoetini kullanımının etkinlik ve güvenilirliğinin araştırılması

    Recombinant human erythropoietin for the treatment of anemia in children with solid malignant tumors

    METİN BİÇER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıklarıİstanbul Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. İNCİ YILDIZ

  3. Tez No

    909171

    Koyunlarda gangrenöz mastitise karşı farklı tipte aday aşıların geliştirilmesi

    Development of different types of candidate vaccines against gangrenous mastitis in sheep

    CANAN KEBABÇIOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Veteriner HekimliğiSelçuk Üniversitesi

    Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN ERGANİŞ

    DOÇ. DR. ASLI BALEVİ

  4. Tez No

    80863

    Rekombinant insan eritropoetini uygulanan hemodiyaliz hastalarında antihipertansif ilaç tedavisinin serum eritropoetin düzeylerine etkisi

    The Effect of antihypertensive drug therapy on serum erythropoietin levels in hemodialysis patients on recombinant human erythropoietin therapy

    AYÇE ÇELİKER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyofarmasötik ve Farmokokinetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. LEVENT ÖNER

  5. Tez No

    82971

    Single step conversion of starch to ethanol by recombinant saccharomycess cerevisiae YPG/AB

    Rekombinant saccharomycess cerevisiae YPG/AB ile tek aşamalı olarak nişastadan etanol üretimi

    BAŞAK ELİF SAYGILI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    Kimya MühendisliğiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BETÜL KIRDAR

Geri Dön