Geri Dön

Sodyum florür (NAF) uygulanan renal ve osteoblast hücre hatlarında bazı vitaminlerin apoptozis ve DNA hasarı üzerine etkileri

The effects of some vitamine supplements on apoptosis and dna damage on sodium fluoride (NAF) treated renal and osteoblast cell lines

PDF İndir

  1. Tez No: 460345
  2. Yazar: VEYSEL YÜKSEK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SEMİHA DEDE, DOÇ. DR. MEHMET TAŞPINAR
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Genetik, Biochemistry, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Yüzüncü Yıl Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Bu çalışma, antioksidan ve koruyucu özellikleri olan vitaminlerin (A, D, E, C), 24 saatlik IC50 oranında NaF uygulanan NRK-52E ve hFOB 1.19 hücre hatlarında, bazı apoptotik belirteçlerinin ekpresyonu ve translasyonu üzerine etkilerinin araştırılması amacıyla planlandı. Hücreler in vitro koşullarda haftada iki-üç kez düzenli pasajları yapılarak çoğaltıldı. MTT ile NaF'ün IC50 değeri ve vitaminlerin toksik olmayan dozları belirlendi. Hücreler 96'lık kültür plaklarına 104, flasklara ise 106 olacak şekilde ekimi yapıldı. Hücre hatlarında gruplar ELISA ve real time-PCR için kontrol, NaF ve NaF+ vitaminler olarak belirlendi. MTT % proliferasyon için ise dozlar kontrol, NaF ve NaF+vitaminler olarak belirlendi. Biyokimyasal analizler için hücreler 24 saat inkübasyonu takiben tripsinasyon ile toplanıldı ve dondur/çöz yöntemiyle parçalanarak analize hazırlandı. mRNA izolasyonu için 12 saat takiben hücreler tripsinasyon yöntemiyle toplandı ve manuel yöntemiyle mRNA izole edildi. Kaspaz 3, 8 ve 9, 8-OHdG ve M30 miktarları ELISA yöntemiyle belirlendi. Kaspaz 3, 8 ve 9 Revers transkriptaz-PCR yöntemiyle cDNA elde edildi. Real time-PCR yöntemiyle hedef gen DNA'ları çoğaltıldı. MTT çalışmalarında NaF+vitamin verilen gruplardaki hücre proliferasyonun NaF verilen tüm gruplardan daha fazla olduğu tespit edildi, NRK- 52E hattı çalışması sonucunda; NaF IC50 değeri olarak belirlenmesine rağmen, apoptozisi yeterince tetiklemediği düşündürmektedir. Bunun için görülen hücre ölümünde apoptotik yolaklardan daha başka mekanizmaların da etkin hale geldiği düşünülmektedir. ELISA ile tespit edilen apoptozis parametrelerinden olan kaspaz enzim konsantrasyonlarının, gen ekspresyonu ile uyumlu olmadığı görüldü. hFOB 1.19 hücre hattında IC50 düzeyinde hücre ölümüne yol açan NaF düzeyinin tespitinden sonra, ortaya çıkan hücre ölümünün NaF ve vitamin A tek başına verildiğinde apoptozisi arttırdığı, her ikisinin birlikte verilmesi ile de azaldığı tespit edildi. Sonuç olarak apoptotik kaspaz 3 ve 8 enzimlerinin arttığı, apoptotik M30 proteinin ise NaF+vitamin D ve vitamin C gruplarında arttığı, NaF grubunda ise ilginç bir şekilde azaldığı tespit edildi. Bu verilerin ışığında, NaF'e bağlı hücre ölümünde en geçerli ve etkili mekanizma ve bu mekanizma üzerinde vitaminlerin inhibe-aktive edici etkilerinin aydınlatılmasında, farklı doz, süre ve analiz metotları kullanılarak araştırmalar yapılması düşünülmektedir.

Özet (Çeviri)

This study was planned to investigate the effects of antioxidant and preservative vitamins (A, D, E, C) on the expression and translasyon of some apoptotic markers in the NRK-52E and hFOB 1.19 cell lines treated with NaF. NRK-52E and hFOB 1.19 cells were cultured in vitro by conducting regular pasage twice or three times weekly. IC50 values of NaF and non-toxic doses of vitamins were determined by which MTT method. Cells were subcultured in 96-multi-well microtiter plateses (1×104cells) and flasks (1×106cells). For ELISA and real time-PCR working groups were identified as NaF (5000 μM for hFOB 1.19, 6000 μM for NRK-52E) and NaF+vitamins in the cell lines. For biochemical analyzes, the cells were harvested by trypsinization followed by incubation for 24 hours and lysed by freeze/thaw method. The cells were collected by trypsinization following 12 hours for RNA isolation. Quantity of Caspase 3, Caspase 8 and Caspase 9, 8-OHdG and M30 were determined by ELISA. Caspase 3, Caspase 8 and Caspase 9 cDNA was obtained by revers transkriptaz-PCR method. Targets gene DNAs were amplified by real time- PCR. In MTT studies, it was determined that the cell proliferation in the NaF+vitamints treated groups was greater than in all NaF-treated groups. As a result of the NRK-52E cells, although determined as the NaF IC50 value, it suggests that apoptosis is not triggered adequately. This suggests that other mechanisms have become effective in cell death, but apoptotic pathways. Caspase enzyme concentrations determined by ELISA were found to be incompatible with Real Time-PCR outcome. After detection of the NaF level leading to cell death at the IC50 level in the hFOB 1.19 cell line. It was found that the resulting cell death increasing apoptosis when administered to NaF and vitamine A alone, both of which decreased with co-administration. As a result, apoptotic caspase 3 and 8 enzymes were increased and apoptotic M30 protein was increased in NaF + vitamin D and vitamin C groups and interestingly decreased in NaF group. In the light of this data, it is considered to investigate the most valid and effective mechanism of NaF-induced cell death and the inhibitory-activating effects of vitamins on this mechanism, using different doses, time and analysis methods

Benzer Tezler

  1. Tez No

    843810

    Sodyum florür ve stronsiyum klorid solüsyonlarının tek ve kombine kullanımlarının başlangıç mine lezyonlarının remineralizasyonuna etkilerinin değerlendirilmesi

    Evaluation of the effects of single and combined use of sodium fluoride and strontium chloride solutions on the remineralization of initial enamel lesions

    ÇİÇEK KORKMAZ TORUN

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Diş HekimliğiAnkara Üniversitesi

    Çocuk Diş Hekimliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP ÖKTE

  2. Tez No

    424577

    Dentin hassasiyeti tedavisinde taşıyıcı esaslı sistemlerin geliştirilmesi

    Development of delivery systems for treatment of dentin hypersensitivity

    SAMET TOSUN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Diş HekimliğiGaziantep Üniversitesi

    Endodonti Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. ABDÜL SEMİH ÖZSEVİK

    PROF. DR. TAYFUN ALAÇAM

  3. Tez No

    666705

    Kendiliğinden birleşen peptidlerin kavitasyonsuz arayüz çürük lezyonlarının ilerlemesine etkisi: Randomize klinik çalışma

    Effect of self-assembling peptides on the progression of non-cavitated proximal caries: Randomized clinical trial

    GİZEM GENÇ DANIŞMAN

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Diş Hekimliğiİzmir Katip Çelebi Üniversitesi

    Pedodonti Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MERVE AKÇAY

  4. Tez No

    722414

    Tavuk embriyolarında sodyum florür bileşiminin nöral tüp gelişimi üzerine etkileri

    Effects of sodium fluride compound on neural tube development in chicken embryo

    MAZHAR MAMMADOV

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    NöroşirürjiSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SELİN TURAL EMON

  5. Tez No

    669166

    Radyasyona maruz bırakılan minenin remineralizasyon ajanları uygulaması sonrası fiziksel özellikleri ve mineral içeriğindeki değişiminin değerlendirilmesi

    Evaluation of the changes in physical properties and mineral content of enamel exposed to radiation after treating with remineralization agent

    MERVE PELİN DUR

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Diş HekimliğiAtatürk Üniversitesi

    Restoratif Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİLGÜN SEVEN

    DR. ÖĞR. ÜYESİ NESLİHAN ÇELİK

Geri Dön