Apoptosis marker'ı olan annexina5'e karşı poliklonal antikor gelişimi
Development of polyclonal antibodies against the apoptosis marker annexina5
- Tez No: 467442
- Danışmanlar: PROF. DR. EMİNE SÜMER ARAS
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 186
Özet
Apoptosis genel olarak, çok hücreli organizmalarda görülür ve genomik DNA'nın hücre çekirdeği içerisindeki bozulması şeklinde karakterize olur. Apoptotik sinyal, hücreyi ''ölüme'' sürükleyebilecek bir strese karşı cevap olarak ortaya çıkar. Bu tip DNA bozulmaları bir çok fizyolojik işleyiş ile olabileceği gibi, bir çok anti-kanser ajanın sitotoksik etkisi ile de meydana gelebilir. Bu çalışmada apoptosis, hücre hatlarında Etoposid tarafından tetiklenmiştir ve AnnexinA5 ile doğrulanmak amaçlı kontrol edilmiştir. AnnexinA5, bütün hücre ölümlerinde hücre yüzeyinde ifadelenen fosfotidilserinleri tanıma özelliğinden dolayı, apoptosis tanısı için önemli bir görev teşkil etmektedir. Işık mikroskobisinde Etoposid'in Apoptosis'i tetiklediğini tespit etmek için hücre hatlarına belirli konsantrasyonlarda verilen Etoposid, 24 saatlik bir süre içerisinde aralıklı olarak kontrol edilmiştir. Apoptosis'in bu hücre hatlarında gerçekleştiğini doğrulamak için, AnnexinA5'in hayvan immünizasyonu için saflaştırılma ve poliklonal antikor üretim çalışmaları yapılmıştır. AnnexinA5'in saflaştırma işleminin ardından, Balb/C dişi fareler üzerinde immünizasyon gerçekleştirilmiştir. Balb/C dişi farenin karnında oluşan ''ascites'' sıvısı toplanmış, hedef antijenik bölgeye spesifik antikor üretildiğini göstermek için ascites sıvısı ve hücre hatlarından alınan örnekler western blot deneylerinde primer antikor olarak kullanılmıştır. Western blot sonuçlarında ascites sıvısı içerisindeki antikorların, Etoposid ile muamele edilmiş hücre hatlarından alınan antijen örneklerine etkili bir şekilde bağlandığı görülmüştür. Sonuçlar dahilinde biyoteknolojik yaklaşımlar kullanılarak poliklonal antikor üretim teknolojisi başarılı olarak uygulanmış ve üretilen antikorlar ile hücre hatlarında Etoposid'in Apoptosis'i etkin bir şekilde tetiklediği gösterilmiştir.
Özet (Çeviri)
Apoptosis is general pathway of cell death in eukaryotes, characterized by internucleosomal digestion of genomic DNA. Apoptotic signal is produced against a stress condition which may lead the cell to ''death''. Such DNA digestion can be induced by both physiological stimuli and cytotoxic treatment with many anticancer agents. In these studies, apoptosis was induced in cell cultures by Etoposide and AnnexinA5 is used to detect apoptotic cells. Hence AnnexinA5 can be used as a sensitive probe for phosphatidylserine exposure upon the cell membrane in all of the cell death mechanisms, this protein plays a central role to understand apoptosis. By treating cell cultures with certain concentrations of Etoposide in a 24h period, we aimed to detect if Etoposide induces Apoptosis or not. To prove that Apoptosis was triggered in these cell cultures, we performed purification and polyclonal antibody production assays for immunization of AnnexinA5 on mice. After purificiation of AnnexinA5, we performed immunization of Balb/C female mice. After harvesting ascites from female Balb/C mice' abdomen, we used samples from cell cultures and ascites from mice as primer antibody in Western Blot assay to show the production of spesific antibody for antigenic target site. According to the Western Blot results, antibodies from the ascites successfully bind to antigenic samples from cell cultures treated with Etoposide. These results demonstrate the involvement of AnnexinA5 in Etoposide treated apoptotic cells and suggest mechanisms of annexin family via production of polyclonal antibodies by biotechnology techniques.
Benzer Tezler
- Geleneksel yöntemlerle hazırlanan sedir katranının antikanser etkisinin incelenmesi
The investigation of anticancer effect of cedar tar prepared by traditional methods
KADİR EĞİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaHarran ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ İSMAİL KOYUNCU
- Possible involvement of apoptosis during neural transdifferentiation of bone marrow derived human mesenchymal stem cells by N3 cytokine combination
Kemik iliği kökenli insan mezenkimal kök hücrelerinin N3 sitokin kombinasyonu ile nöral farklılaşması boyunca apoptozun olası ilişkisi
GÜLSÜM ARIKAN
- Deuterium'u azaltılmış suyun in vitro fibrinojen oksidasyonuna antioksidan ve mononükleer hücrelere apoptotik etkisinin incelenmesi
Antioxidant effect of deuterium depletion on in vitro fibrinogen oxidation and its effect on apoptosis of mononuclear cells
BURCU ERSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
BiyokimyaMarmara ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. K. TURAY YARDIMCI
- Kolon kanseri hücreleri üzerine timokinon ve 5-fluorouracilin terapotik etkisinin in vitro ve in vivo araştırılması
In vitro and in vivo investigation of the therapeutic effect of thymoquinone and 5-fluorouracil on colon cancer cells
ERAY METİN GÜLER
Doktora
Türkçe
2019
BiyokimyaBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDÜRRAHİM KOÇYİĞİT
- Nöroblastom ve hippo sinyal yolağı
Neuroblastoma and hippo signaling pathway
SELEN KUM ÖZŞENGEZER
Doktora
Türkçe
2024
OnkolojiDokuz Eylül ÜniversitesiTemel Onkoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HATİCE NUR OLGUN
PROF. DR. ZEKİYE SULTAN ALTUN
