Geri Dön

Plasmodıum falciparum apical membran antijen 1 (AMA1)'in klonlanması

Cloning of plasmodium falciparum apical membran antijen 1 (AMA1)

PDF İndir

  1. Tez No: 473772
  2. Yazar: FATMA DOĞAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İZZET ŞAHİN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Parazitoloji, Parasitology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 68

Özet

Dünyada en fazla ölüme sebep olan paraziter hastalık olan sıtma proje konusu olarak seçilmiş ve sıtmaya karşı aşıgeliştirilmesi amaçlanmıştır. DSÖ' nün 2016 raporunda, 2015 yılında dünya genelinde 212 milyon sıtma vakası görülmüştür.2015 yılında, dünya çapında 429 000 kişinin sıtma nedeniyle yaşamını yitirdiği tahmin edilmiştir.Plasmodium' ların insandaenfeksiyona neden olan türleri; Plasmodium falciparum, P.ovale, P.malaria, P.vivax ve P.knowlesi'dir. İnsan, Plasmodium spp.'nin sporozoitlerini taşıyan dişi anofelin kan emmesiyle enfekte olur. Kan dolaşımıyla karaciğere gelip hepatositlere giren sporozoitler burada önce trofozoit, sonrada merozitlere dönüşürler (egzo-eritrositer şizogoni). Merozoitlerle dolu hepatositlerin parçalanması ile serbest kalan merozoitler kana karışarak eritrositleri istila ederler. Eritrositlerde çoğalan (eritrositer şizogoni) parazitler periyodik olarak eritrositlerin parçalanmasına neden olurlar ve bunun sonucu çeşitli semptomların görüldüğü ''Klinik Malaria'' ortaya çıkar. Parazitin insanda geçen yaşam döneminde farklı yaşam formlarında bulunduklarından, sıtma ile mücadele amacıyla bu yaşam formlarına yönelik aşı geliştirme çalışmaları tasarlanmıştır. Ülkemizde ilk defa yapılacak olan bu çalışma ile P.falciparumAMA1 genin klonlanması amaçlanmıştır. Çalışmada; PCR ve optimizasyonu, DNA ekstraksiyonu ve klonlama basamakları uygulanmıştır. P.falciparum genomik DNA'sı elde edildikten sonra spesifik primerler kullanılarak AMA1 geni elde edilmiştir.P.falciparumAMA1 genipJET 1.2vektörüne klonlanmış ve kompetan E.coli hücrelerine transformasyonu yapılarak çoğaltılmıştır. PCR screening ile pozitifliği doğrulandıktan sonra kolonilerden miniprep yapılmıştır. P.falciparum AMA1 DNA'sını içeren rekombinant plazmitler saflaştırılmıştır. Klonlamanın doğruluğunun kesinleşmesi için P. falciparum AMA1 geni için DNA dizi analizi yapılmıştır. Sonuç olarak; çalışma ileklonlanan P.falciparum AMA1 geniDNA aşısı olarak kullanılabilecektir. Elde edilen rekombinant plazmit tek başına veya farklı antijenlerle ve immun sistemi stimüle edici adjuvantlarla kombine edilerek etkin aşıların elde edilmesine çalışılabilecektir.

Özet (Çeviri)

Malaria, the parasitic disease that caused the most deaths in the world, was chosen as the project theme and the aim was to develop a vaccine against malaria. There were 212 million cases of malaria worldwide in 2015 according to WHO's 2016 report. In 2015, it has been reported that 429 000 malaria deaths worldwide are estimated. Plasmodium species causing human infection are P. falciparum, P. ovale, P. malaria, and P. vivax and P. knowlesi. The human is infected by blood sucking of the female Anofel carrying sporozoites of Plasmodium spp. The sporozoites that come into the liver with blood circulation and enter into the hepatocytes first turn into trophozoite later merozoites (exo-erythrosis schizogony). With the degredation of hepatocytes, the released merozoites infiltrate into the blood and invade erythrocytes. Parasites that proliferate in erythrocytes (erythrocytic schizogony) periodically cause the degredation of erythrocytes, which results in clinical malaria which various symptoms are seen.Parasites are found in different life forms during the human stage.Vaccine development studies for these life forms have been designed to combat malaria.This work, which was done for the first time in our country, aims to clone P.falciparum AMA1 genome. The method was used in the study that PCR and optimization consists of DNA extraction and cloning steps. Once the P. falciparum genomic DNA has been obtained then the AMA1 gene was obtained using specific primers. Plasmodium falciparum AMA1 gene was cloned into CloneJET vector then was growed up by transformation into competent E. coli cells. Positive clone was confirmed by PCR screening and were performed miniprep. The recombinant plasmids, containing P. falciparum AMA1 gene region were purified. DNA sequence analysis was performed for Plasmodium falciparum AMA1 gene to confirm the correctness of the cloning. The cloned P. falciparum AMA1 gene may be used as a DNA vaccine after this study. The recombinant plasmid generated may be combined with the immunostimulatory adjuvants alone or with different antigens to obtain effective vaccines.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    150167

    Plasmodium falciparum'da laktat dehidrogenaz enziminin aktif bölge halkası amino asitlerinin site-directed mutagenez çalışmaları ile analizi

    Analysis of active site loop amino acids of enzyme Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase by site-directed mutagenesis studies

    VENHAR ÇELİK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    BiyolojiFırat Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. DİLEK TURGUT BALIK

  2. Tez No

    296914

    Plasmodium falciparum'un laktat dehidrogenaz enziminin saflaştırılması ve analizi

    Purification and analysis of Plasmodium falciparum lactate dehydrogenase enzyme

    ASLIHAN HURİ BALCIOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. DİLEK TURGUT BALIK

  3. Tez No

    527666

    Expression, production and characterization of plant produced deglycosylated Pfs48/45 variants

    Bitkiden üretimli deglikozile Pfs48 / 45 varyantlarının ifadesi, üretimi ve karakterizasyonu

    BURCU GÜLEÇ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  4. Tez No

    314516

    Bazı antimikrobiyal peptidlerin plasmodium falciparum'a karşı etkinliğinin in vitro olarak saptanması

    Detection of the in vitro activity of some antimicrobial peptides against plasmodium falciparum

    EMRAH RUH

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    MikrobiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SİBEL ERGÜVEN

  5. Tez No

    761903

    Sıtma tanılı hastaların arşivlenmiş örnekleri kullanılarak PCR yöntemi ile plasmodium falciparum genetik tür tayinin yapılması ve direnç genlerinin araştırılması

    Determination of plasmodium falciparum genetic species by PCR method using archived samples of patients diagnosed with malaria and investigation of resistance genes

    KÜBRA DİLAN AVCI

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik MikrobiyolojiSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KADRİYE KART YAŞAR

Geri Dön