Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) germ hücre izolasyonu üzerine bir çalışma
A study on the isolation of germ cell in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
- Tez No: 487865
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYGÜL EKİCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Su Ürünleri, Aquatic Products
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Yetiştiricilik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 77
Özet
Bu çalışma, ülkemiz iç sularında yetiştiriciliği en fazla yapılan tür olan gökkuşağı alabalığının (Oncorhynchus mykiss) testis dokusundan percoll gradient santrifüj yöntemi ile erken evre germ hücre izolasyonunun gerçekleştirilmesi amacıyla yapılmıştır. Çalışmada İstanbul Üniversitesi Su Bilimleri Fakültesi Sapanca İçsu Ürünleri Üretimi Araştırma ve Uygulama Biriminden temin edilen ortalama 24,76±1,34 cm boy uzunluğunda ve ortalama 171,9±29,10 gram ağırlığındaki 15 adet erkek gökkuşağı alabalığı kullanılmıştır. Balıklara ait testis dokusu enzimatik ayrıştırma amacıyla fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) içerisinde % 0.5 trypsin kullanılarak 2 saat süre ile inkübasyona tabi tutulmuştur. İnkübasyın sonrası örnekler 50 µm'lik filtreden geçirilmiş ve 40 µg/ml Deoxyribonuclease I (DNaz I) ve %1 Bovin Serum Albumin (BSA) eklenmiştir. DNaz, ölü hücrelerden Deoksiribo Nükleik Asitin (DNA) serbest bırakılmasından dolayı ortaya çıkan hücre süspansiyonunun pıhtılaşmasını engellemek ve BSA enzim aktivitesinin durdurulması amacıyla eklenmiştir. Filtrasyon işleminden sonra üç farklı percoll gradient grubu (%45 - %10, %50 - %10 ve %55- %10) oluşturulmuştur. Bu işlem sonrası oluşan herbir katmandaki örnek Olympus CX41 mikroskopta incelenmiştir. Bu inceleme sonucunda santrifüj sonrası oluşan en üst katmanda; debris ve spermatidler, orta katmanda erken evre germ hücreleri ve az miktarda spermatidler, dip katmanda yer alan pelette ise eritrosit ve yoğun olarak spermatidler tespit edilmiştir. Orta katmanda tespit edilen erken evre germ hücreleri DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp) box Polypeptid 4 Primer Antikoru (DDX4), anti-tavşan IgG- keçide üretilen Floresin İzotiyosiyanat Sekonder Antikoru (FITC) ve 4,6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI) ile immunofloresan işaretlenmesi sonucunda yalnızca DAPI ile boyanan hücrelere ait görüntüler tespit edilmiştir. DAPI tüm testiküler hücrelere ait nukleusları boyama özelliğine sahip olduğundan hücreler arasında spesifik bir ayrım elde edilememiştir. Testis dokusundan alınan histolojik kesitlerin Hematoksilen-Eosin ile boyanması sonucunda, spermatogonya Tip A ve B ve spermatid hücreleri tespit edilmiştir. Doku kesitlerinin floresan boyanması sonucunda ise primer antikor (DDX4) ve sekonder antikor (FITC) ile işaretlenmiş erken evre germ hücreleri tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
This study was carried out to perform early stage germ cell isolation by percoll gradient centrifugation from the testis tissue of the rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) which is the most cultivated species in the inland waters of our country. A total of 15 male rainbow trout with an average length of 24,76 ± 1,34 cm and an average weight of 171,9 ± 29,10 grams obtained from the Sapanca Inland Water Products Research and Application Unit of Faculty of Aquatic Sciences in Istanbul University were used in the study. Testicular tissue of fishes was incubated with 0.5% trypsin in phosphate buffered saline (PBS) for 2 hours for enzymatic separation. After incubation, samples were passed through a 50 μm filter and 40 μg / ml Deoxyribonuclease I (DNase I) and 1% Bovine Serum Albumin (BSA) were added. DNase was added to prevent clotting of the cell suspension resulting from the release of Deoxyribose Nucleic Acid (DNA) from dead cells and BSA was added to stop the enzyme activity. After filtration, three different percoll gradients (45% - 10%, 50% - 10% and 55% - 10%) were formed. The sample on each layer after this procedure was examined under the Olympus CX41 microscope. As a result of this examination, the top layer formed after centrifugation; lipids, debris and spermatids, early-stage germ cells in the middle layer, and erythrocytes and spermatids in the bottom layer of the pellets. The early stage germ cells detected in the middle layer were stained with primer antibody DEAD (Asp-Glu-Ala-Asp) box Polypeptid 4 (DDX4), secondary antibody anti-rabbit IgG (whole molecule) FITC antibody produced in goat, and 4,6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI). Immunofluorescence staining showed only staining with DAPI. Since DAPI has staining properties for all testicular cell nuclei, no specific discrimination between cells has been obtained. Hematoxylin-eosin staining of histological sections from testicular tissue revealed spermatogonia types A and B and spermatid cells. Fluorescent staining of tissue sections revealed early stage germ cells labeled with the primary antibody (DDX4) and the secondary antibody (FITC).
Benzer Tezler
- Gökkuşağı alabalığında (oncorhynchus mykiss w.1792) bireysel ve grup markalaması yöntemlerinin denenmesi üzerine bir araştırma
A Research on individual and group marking techniques in rainbow trout (oncorhynchus mykiss w.1792)
SERAP SAMSUN
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Su ÜrünleriOndokuz Mayıs ÜniversitesiSu Ürünleri Avlama Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İBRAHİM ERKOYUNCU
- Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) vibriosis'e karşı aşı uygulanmasının bağışıklık sistemine etkisi
The effect of vaccination against vibriosis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) immune system
SEÇİL EKİCİ
Doktora
Türkçe
2010
Su ÜrünleriSüleyman Demirel ÜniversitesiSu Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZNUR DİLER
- Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) oksitetrasiklin ile indüklenen toksisiteye karşı polenin koruyuculuğu
Protectiveness of pollen against toxicity by oxytetracycline in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
ABDULLAH EMRE SAFİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Su ÜrünleriFırat ÜniversitesiSu Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SERPİL MİŞE YONAR
- Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss) antimikrobiyal etkili fungal metabolitlerin TNF-α ve IL-1β gen ekspresyonları üzerine etkisi
Effects of fungal metabolites with antimicrobial activity on TNF-α and IL-1β gene expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
BETÜL MELİKE OĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Su Ürünleriİzmir Katip Çelebi ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MUHAMMET ALTUNOK
- Investigation of the probiotic effects of lactobacillus sakei 2-3 and Candida zeylanoides y12-3 strains in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, walbaum 1792)
Gökkuşağı alabalığında (Oncorhynchus mykiss, walbaum 1792) lactobacillus sakei 2-3 ve Candida zeylanoides y12-3 suşlarının probiyotik etkilerinin araştırılması
MOHANAD DHEYAA TAHA TAHA
Doktora
İngilizce
2024
Su ÜrünleriIsparta Uygulamalı Bilimler ÜniversitesiSu Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BEHİRE IŞIL DİDİNEN