Biyofiziksel çalışmalar için DsRed (mCherry) floresan proteinin Escherichia coli'de üretilmesi
Expression of DsRed (mCherry) fluorescence protein in Escherichia coli for biophysical studies
- Tez No: 496569
- Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biochemistry, Bioengineering, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 53
Özet
Yeni bir biyoteknolojik çalışma alanı olarak görülen floresan proteinlerin keşif ve uygulama serüveni on yıllar öncesine dayanmaktadır. İlk keşfedilen ve ilk defa ekspresyonu yapılan floresan protein olan Yeşil Floresan Protein 'den (GFP) sonra birçok floresan protein bulunmuş ve üretimi yapılmıştır. Birçok araştırma sahasında geniş bir kullanım alanı olan floresan proteinlerin yeni keşfedilenlerinden birisi de Kırmızı Floresan Proteindir (RFP). Bu çalışmamızda daha ileri çalışmalarda kullanmak üzere Kırmızı Floresan Proteinin (RFP) bir varyantı olan DsRed (mCherry) floresan proteininin uygun bir vektör sistemi kullanılarak Escherichia coli ekspresyon sisteminde üretimi hedeflenmiştir. Çalışmamızda ilk olarak mCherry proteinini kodlayan gen biyoinformatik çalışmalar ile tespit edilerek ticari olarak sentezlettirilmiştir. Bir vektör içerisinde gelen gen, farklı restriksiyon enzimleriyle kesilerek izole edilmiş ve sonrasında ligasyon ile oluşturulan pET28mCherry vektörü kullanılarak E coli DH5α hücreleri transformasyona uğratılmıştır. Rekombinant plazmitlerin doğrulama kesimleri yapıldıktan sonra mCherry proteininin sentezlenebilmesi için E. coli BL21 pLysE kompetent hücreleri transformasyona uğratılmıştır. Son olarak da expresyonu gerçekleştirilen mCherry proteini E. coli hücrelerinden afinite kolon kromotografisi kullanılarak saflaştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
The discovery and application adventure of fluorescent proteins as a new biotechnological research field goes back decades. After the Green Fluorescent Protein (GFP), which was the first discovered and expressed, a lot of different colour fluorescent proteins has also been found and produced. Red Fluorescent Protein (RFP) which is one of the recently discovered fluorescent proteins that has a very wide usage in research. The aim of this study that producing DsRed (mCherry) fluorescent protein, which is a variant of Red Fluorescent Protein (RFP) in Escherichia coli expression system using a suitable vector for further investigation. In this research, the gene encoding for mCherry fluorescent protein was first modified by bioinformatical tools and then commercially synthesized. The mCherry gene that arrived in a plasmid vector was first isolated by cutting with different restriction enzymes and E. coli DH5α cells were transformed using ligated pET28mCherry vector. The confirmation of the recombinant mCherry plasmids have been made by restriction enzyme digestion. E. coli BL21 pLysE competent cells was transformed using pET28mCherry vector for mCherry protein production. Finally, the expressed mCherry protein was purified from the E. coli cells using affinity column chromatography.
Benzer Tezler
- Characterization of A. thaliana G-protein gamma subunit (AGG2) and investigation of DTT effect on its oligomeric state
A.thaliana G-proteini gama altbirimi (AGG2)nin karakterizasyonu ve DTT nin oligomerik durumu üstüne etkisinin incelenmesi
ANIL AKTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
BiyokimyaSabancı ÜniversitesiBiyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEHRA SAYERS
- Live with nature to live in nature: A public participatory mapping of place values of Atatürk Urban Forest
Doğada yaşamak için doğa ile yaşa: Atatürk Kent Ormanı yer değerlerinin kamu katılımlı haritalanması
KOSAR AZARMIKHOSROSHAHI
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Peyzaj Mimarlığıİstanbul Teknik ÜniversitesiPeyzaj Mimarlığı Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ELİF KISAR KORAMAZ
- Biophysical and functional characterization of wheat metallothionein at molecular level
Moleküler düzeyde buğday metallothionein'nin biyofiziksel ve fonksiyonel karakterizasyonu
FİLİZ YEŞİLIRMAK
Doktora
İngilizce
2008
BiyofizikSabancı ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HİKMET BUDAK
PROF. DR. ZEHRA SAYERS GÖKHAN
- Mimicking the tumor microenvironment in lab-on-a-chip devices
Yonga-üstü-laboratuvar aygıtlarında tümör mikroçevresinin taklit edilmesi
MÜGE BİLGEN
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Biyoteknolojiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüBiyoteknoloji ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DEVRİM PESEN OKVUR
DR. ÖĞR. ÜYESİ NUR BAŞAK SÜRMELİ
- Development and structural determination of antiangiogenic recombinant antibody structures for cancer treatment
Kanser tedavisine yönelik antianjiogenik rekombinant antikor yapılarının geliştirilmesi ve yapısal tayini
MELİS DENİZCİ ÖNCÜ
Doktora
İngilizce
2022
Biyomühendislikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
DR. AYLİN ÖZDEMİR BAHADIR