Geri Dön

Fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT) enzimini kodlayan siyanobakteriyel genlerin klonlanması, ekspresyonu ve enzim aktivitelerinin analizi

Cloning and expression of cyanobacterial genes that encode phosphinothricin N-acetyltransferase (PAT) enzyme

PDF İndir

  1. Tez No: 507284
  2. Yazar: EBRU YILMAZ
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ASLIHAN KURT KIZILDOĞAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Ziraat, Biotechnology, Agriculture
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 108

Özet

Fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT), fosfinotrisin (PPT) içeren herbisitlere direnç sağlamak amacıyla bitkilerde ekspresyonu yapılan bakteri kökenli bir enzimdir. Transgenik bitkilerde fosfinotrisin N-asetiltransferaz (PAT) proteininin ekspresyonu, bir herbisit olan glufosinata karşı tolerans kazandırmaktadır. Siyanobakterilerde bu enzimin var olduğu dizi analizleri ile tespit edilmişse de potansiyel PAT aktiviteleri henüz belirlenmemiştir. Bu çalışmada Anabaena sp. PCC7120, Synechocystis sp. PCC6803 ve Gloeobacter violaceus sp. PCC7421 suşlarında, varsayımsal (putatif) olarak PAT enzimini kodladığı belirlenen sırasıyla alr4468, sll1647 ve glr2526 genleri His-Tag etiketi içeren pET28a+ ifade vektörüne klonlanmıştır. Ardından, rekombinant vektörler proteaz içermeyen E. coli BL21(DE3) hücrelerine aktarılmışlardır. 1 mM IPTG ile indüklenen rekombinant E. coli BL21 kültürlerinde rekombinant Alr4468 (rAlr4468) veSll1647 (rSll1647) proteinlerinin ifadeleri sağlanırken rekombinant Glr2526 (rGlr2526)'nin ifadesi gerçekleştirilememiştir. En yüksek in vitro PAT aktiviteleri IPTG ile indüklenmiş hücre özütlerinin kullanıldığı enzim çalışmalarında elde edilmiştir ve kontrollere kıyasla sırası ile 3.47 (rAlr4468 için) ve 2.53(rSll1647 için) kat daha yüksek bulunmuştur. Sonuç olarak, yüksek yapılı bitkilerle benzer fizyolojik özelliklere sahip olan siyanobakterilere ait alr4468 ve sll1647 genleri, gelecek çalışmalarda herbisitlere dirençli yerel transgenik bitkilerin oluşturulmasında kaynak olarak kullanılabilecektir.

Özet (Çeviri)

Phosphinothricin N-acetyltransferase (PAT) is a bacterial enzyme that is expressed in plants to provide resistance to herbicides containing phosphinothricin (PPT). The expression of the phosphinothricin N acetyltransferase (PAT) protein in transgenic plants confers tolerance to glufosinate, a herbicide. Although this enzyme in cyanobacteria has been identified by sequence analysis, PAT activities have not yet been determined. In this study, putative PAT enzyme encoding genes alr4468, sll1647 and glr2526 in Anabaena sp. PCC7120, Synechocystis sp. PCC6803 and Gloeobacter violaceus sp. PCC7421 strains, respectively, were cloned to His-Tagged pET28a+ expression vector. The recombinant vectors containing the respective genes were was introduced to protease free E. coli BL21 cells. While Alr4468 and Sll1647 were successfully expressed in recombinant E. coli BL21 cultures induced by 1 mM IPTG, recombinant Glr2526 expression could not be achieved. The highest in vitro PAT activities were obtained in enzyme assays using IPTG- induced cell crude extracts and were found to be 3.47 (for rAlr4468) and 2.53 (for rSll1647) times higher than controls, respectively. As a result, alr4468 and sll1647 genes of cyanobacteria, which have similar physiological properties to those of high-structured plants, might be used as potential sources for the generation of herbicide-resistant native transgenic plants in future studies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    82747

    Development of phosphinotricin resistant transgenic tobacco plants by detoxification and overexpression approaches

    Fosfonitrosine dirençli transgenik tütün bitkilerinin detoksifikasyon ve yüksek ekspresyon yollarıyla üretilmesi

    BAŞAK MELTEM SALDAMLI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM

  2. Tez No

    322971

    2,4-D (2,4-Diklorofenoksi) asetik asit ve türevleri ile Bisfenol-a (bis-a) ve Fosfinotrisin (PPT)'in su pireleri Daphnia magna (Straus, 1820) (Cladocera, Crustacea) üzerine akut toksik etkilerinin belirlenmesi

    2,4-D (2,4-Dichlorophenoxy) acetic acid and derivatives with Bisphenol-A (Bis-A) and Fhosphinotricin (PPT) the water flea Daphnia magna (Straus, 1820) (Cladocera, Crustacea) on the toxic effects of acute determination

    GÜLDANE ÇINAR PEKTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Çevre Bilimleri Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. FERİHA YILDIRIM

  3. Tez No

    434713

    Şeker pancarı (Beta vulgaris L.) bitkisinde agrobacterium aracılığıyla herbisitlere karşı dirençlilik gen aktarım çalışmaları

    Agrobacterium mediated geneti̇c transformation of sugar beet (Beta vulgaris L.) against herbicide resistance genes

    PARİSA POURALI KAHRIZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KHALID M.KHAWAR BHATTI

  4. Tez No

    93492

    Kolza (brassica napus L. ssp. oleifera) bitkisinde adventif sürgün rejenerasyonu ve agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı

    Adventitious shoot regeneration and agrobacterium tumefaciens metiated gene transfer in rapeseed (brassicanapus L. ssp. oleifera)

    SEMRA MİRİCİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2000

    BiyolojiGazi Üniversitesi

    Biyoloji Eğitimi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. SEBAHATTİN ÖZCAN

    PROF. ORHAN ARSLAN

Geri Dön