Geri Dön

Development of phosphinotricin resistant transgenic tobacco plants by detoxification and overexpression approaches

Fosfonitrosine dirençli transgenik tütün bitkilerinin detoksifikasyon ve yüksek ekspresyon yollarıyla üretilmesi

  1. Tez No: 82747
  2. Yazar: BAŞAK MELTEM SALDAMLI
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Transgenik tütün, fosfonitrosin, glutamin sentetaz, bar geni, Agrobacterium, yaprak diski transformasyonu. vu, Transgenic tobacco, phosphinotricin, glutamine synthetase, bar gene, Agrobacterium, leaf disk transformation. iv
  7. Yıl: 1999
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 102

Özet

oz FOSFONİTROSÎNE DÎRENÇLÎ TRANSGENÎK TÜTÜN BİTKİLERİNİN DETOKSMKAS YON VE YÜKSEK EKSPRESYON YOLLARIYLA ÜRETİLMESİ SALDAMLI, Başak Meltem Yüksek Lisans, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi: Assoc. Prof. Dr. Hüseyin Avni ÖKTEM Ortak Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Meral YÜCEL Eylül 1999, 102 sayfe Kültür bitkilerinde yabancı otların neden olduğu ürün kayıplarını azaltmak için, modern tarımda herbisitler yaygın olarak kullanılmaktadır Kültür bitkilerinden daha çok yabancı otlarda etkili, hayvanlara ve çevreye zararsız, yeni herbisitler araştırılmaktadır. Kullanılan herbisitlerin çoğu yabancı ot ve kültür bitkilerim ayırt edemezken, herbisitlere dirençli transgenik bitkilerin geliştirilmesi, herbisitlerin, kültür bitkilerinin korunmasında seçici kullanımına izin vermektedir. Herbisitlere dirençli trasgenik bitki eldesinde aktif molekülün detoksifikasyonu, hedef molekülünfazla üretimi ve hedef molekülün modifikasyonu dahil olmak üzere, temelde üç yol takip edilmektedir. Bu çalışma, detoksifikasyon ve âzla üretim yollarıyla ghıtamin sentetaz enziminin etkili inhibitörü olan fosfonitrosine (PPT) dirençli transgenik tütün geliştirmek ve herbisite kaşı sağladıkları direnç yönünden bu iki yolu değerlendirmek için yapılmıştır. Çalışmada, fosfonitrosini detoksifiye edebilen fosfinotrisin N-asetil transferaz'm (PAT) sentezinden sorumlu olan bar genini taşryan pPZPEmuPAT, ve soya sitosolik glutamin sentetaz genini taşıyan pLN16 ikili vektörleri kullanılmıştır. Saf durumda elde edilen bu vektörler, DMSO yöntemi ile hazırlanan kompetan E.coli DHa5 suşlanna, daha sonra da“triparental mating”yöntemi ile Agrobacterium tumefaciens EHA105 suşlanna aktarılmıştır. Tütüne gen trasferi,“yaprak diski transformasyonu”yöntemi ile, ikili vektörlerden birini taşryan Agrobacterium susunun kullanımıyla gerçekleştirilmiştir. pLN16 ile yapılan deneylerde, 50 mg/L kanamisin içeren ortamda kallus, gövde ve kök oluşumu elde edilmesine rağmen, bu bitkilerin ölümcül dozdaki fosfinotrisine karşı direnç gösteremedikleri görülmüştür. pPZPEmuPAT ile yapılan deneylerde, ölümcül dozun elli katı olan 10 mg/L fosfinotrisin içeren ortamda hayatta kalıp, gelişebilen transgenik tütün bitkileri geliştirilmiştir., Seçilen altı bağımsız öncül transgenik bitkinin genomlarına bar geninin bağlandığını ve bu bitkilerde kontrol bitkilerinde sentezlenmeyen PAT enziminin sentezlendiği PCR ve SDS-PAGE çalışmalarıyla doğrulanmıştır. Ayrıca, viFi neslindeki gen dağılımının Mendel'in kalıtım modelindeki tek baskın genin dağıhmyla aynı olduğu gözlenmiştir.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT DEVELOPMENT OF PHOSPHINOTRICIN RESISTANT TRANSGENIC TOBACCO PLANTS BY DETOXIFICATION AND OVEREXPRESSION APPROACHES S ALDAMLI, Başak Meltem M. Sc. Department of Biochemistry Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Hüseyin Avni ÖKTEM Co-supervisor: Prof. Dr. Meral YÜCEL September 1999, 102 pages Herbicides are now widely used in modern agriculture to reduce the loss in crop yield caused by weeds. Researchers try to find new herbicides that are effective on weeds and safe for animals and environment. While most of these herbicides do not distinguish between weeds and crops, engineering transgenic plants that are resistant to such broad spectrum herbicides allows their selective use for crop protection. Basically three approaches are followed for developing herbicide resistant transgenic plants including detoxification of active molecule, overexpression of target protein and alteration of target molecule. mThe present study was performed to develop Phosphinotricin (PPT) resistant transgenic tobacco by employing detoxification and overexpression approaches and asses the efficiencies of this two strategies in terms of herbicide resistance. PPT is the potent inhibitor of glutamine synthetase. Two binary vectors, pPZPEmuPAT, carrying bar gene encoding phosphotidyl-N-acetyl transferase (PAT) which detoxifies PPT, and pLN16, carrying soybean cytosolic GS gene, were used. The purified vectors were firstly mobilized to E.coli DHcc5 strain by DMSO method and then to the Agrobacterium tumefaciens EHA105 strain by triparental mating. Gene transfer to tobacco was performed by leaf disc method by using either of the Agrobacterium, harboring one of these binary vectors. In the experiment done with pLN16, callus, shoot and root formation were achieved in 50 mg/L kanamycin containing media however those plants could not tolerate lethal doses of PPT. In the experiments done with pPZPEmuPAT, primary transgenic tobacco plants were produced that can survive in 10 mg/L of PPT containing media which is fifty times the lethal dose. The PCR and SDS-PAGE studies of six independent primary transgenic plants confirmed the presence and the expression of bar gene in those plants. Also the resistance to phosphinotricin was found to be stable and inherited by the Fi progeny as a single dominant Mendelian trait.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    413240

    Development of air-breathing polymer electrolyte membrane (PEM) fuel cell for small uav application

    Küçük İHA uygulamaları için hava dolaşımlı polimer elektrolit zarlı yakıt hücre geliştirilmesi

    NOOR UL HASSAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Endüstri ve Endüstri Mühendisliğiİstanbul Şehir Üniversitesi

    Endüstri ve Sistemler Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BAHADIR TUNABOYLU

  2. Tez No

    413336

    Farklı Mg içerikli ikiz merdaneli sürekli döküm AA5754 alüminyum alaşımlarının şekillendirme kabiliyetinin geliştirilmesi

    Development of forming capability of twin roll continuous casting AA5754 aluminium alloys with different Mg content

    KORAY TURBALIOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Metalurji MühendisliğiKarabük Üniversitesi

    Metalurji ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. YAVUZ SUN

    YRD. DOÇ. DR. YUNUS TÜREN

  3. Tez No

    413461

    Patlatma kaynaklı sarsıntı ve gürültü analizi için bir bilgisayar programı geliştirilmesi

    Development of a computer program for analysis of vibration and noise caused by blasting

    ERDEM KAZAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Maden Mühendisliği ve MadencilikDumlupınar Üniversitesi

    Maden Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HAMDİ AKÇAKOCA

  4. Tez No

    413594

    Development of column filler material for solid phase extraction and investigation their removal ability upon heavy metal ions

    Grafen bazlı kolon dolgu malzemesi geliştirilmesi ve bu malzemenin ağır metal iyonlarının giderimi üzerine kullanılabilirliğinin araştırılması

    DOĞU RAMAZANOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Mühendislik BilimleriKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Malzeme Bilimi ve Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. MUHARREM KARABÖRK

  5. Tez No

    413599

    Osseintegrasyonu arttıracak hidroksiapatit/siklodekstrin kompozit taşıyıcıların geliştirilmesi

    Development of hydroxyapatite/cyclodextrin composite carriers to enhance osseointegration

    MERYEM SÜMEYYE AKDEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU

Geri Dön