Geri Dön

İnfluenza virüsü yüzey antijen proteinlerinin mikroorganizmalarda rekombinant olarak üretilmesi ve analizi

Production and analysis of influenza virus surface antigen proteins in microorganisms

  1. Tez No: 507873
  2. Yazar: ŞEYMA ÖZAYDIN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. KADİR TURAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 132

Özet

Amaç:İnfluenza A virüsleri insanlarda sık sık tekrarlayan grip salgınlarına sebep olan zarflı virüslerdir. Virüs membranında yer alan HA ve NA proteinleri enfeksiyonların seyrini belirler. Bu proteinler, influenza virüsüne karşı kullanılan rekombinant aşıların da temel bileşenidir. Bu tez çalışmasında, aşı olarak kullanım potansiyeline sahip influenza virüsü HA ve NA proteinlerinin rekombinant DNA teknolojileri ile bakteri ve maya hücrelerinde üretilmesi, bakteri ve maya hücrelerinin bu proteinleri üretebilme kapasitelerinin karşılaştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem:Çalışmada viral genlerin elde edilmesinde İnfluenza A/WSN/33 (H1N1) virüsleri kullanıldı. Konak olarak Escherichia coli ve Pichia pastoris hücrelerinden yararlanıldı. HA ve NA proteinlerini kodlayan genler İnfluenza A virüsleri ile enfekte HEK293 hücrelerden ters transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu ile elde edildi. cDNA'lar, standart DNA klonlama teknikleri ile ekspresyon vektörlerine klonlandı. Elde edilen plazmit vektörler E. coli veya P. pastoris hücrelerine transforme edildi. Hücreler liziz tamponunda ya da sonikasyon ile parçalandı ve hücre lizatları SDS-PAGE / Western melezleme teknikleri ile viral proteinler için analiz edildi. Bulgular ve Sonuç: Çalışmada İnfluenza A virüsü HA ve NA proteinlerini kodlayan altı adet bakteri ekpresyon vektörü; dört adet maya ekpresyon vektörleri elde edildi. Vektörlerde taşınan genlerin doğruluğu DNA dizi analizleri ile ortaya kondu. E. coli hücrelerinde sentez edilen HA ve NA proteinlerinin hücreler için toksik olduğu ve bakteri üremesini ileri düzeyde yavaşlattığı saptandı. E. coli hücrelerinin NA proteinin HA proteinine göre daha yüksek düzeylerde sentez edebildiği görüldü. P. pastoris maya hücrelerinin ise, çalışmada denenen koşullarda, viral genleri genomlarında taşımalarına karşın SDS-PAGE/Western melezleme teknikleri ile belirlenebilecek düzeyde viral protein sentez etmediği saptandı.

Özet (Çeviri)

Aim:Influenza A viruses are enveloped viruses that cause recurrent flu epidemics in humans. Viral membrane proteins, HA and NA determine the course of infections. These proteins are also a key component of recombinant vaccines used against influenza virus. In this study, it was aimed to product the Influenza virus HA and NA proteins by using DNA technology in bacterial and yeast cells and, to compare the viral protein production capacity of these cells.Material and Methods:Influenza A/WSN/33 (H1N1) viruses were used for isolation of viral genes. Escherichia coli and Pichia pastoris cells were used as hosts. The HA and NA genes were isolated by reverse transcription-polymerase chain reaction from influenza A virus-infected HEK293 cells. The cDNAs were cloned into the expression vectors by standard DNA cloning techniques. The resulting plasmids were transformed into E. coli and P. pastoris cells. The cells were lysed in lysis buffer or sonication, and the lysates were analyzed with SDS-PAGE / Western blotting techniques for viral proteins.Results and Discussion:In this study, six expression plasmids for bacteria and, four expression plasmids for yeast cells, encoding Influenza A virus HA and NA proteins, were constructed. The accuracy of the plasmids for viral genes were revealed with DNA sequencing. It was shown that the HA and NA proteins are very toxic for E. coli cells and, these proteins significantly reduce bacterial growth in culture. It was also found that E. coli cells produce NA protein at higher levels compering to HA protein. In Pichia pastoris, it was shown that the viral HA and NA genes were integrated in the yeast genome by using PCR. However, viral proteins could not be detected by SDS-PAGE / Western blotting techniques under the experimental conditions applied in the study.

Benzer Tezler

  1. İnfluenza A virüsü yüzey antijen proteini hemaglutininin mikroorganizmalarda çözünür halde üretilmesi

    İnfluenza A virüsü yüzey antijen proteini hemaglutininin mikroorganizmalarda çözünür halde üretilmesi

    AYŞE ARZU GÜL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaMarmara Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KADİR TURAN

  2. Immunoreceptors modulate eosinophilic functions in viral immunity

    Eozinofillerde viral bağışıklık yanıtının oluşumunda hücre zarına bağlı ve hücre içi reseptörlerin rollerinin araştırılması

    LÜBEYNE DURMUŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CEREN ÇIRACI

  3. Viral yapıların tayininde kullanılmak üzere elektrokimyasal temelli biyosensör platformlarının geliştirilmesi

    Development of electrochemical based biosensor platforms to be used in the determination of viral structures

    RÜMEYSA EKİCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyomühendislikBaşkent Üniversitesi

    Biyomedikal Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİR BAKİ DENKBAŞ

  4. İnfluenza virüs antijeni içeren çoklu (S/Y/S) emülsiyon formülasyonlarının geliştirilmesi, in vitro ve in vivo değerlendirilmesi

    Development of multiple (W/O/W) emulsions containing influenza virus antigens, in vitro and in vivo evaluation

    GÖKHAN HAYTA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Eczacılık ve FarmakolojiAnkara Üniversitesi

    Farmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. ASUMAN BOZKIR

  5. Astım ve KOAH' lı hastaların akut ataklarında viral solunum yolu infeksiyon etkenlerinin chip tekniğiyle araştırılması

    Identifying the viral respiratory tract pathogens in an acute attacks of the patients with asthma and COPD by chip technology

    ASLI TEKER

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    MikrobiyolojiCelal Bayar Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. SİNEM AKÇALI