Geri Dön

Development of gene editing strategies for human β-globin (HBB) gene mutations

İnsan β-globin (HBB) gen mutasyonları için gen düzenleme stratejilerinin geliştirilmesi

  1. Tez No: 522360
  2. Yazar: BATUHAN MERT KALKAN
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Genetik, Bioengineering, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 115

Özet

Gen düzenleme teknolojisindeki son ilerlemeler, programlanabilir endonükleazlar kullanılarak DNA dizisinde istenilen değişikliklerin yapılabilmesini olası kılmıştır. Bu yeni gen düzenleme araçları, β-globin genindeki (HBB) nokta mutasyonların neden olduğu kalıtsal bir monogenik bozukluk olan orak hücre hastalığı (SCD) gibi genetik bozuklukların tedavisinde, klinik uygulamalar için umut verici adaylardır. SCD için destekleyici tedavi yöntemleri geliştirilmiş olsa da hala uzun süreli evrensel tedavi eksikliği söz konusudur. Tip II CRISPR-Cas9 sistemleri, tek bir endonükleaz, Cas9, ile diziye özgü DNA çift iplikli kopmaya (DSB) katılan tek kılavuz RNA (sgRNA) olarak adlandırılan kısa bir RNA molekülü ile hareket eder. Bu çalışmada, HEK293T hücre dizisinde, Homoloji ile Yönlendirilmiş Onarım (HDR) ile etkili genom düzenleme ve SCD'ye neden olan nokta mutasyonlarının düzeltilmesi için nükleotid değişikliklerinin tanıtılması amacıyla HBB geninin CRISPR / Cas9 genom düzenleme aracı ile hedeflenmesi amaçlanmıştır. Çalışma sonucunda SCD'ye neden olan mutasyonun lokusunda HBB geninde hedef spesifik nükleotid değişikliklerini indüklenebildi. Uzun sgRNA'nın hedef aktivitesi üzerindeki etkisi incelendi ve uzun sgRNA'nın hedefleme ve Cas9 ile indüklenen DSB'ler için aynı performansa sahip olduğu gözlendi. HDR mekanizması, donör DNA onarım şablonlarının plazmid formunda birlikte verilmesiyle tetiklendi. Sonuç olarak, etkili hedefleme ve HBB geninde istenen modifikasyonlar için metodolojik bir yol haritası önerildi

Özet (Çeviri)

Recent developments in gene editing technology have enabled scientists to modify DNA sequence by using engineered endonucleases. These gene editing tools are promising candidates for clinical applications, especially for treatment of inherited disorders like sickle cell disease (SCD). SCD is caused by a point mutation in human β-globin gene (HBB). Clinical strategies have demonstrated substantial success, however there is not any permanent cure for SCD available in clinics. CRISPR/Cas9 platform uses a single endonuclease and a single guide RNA (sgRNA) to induce sequence-specific DNA double strand break (DSB). In this study, it was aimed to target HBB gene via CRISPR/Cas9 genome editing tool to introduce nucleotide alterations for efficient genome editing and correction of point mutations causing SCD in HEK293T cell line, by Homology Directed Repair (HDR). We have achieved to induce target specific nucleotide changes on HBB gene in the locus of mutation causing SCD. The effect on on-target activity of longer sgRNA was examined and observed that longer sgRNA has the same performance for targeting and Cas9 induced DSBs. HDR mechanism was triggered by co-delivery of donor DNA repair templates in circular plasmid form. In conclusion, we have suggested methodological pipeline for efficient targeting and creating desired modifications on HBB gene

Benzer Tezler

  1. Suppression of NFIb expression by gene targeting strategies

    NFIb ifadesinin gen hedefleme stratejileriyle baskılanması

    İBRAHİM OGUZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Genetikİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ASLI KUMBASAR

  2. Development of therapeutic strategies against Crimean-Congo hemorrhagic fever (CCHF)

    Kırım-Kongo kanamalı ateşine (KKKA) karşı tedavi stratejilerinin geliştirilmesi

    ECE AVCI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    Biyoteknolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Malzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ URARTU ÖZGÜR ŞAFAK ŞEKER

  3. Regulatory role of aplnr signaling in migration and differentiation of mesoderm tissue and mesenchymal stem cells

    Aplnr sinyalinin mesoderm doku ve mezenkimal kök hücre farklılaşmasındaki ve migrasyonundaki düzenleyici rolü

    HATİCE BURCU ŞİŞLİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyomühendislikYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞEGÜL DOĞAN

  4. In vitro correction of hbb v6g mutation in lymphocyte cells of patients with sickle cell anemia using genome-editing crispr / cas9 technique

    Orak hücre anemisi hastalarının lenfosit hücrelerinde HBB V6G mutasyonunun in vitro olarak genom düzenleme crıspr / cas9 tekniği kullanılarak düzeltilmesi

    HASANAIN AKRAM ZAINALBDEN ZAINALBDEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    GenetikSelçuk Üniversitesi

    Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ NADİR KOÇAK