Geri Dön

Isolation, cloning, characterization and heterologous expression in Escherichia coli of Chlamydomonas reinhardtii pyruvate orthophosphate(Pi) Dikinase (PPDK) 1 gene

Chlamydomonas reinhardtii purivat ortofosfat(pi) Dikinase(PPDK) 1 geninin Escherichia coli'de klonlanması, karakterizasyonu ve heterolog ekspresyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 528606
  2. Yazar: TAHA TANGUT
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 40

Özet

Fosil yakıt kaynaklarının sınırlı olduğu göz önüne alındığında, araştırmacılar alternatifler aramışlardır. Algler en umut verici alternatiftir ve geleneksel biyoyakıt potansiyeli olan bitkilerin üzerinde belirgin avantajlar sunar. Bununla birlikte, ökaryotik, tek hücreli, fotosentetik mikroalerde lipid metabolizması ile ilgili çalışmalar sınırlıdır. Chlamydomonas reinhardtii, on yıldan uzun süredir bir dizi fizyolojik, biyokimyasal ve genetik çalışma için model organizma olarak kullanılan ökaryotik mikroalglerin en iyi bir temsilcilerinden birisidir. Bununla birlikte, şaşırtıcı bir şekilde C4-metabolizması ve düzenleyici faktörlerin enzimleri, moleküler düzeyde C. reinhardtii'de incelenmemiştir, ki bu son çabalar dışında, fosfoenolpiruvat karboksilaz (PEPC) genlerinin (PPC 1 ve Ppc2) moleküler karakterizasyonu üzerine odaklanmıştır. C. reinhardii (Mamedov ve arkadaşları, 2005; Moellering ve diğ., 2007; Mamedov ve Chollet, 2010). Bu nedenle, fotosentetik model organizma C. reinhardtii'de C4-metabolizmasının enzimlerinin incelenmesi, alglerdeki biyokütle birikimi ve biyoyakıt için çok önemlidir. Piruvat, fosfat dikinaz (PPDK, EC 2.7.9.1), C4 bitkilerinde ve bazı POM bitkilerinde fotosentetik CO2 fiksasyonunun yolunda önemli bir enzimdir ve ATP ve Pi'ye bağlı fosfoenolpiruvat (PEP) oluşumunu katalize eder piruvattan alıcı molekül. Bu çalışmada, ilk kez, Chlamydomonas reinhardtii'nin cDNA'sından PPDK (CrPPDk) genini başarılı bir şekilde izole ettik ve klonladık. Sonuçlarımız, CrPPDK geninin in vivo olarak kopyalandığını ve E.coli'de tamamen aktif, rekombinant bir PEPC'yi kodladığını doğrulamıştır. Gen ekspresyonu analizleri, CrPPDK geninin CO2 veya NH4 + duyarlı gen olduğunu ve kararlı durum transkript seviyelerinin, büyüme ortamına sağlanan değişen CO2 veya NH4 + seviyeleri tarafından yukarı / aşağı düzenlendiğini göstermektedir.

Özet (Çeviri)

Given that fossil fuel resources are limited, the researchers look for alternatives. Algae is the most promising alternative and offers distinct advantages over traditional oil crops. However, studies on lipid metabolism in eukaryotic, single-celled, photosynthetic microalgae are limited. Chlamydomonas reinhardtii is a well-studied representative of eukaryotic microalgae that has been used as a model organism for a number of physiological, biochemical and genetic studies for more than a decade. However, surprisingly enzymes of C4-metabolism and regulatory factors have not been studied in C. reinhardtii at the molecular level, except the recent effort, which was focused on the molecular characterization of phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) genes(Ppc 1 and Ppc2) in C. reinhardii (Mamedov et al., 2005; Moellering et al., 2007; Mamedov and Chollet, 2010). Thus, study of enzymes of C4-metabolism in the photosynthetic model organism C. reinhardtii would be very important for algal biomass accumulation, hence for biofuel. Pyruvate, phosphate dikinase (PPDK, EC 2.7.9.1) is important enzyme in the pathway of photosynthetic CO2 fixation in C4 plants and in some CAM plants, which catalyzes the ATP- and Pi-dependent formation of phosphoenolpyruvate (PEP), the primary CO2 acceptor molecule, from pyruvate. In this study, for the first time, we successfully isolated and cloned PPDK (CrPPDk) gene from cDNA of Chlamydomonas reinhardtii. Our results confirmed that CrPPDK gene transcribed in vivo and encodes a fully active, recombinant PEPC in E.coli. Gene expression analyses demonstrate that CrPPDK gene is CO2 or NH4 + responsive gene and its steady-state transcript levels are up-/down-regulated by varying levels of CO2 or NH4 + supplied to the growth medium.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    315382

    Cloning of The Laccase cDNAs from Pycnoporus sanguineus MUCL 38531, Expression in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Laccases

    Pycnoporus sanguineus?tan Lakkaz cDNA?larının Klonlanması, Pichia pastoris?te Ekspresyonu ve Rekombinant Lakkazların Karakterizasyonu

    GÜNSELİ KURT GÜR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYTEN YAZGAN KARATAŞ

  2. Tez No

    485252

    Cloning, heterologous expression and purification of PHI 29 DNA polymerase variants

    PHI 29 DNA polimeraz türevlerinin klonlanması, heterolog ekspresyonu ve saflaştırılması

    FATMA ARAS

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Biyokimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURAN DEVECİ AKSOY

  3. Tez No

    150245

    Lipaz üreticisi yerel Bacillus soylarının izolasyonu, nitelendirilmesi ve gen kütüphanelerinin hazırlanması

    The isolation and identification of lipase producing local Bacillus strains and the preparation of their genomic library

    HÜSEYİN BALCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. FÜSUN GÜMÜŞEL

  4. Tez No

    485001

    Chlamydomonas reinhardtii fosfoenolpirüvat karboksikinaz 1 geninin A ve B kesim varyantlarının izolasyonu, karakterizasyonu ve Escherichia coli'de heterolog ekspresyonu

    Isolation, characterisation and heterolog expression in Escherichia coli of A and B splicing variants of phosphoenolpyruvat carboxykinase 1 gene from Chlamydomonas reinhardtii

    NİCAT CEBRAİLOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  5. Tez No

    119478

    Cloning sequencing and expression of L-lactate dehydrogenase gene from Clostridium thermocellum and isolation, characterization and transformation of various cellulolytic, thermophilic, ethanol-producing bacteria

    Clostridium thermocellum'dan L-laktat dehidrogenaz geninin klonlanması ekspresyonu ve çeşitli sellülolitik, termofilik, etanol üreten bakterilerin izolasyonu, karakterizasyonu ve transformasyonu

    MELEK ÖZKAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

    DOÇ. DR. ZÜMRÜT ÖGEL

Geri Dön