CUMULUS CELL IS A NEW CANDIDATE FOR CELL THERAPY
HÜCRE TEDEVİSİNE YENİ BİR ADAY OLARAK KÜMÜLÜS HÜCRESİ
- Tez No: 542484
- Danışmanlar: PROF. DR. BARBAROS NALBANTOĞLU, PROF. DR. FİKRETTİN ŞAHİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Genetik, Biyoloji, Biochemistry, Genetics, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Oosit ile yakın temasta olan memeli yumurtalık folikülündeki kümülüs hücreleri (CC'ler), oositi besleme, geliştirme ve reaktif oksijen türlerine karşı korumadaki rolü ile bilinmektedir. Amacımız, CC'lerin kanser hücre terapisinde bir rolü olup olmayacağını belirlemektir. CC'ler, in vitro fertilizasyondan önce, oosit hasadı sırasında oositlerden ayrıldılar. CC'ler oda sıcaklığında kısa süre içinde hiyalüronidaz enzimi kullanılarak parçalandı ve daha sonra% 10 FBS ve% 1 PSA içeren besiyeri içeren kolajen kaplı flasklara ekildi. Hücreler % 1 O2 ve % 5 CO2 içeren hipoksik ortamda 37 ° C'de üç veya dört gün boyunca inkübe edildi. Hücreler % 80 yoğunluğa ulaştığında, akış sitometrisi ve gen ekspresyon analizi ile CD44 yüzey işaretçisi açısından karakterizasyon için toplandılar. Şartlandırılmış ortam (kümülüs hücrelerinden salgılanan tüm sekonder metabolitleri içeren) toplanmış, ölmüş hücrelerden filtrelenerek arındırılmış ve pankreas kanseri hücre hattı olan BxPC-3'e uygulanmıştır. Pankreas kanseri hücreleri, art arda üç gün boyunca hipoksik (% 1 O2) ve normoksik (% 18 O2) ortamda kümülüs şartlandırılmış besiyeri ile inkübe edildi. Pankreas kanseri hücrelerindeki ölüm, çeşitli deneyler kullanılarak analiz edilmiştir. Normoksik ortamda kümülüs şartlandırılmış besiyeri ile inkübe edilmiş BxPC-3 hücreleri, yaklaşık % 17 toplam hücre ölümü ve % 15 oranında kaspaz aktivitesi gösterirken, çeşitli konsantrasyonlu şartlandırılmış besiyeri ile hipoksik şartlarda (% 100,% 80,% 60,% 50) toplam hücre ölümü sırasıyla % 25,% 24,% 20 ve % 17 ve kaspaz aktivitesi sırasıyla % 34,% 30 ve % 22 olarak bulumuştur. QRT-PCR, normoksik ortamda inkübasyondan sonra Bax, Bak ve TNF genlerinde anlamlı olmayan değişiklikler, Casp3 ve Tp53 genlerinde hafif artmış regülasyon ile BCL2 geninde azalmış regülasyon ortaya koymuştur. Değişen konsantrasyonlarda (% 100,% 80 ve% 60) CC şartlı besiyerleriyle, hipoksik ortamdaki inkübasyon Bax ve BCL2 genlerinin azalmış regülasyonuna, Bak ve TNF genlerinde artmış regülasyonuna, casp3 ve Tp53 genlerinde ise anlamlı olmayan bir değişikliğe neden olmuştur. Dahası, CC'lerin şartlandırılmış besiyerinin farklı konsantrasyonları ile inkübasyon sırasında reaktif oksijen türleri sergileyen BxPC-3 hücrelerinin yüzdesinde bir artış görülmüştür. Ayrıca, pankreas kanseri hücreleri farklı konsantrasyonlardaki CC besiyeri ile inkübasyonu sonucu S fazında ile tutulmuştur. Bu çalışmanın sonuçları, CC şartlı besiyerinin, hücre tümör hücrelerinin çoğalmasını baskılamada, apoptozu aktifleştirmede ve tümör hücrelerini hücre döngüsünün S fazında durdurmada rol oynadığını göstermiştir. Bu çalışma, CC'lerin şartlandırılmış besiyerinin düşük bir gemsitabin dozu ile kombinasyonunun pankreas kanseri hücreleri üzerinde sinerjik bir ölümcül etkiye yol açtığını kanıtlamıştır. Bu değerli sonuçların ve bu çalışmadan elde edilen veriler ışığında, yeni bir alan olan bu benzersiz hücreler, CC'ler, üzerinde daha fazla araştırma gerçekleştirilebilir.
Özet (Çeviri)
The cumulus cells (CCs) in a mammalian ovarian follicle in intimate contact with oocyte is known by its role in oocyte feeding, development and protection against reactive oxygen species. Our aim is to determine whether CCs might have a role as a cell therapy for cancer. CCs were separated from oocyte during oocyte harvesting, before the in vitro fertilization. CCs were digested usıng hyaluronidase enzyme shortly at room temperature and then were seeded onto a collagen-coated flask with medium containing 10% FBS and 1% PSA and incubated in hypoxic environment 1% O2, 5% CO2 at 37°C for three to four days. As the cells reached 80% confluency, they were collected for characterization for surface markers such as CD44 using flow cytometry and gene expression analysis. Conditioned media (containing all the secondary metabolites secreted from the cumulus cells) were collected and filtered for died cells and introduced into pancreatic cancer cell line, BxPC-3. Pancreas cancer cells were incubated with cumulus conditioned media in hypoxic (1% O2) and normoxic (18% O2) environment for three consecutive days. Cellular death in pancreatic cancer cells was analyzed using various assays. BxPC-3 cells incubated with cumulus conditioned medium in normoxic condition showed approximately 17% total cell death and about 15% caspase activity, while in hypoxic condtion with various concentration of conditioned medium (100%, 80%, 60%, 50%) showed total cell death approximately 25%, 24%, 20%, and 17%, respectively and caspase activity about 34%, 30%, and 22%, respectively. The qRT-PCR revealed downregulation in BCL2 gene with slight upregulation in casp3 and Tp53 genes, with non-significant changes in Bax, Bak and TNF genes upon incubation in a normoxic condition. While incubation with varying concentrations of CCs conditioned medium (100%, 80%, and 60%) in a hypoxic environment caused downregulation of Bax and BCL2 genes and upregulation in Bak and TNF genes, with a non-significant change in casp3 and Tp53. Furthermore, an increase in the percentage of BxPC-3 cells exhibiting reactive oxygen species upon incubation with different concentrations of the CCs conditioned medium. Besides, pancreatic cancer cells were arrested in the S phase uppon incubation with different concentration of CCs conditioned medium. The results of this study suggested that CCs have a role in suppressing tumor cell proliferation, activating apoptosis and arresting tumor cells in the S phase of the cell cycle. This study proved that the combination of CCs conditioned medium with a low dose of gemcitabine resulted in a synergistic detrimental effect. In light of these valuable outcomes and data from this study further research in a new field on unique cells, CCs can be carried out.
Benzer Tezler
- Oosit matürasyonu ile kumulus hücre yüzey belirteçleri ilişkisinin incelenmesi ve fertilizasyon başarısı ile karşılaştırılması
Investigation of relation between genetic structure, the surface biomarkers of granulosa cell and oocyte quality, fertilisation rate
ŞİRİN BAKTI DEMİRAY
- Farklı büyüklükteki sığır oositlerinin maturasyon ve fertilizasyonu üzerine insülin benzeri büyüme faktörü-1 (IGF-1) ve epidermal büyüme faktörünün (EGF) etkilerinin araştırılması
Investigation on the effects of insulin-like growth factor-1 (IGF-1) and epidermal growth factor (EGF) on maturation and fertilization of different sized bovine oocytes
DUYGU BURCU TOPUZOĞLU
Doktora
Türkçe
2011
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiVeterinerlik Doğum ve Jinekolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İ. HAKKI İZGÜR
- Normal, polikistik ovaryum sendromu, hiperstimüle ve hipostimüle ovaryum folikülü kümülüs hücrelerinde endoplazmik retikulum stres proteinlerinin regülasyonunun araştırılması
Investigation of the differential regulation of endoplasmic reticulum signal proteins in cumulus cells with normal, hyperstimulated, hypostimulated and polycystic ovary syndromes
BAHAR KÜÇÜKOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Histoloji ve EmbriyolojiGazi ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÜMİT ALİ KAYIŞLI
PROF. DR. M. TAHİR HATİPOĞLU
- Erişkin kedi ovaryumunda pluripotent kök hücre profili
The profile of the pluripotent stem cells in adult domestic cat
ERGÜL ERGEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
Histoloji ve EmbriyolojiErciyes ÜniversitesiVeterinerlik Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NARİN LİMAN