Purification and spectral and catalytic characterization of nadh-cytochrome b5 reductase from lung microsomes
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 5435
- Danışmanlar: PROF. DR. EMEL ARINÇ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1989
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
NADH-SİTOKHOM b- HEDÖKTAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI VE SPEKTRAI VE KATALİTİK KARAKTERİZASYONU Güray, Tülin Fen Bilişleri Enstitüsü Biyokimya Anabilin Dalı, Doktora Tezi Tez Yöneticisi Prof.Dr. Emel Arınç 87 Sayfa, Şubat 1989 ÖZET NADH-sitokron beredüktaz enzimi (B.C. 1,6.2.2) koyun akciğer mikrozomlarından, deterjanlar (kolat ve Emulgen 913) varlığında, birinci ve ikinci DEAE-cellulose ve 5'-ADP-agarose kolon kronatograf ileri ile mikrozomlara oranla % 6 verimle saflaşt İrildi. Saflaştırılan enzim, SDS-poliakrilamit jel elektroforezinde tek protein bandı verdi. Akciğer redüktaz enziminin moleküler ağırlığı 3^§500 + 1,500 olarak bulundu ve % O.k deoksikolat varlığındaki Sephadex G-200 kolon kromatografisl sonucu aktif subunlt moleküler ağırl iğinin 68,500 olduğu gözlendi. Tripsin uygulanan redüktaz enzimi SDS-poliakrilamit jel elektroforezin de 28,000 ve 25,000 ağırlığında İki ekstra protein bandı verdi. Saflaş- tınlraiş enzimin prostetik gurup olarak FAD içerdiği ve absorpslyon spektrumunda karakteristik FAD tepeciklerini içerdiği bulundu. Koyun akciğer redüktaz enziminin maksimi» aktivitesl için optimum koşullar incelendi. KB değerleri sltokrom b^ ve NADH için Q.l6? jaM ve 7.7>uM olarak bulundu. Ferrislyanit için K,, değeri 13.?juM, NADH için K^ değeri U.JjaM olarak saptandı. Saflaştırılmış koyun akciğer redüktaz enziminin NADH-sitokrom ç redüktaz aktivitesini, koyun akciğer sitok-rom be varliSlttda gösterdiği bulundu. Ayrica.cysteine amino asitinin enzimin aktivitesi için gerekli olduğu gSst erildi. Anahtar kelimeleri NADH-sitokrom b~redu1ctaz enziminin saflaştırılması, koyun akciğer NADH-sitokrom be redûktaz enzimi, sitokrom b- elektron tasiyicl sistemi, akciğer sitokrom be redfiktas ene iminin karakterizasyonu. vi
Özet (Çeviri)
PURIFICATION AND SPECTRAL AND CATALYTIC CHARACTERIZATION OF NADH-CYTOCHROME b, REDUCTASE Güray, Tülin Institute of Natural and Applied Sciences Joint Graduate Program in Biochemistry, Ph.D. Thesis Supervisor! Prof.Dr. Emel Arınç 87 Pages, February 1989 ABSTRACT NADH- cytochrome b~ reductase (E.C. 1.6.2.2) was purified from sheep lung microsomes by column chromatography on first and second DEAE-cellulose and 5'-ADP-agarose, in the presence of detergents, cholate and Emulgen 91 3. The specific activity was 638 yuaoles ferri- cyanide reduced/min/mg protein and the yield was 6 % of the initial activity in microsomes. The SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of the purified lung reductase showed one protein band, having the apparent monomer molecular weight of 3^*500 + 1,500 and the active subunit molecular weight was found to be 68,500 by Sephadex G-200 column chromatography in the presence of 0.4 % deoxycholate. Trypsin treated reductase showed two extra protein bands of molecular weights of 28,000 and 25,000 on SDS-polyacrylamide gels. The purified enzyme was found to contain FAD as prosthetic group and characteristic FAD peaks were obtained in absorption spectrum. The optimum conditions for NADH-cytoehrome be and NADH-ferricyanide reductions were examined. The KB values obtained for sheep lung reductase in 0.1M phosphate buffer, pH 7.5. at 25°C were KANASI!)-*. 3 /«. KB(ferrlcyanide)-13.7/iM| and for cytochrome b^ reduction KM values of 7.7juK (NADH) and 1^ (Cyt.be)" ili0.167 juM were obtained in 0.1M phosphate buffer, pH 6,8, at 25 C. Kinetic analysis of the purified sheep lung reductase revealed that reduction was operated through a ping-pong mechanism. Lung reductase was found to be reconstitute JfADH-cytochrome c reductase activity via sheep lung cytochrome be* Also, cysteine was shown to be the essential anlnoacid for the full activity of the enzyme. Key words t purification of NADH-cytochrome be reductase, sheep lung NADH- cytochrome be reductase, cytochrome be electron trans- port system, lung cytochrome b- reductase characterization. lv
Benzer Tezler
- Yeni pirazinoporfirazinlerin sentezi ve özelliklerinin incelenmesi
Synthesis of new pyrazinoporphyrazines and investigation of their propertiies
RABİA ZEYNEP USLU KOBAK
- Cytochrome P4502B-type protein from feral leaping mullet (liza saliens) liver microsomes: Its isolation and biochemical and immunological characterization
Doğal kefal balığı (marvaki) karaciğerinden sitokrom P4502B-tipi protein: Saflaştırılması, biyokimyasal ve immunolojik karakterizasyonu
AZRA BOZCAARMUTLU
Doktora
İngilizce
2002
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
PROF.DR. EMEL ARINÇ
- Tampon sistemlerinde lipazların katalitik performans ve ikincil yapısına süperkritik akışkanların etkisi
The effect of supercrtical fluids on the catalytic performance and secondary structureof lipases in buffer systems
ZEYNEP AKÇAY
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyokimyaCumhuriyet ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UĞUR SALGIN
- Sitozin türevi içeren yeni tip ftalosiyaninlerin sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of new types of phthalocyanines containing cytosine deriveatives
ASLI YILDIRIM
- Bentonit taşıyıcılı HPA katalizörlerin hazırlanması, karakterizasyonu ve esterleşme tepkimelerine uygulanması
Preparation and characterization of the bentonite supported HPA catalysts and their application on the esterification reactions
YALÇIN TONBUL