Geri Dön

Cytochrome P4502B-type protein from feral leaping mullet (liza saliens) liver microsomes: Its isolation and biochemical and immunological characterization

Doğal kefal balığı (marvaki) karaciğerinden sitokrom P4502B-tipi protein: Saflaştırılması, biyokimyasal ve immunolojik karakterizasyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 119474
  2. Yazar: AZRA BOZCAARMUTLU
  3. Danışmanlar: PROF.DR. EMEL ARINÇ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Sitokrom P4502B-tipi protein, saflaştırma, karakterizasyon, kefal (Uza saliens), monooksijenazlar, proadifen, benzfetamin, kokain, eritromisin, etilmorfin, 7-pentoksirezorufin vı, Cytochrome P4502B-type protein, purification, characterization, leaping mullet (Liza saliens), monooxygenases, proadifen, benzphetamine, cocaine, erythromycin, ethylmorphine, 7-pentoxyresorufin IV
  7. Yıl: 2002
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 235

Özet

oz DOĞAL KEFAL BALIĞI (MARVAKİ) KARACİĞERİNDEN SİTOKROM P4502B-TİPİ PROTEİN: SAFLAŞTIRILMASI, BİYOKİMYASAL VE İMMÜNOLOJİK KARAKTERİZASYONU BOZCAARMUTLU, Azra Doktora, Biyokimya Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Emel ARINÇ Ekim 2002, 209 sayfa Sitokrom P450'ler endojen ve ekzojen maddelerin oksidatif metabolizmasında önemli bir rol oynayan ve çok sayıda biyokimyasal reaksiyonda katalizör görevi gören hemoprotein süper ailesini oluşturur. Farklı hayvan gruplarında bu çeşitli reaksiyonların miktarı ve fonksiyonu büyük oranda farklı P450 proteinlerinin katılımına, katalitik fonksiyonuna ve regülasyonüna bağlıdır. Sitokrom P4502B alt ailesi genelde deney hayvanlarında ksenobiyotiklerin detoksifikasyonu ile ilgilidir ve ayrıca hormonları, testosteron ve androstediyonlan ve önemli pharmakolojik kimyasalları metabolize eder. Bu önemli rolü birçok biyokimyacı, pharmakolog ve toksikolog tarafından fark edilmiş ve birçok farklı memelide çalışılmıştır. Benzer genler balıkda da çok sayıda bulunabilir.Bu çalışmada, sitokrom P4502B4 homologuna karşı üretilen antikor ile kuvetli reaksiyon veren ve birinci iyon değişim kolonundan elde edilen bazik sitokrom P450 elektroforetik homojenlikte iki iyon değişim kolon kromatografisi (birinci ve ikinci DEAE-selüloz) ve üç farklı bir birini takip eden adsorpsiyon (Hidroksilapatit) kolon kromatografisi ile saflaştınldı. Saflaştınlan sitokrom P450 spektral, elektroforetik, biyokatalitik ve immunokimyasal özelliklerine göre karakterize edildi. Saflaştırılan sitokrom P450 SDS-poliakrilamit jel elektroforezin de moleküler ağırlığı 49300 olan tek bant verdi. Saf sitokrom P450, mutlak spektrumu 417 nm'de, ditiyonit ile indirgenmiş CO-fark spectrumu 450 ran dalga boyunda maksimum absorbans verdi. Saflaştınlan sitokrom P450 sentetik lipit ve kefal balığı karaciğerinden saflaştırılan P450 redüktaz enzimi ile yeniden oluşturulan mikrozomal monooksijenaz sisteminde benzfetamin, kokain, eritromisin ve etilmorfin N-demetilasyonunda ve pentoksirezorufinin O- depentilasyonunda aktif olduğu bulundu. Fakat, diğer monooksijenaz izozimlerinin substratlanm (anilin, laurik asit, 7-etoksirezorufın, 7- metoksirezorufin ve 7-benziloksirezorufin gibi) metabolize etmedi. Benzfetamin N-demetilaz activitesi yeniden oluşturulmuş ortamda bir sitokrom P4502B inhibitörü olan proadifen ile inhibisyona uğradı. Bunlara ek olarak, saflaştırılan sitokrom P450, sitokrom P4502B4 homologuna karşı üretilen antikor ile reaksiyon verdi. Yukarıdaki çalışmalar gerçekleştirildikten sonra elde edilen sonuçlar kefal karaciğerinden saflaştırılan sitokrom P450'nin bir sitokrom P4502B-tipi protein olduğunu gösterdi. Bu çalışmada, ilk defa sitokrom P4502B alt ailesinin bir üyesi balıktan saflaştırıldı ve karakterize edildi.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT CYTOCHROME P4502B-TYPE PROTEIN FROM FERAL LEAPING MULLET {LIZA SALIENS) LIVER MICROSOMES: ITS ISOLATION AND BIOCHEMICAL AND IMMUNOLOGICAL CHARACTERIZATION BOZCAARMUTLU, Azra Ph. D., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Emel ARINÇ October 2002, 209 pages Cytochrome P450s constitute a superfamily of hemoproteins that play important roles in oxidative metabolism of endogenous and exogenous compounds, and serve as catalysts that are significant in numerous and diverse biological pathways. The extent to which these various pathways or functions occur in different animal groups depend on a large degree on the participation of different P450 proteins present, their catalytic function and their regulation. Cytochrome P4502B subfamily is generally associated with detoxifying metabolism of xenobiotics in experimental animal species and also metabolizes hormones, testosterone and androstedione and several important pharmaceutical agents. The important role of cytochrome P4502B subfamily has been recognized by many biochemists, pharmacologists and toxicologist and has been studied in many different mammalian species. There could be a large number of homologous genes in fish. inIn this study, basic cytochrome P450 that cross-reacted with antibody produced against cytochrome P4502B4 homologue, eluted from the first DEAE- cellulose column was purified to electrophoretic homogeneity by using first and second anion exchange chromatography, and three successive hydroxylapatite column chromatographies. Purified cytochrome P450 was characterized with respect to spectral, electrophoretic, immunochemical and biocatalytic properties. Purified cytochrome P450 gave a single band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis having monomer molecular weight of 49300 Da. Absolute absorption spectrum of the purified cytochrome P450 showed maximum at 417 ran and CO-difference spectrum of dithionite-reduced cytochrome P450 gave a peak at 450 nm. Purified cytochrome P450 was found to be active in the N- demethylation of benzphetamine, cocaine, erythromycin and ethylmorphine and O-depenthylation of pentoxyresorufin in the reconstituted systems containing purified cytochrome P450 reductase from leaping mullet and synthetic lipid. However, it was unable to catalyze the oxidation of the other monoxygenase substrates such as aniline, lauric acid, 7-ethoxyresorufin, 7-methoxyresorufin and 7-benzyloxyresorufin. Benzphetamine N-demethylase activity was inhibited with proadifen, a cytochrome P4502B inhibitor in reconstituted system. In addition, purified cytochrome P450 showed strong cross-reactivity with the antibody produced against sheep lung cytochrome P4502B4 homologue. The results obtained after accomplishing above studies, strongly suggested that cytochrome P450 purified from leaping mullet is a cytochrome P4502B-type protein. In this study, for the first time, a member of cytochrome P4502B subfamily was purified and characterized in fish species.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    118981

    Biochemical and immunological characterization of beef liver NADPH-cytochrome P450 reductase

    Sığır karaciğer NADPH-sitokrom P450 redüktaz enziminin biyokimyasal ve immünolojik karakterizasyonu

    HAYDAR ÇELİK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  2. Tez No

    425908

    Effect of antioxidant morin on xenobiotic metabolizing enzymes in the liver of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene and endosulfan treated healthy and streptozotocin-induced diabetic rats

    Antioksidan morinin 7,12-dimetilbenz[a]antrasen ve endosülfana maruz bırakılmış sağlıklı ve streptozotosin indüklenmiş diyabetik sıçanların karaciğerinde ksenobiyotik metabolize eden enzimler üzerine etkileri

    CANAN SAPMAZ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyokimyaAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AZRA BOZCAARMUTLU

  3. Tez No

    177453

    Enzyme-catalyzed reductive activation of anticancer drugs idarubicin and mitomycin C

    Antikanser ilaçlar idarubisin ve mitomisin C'nin enzim-katalizlenmiş redüktif aktivasyonu

    HAYDAR ÇELİK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  4. Tez No

    75835

    Field evaluation of cytochome P450 1A1 MRNA levels as a monitor for chemical

    Sitokrom P450 1A1 MRNA seviyesinin kimyasal kirliliğin monitoründe joker olarak kullanılması

    ERKAN SU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  5. Tez No

    536890

    Optimization of expression and isolation of a thermophilic p450 enzyme

    Bir termofilik p450 enziminin ekspresyonunun ve izolasyonunun optimizasyonu

    YAPRAK ASLANTAŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Biyomühendislikİzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ NUR BAŞAK SÜRMELİ

    DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI MOHAMED

Geri Dön