Sığır oositlerinin in vitro olgunlaştırılmasında kültür medyumuna serum ilavesinin ısı şok protein70 miktarına etkisinin belirlenmesi
Effect of serum supplementation to culture media in vitro maturation of bovine oocytes on the level of HSP70 synthesis
- Tez No: 547445
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET KURAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
Bu çalışma sığır oositlerinin in vitro olgunlaştırılma (IVM) 'sında kültür medyumuna serum ilavesinin ısı şok protein 70 seviyesi üzerine etkisinin belirlenmesi amacıyla yapılmıştır. Çalışmada sığır kumulus oosit kompleksleri (KOK), fetal calf serum (% 10) ilave edilmiş ya da ilave edilmemiş bikarbonat tamponlu medyum-199'da 38,5 °C sıcaklıkta ve % 5 CO2'de nemlendirilmiş ortamda 22 saat IVM'na bırakılmıştır. IVM sonunda KOK'ların olgunlaşmaları tam kumulus genişlemesine göre belirlenmiştir. Olgunlaşan KOK'ların kumulus hücreleri % 0,1 hyarulinidaz enzimi içeren HEPES tamponlu TCM-199'da 10 dakika vortekslenerek uzaklaştırıldıktan sonra % 9,6'lık fosfat tamponlu tuz çözeltisinde (PBS) yıkanıp protein izolasyonuna geçilmiştir. Protein örneklerinin konsantrasyonunu arttırmak için örnekler 24 saat -80 °C'de dondurulduktan sonra liyofilizatörde 0.140 hPA basınç altında lyofilize edilip –20 °C'de depolanmıştır. Oositlerin 70 kDA ağırlıktaki proteinlerin seviyesi SDS- PAGE yöntemi ile belirlenmiştir. IVM'de serumlu (%84,78) veya serumsuz (%83,85) medyumlarda kültüre alınan oositler arasında kumulus genişlemesi bakımından bir farklılık tespit edilmemiştir. Western blot sonucunda kültür medyumuna serum ilavesiyle olgunlaştırılan sığır oositlerinin ısı şok 70 proteini bant görüntüsü elde edilemediğinden dolayı kültür ortamına eklenen serumun farklı sığır oositlerinin ısı şok proteinin 70 üzerine olabilecek etkileri tespit edilememiştir.
Özet (Çeviri)
This study was conducted to determine the effect of serum addition to the culture medium on heat shock protein 70 production in in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. In the study, cattle cumulus oocyte complexes (COCs) were matured at bicarbonate buffered TCM-199 supplemented with and without 10% Fetal calf serum for 22 hours with a humidified 5% CO2 in air at 38.5 °C tempuratures. The maturation of COCs was determined according to the full cumulus expansion at the end of IVM. Cumulus cells of matured COCs were vortexed in HEPES buffered TCM-199 containing 0.1% hyarulinidase enzyme for 10 minutes and washed in 9.6% phosphate buffered saline (PBS) and protein isolation was started. To increase the concentration of the protein samples, the samples were frozen at -80 oC for 24 hours and lyophilized under lyophilizer at 0.140 hPA and stored at -20oC. The level of the proteins with a weight of 70 kD of oocytes was determined by SDS-PAGE. No difference was found between oocytes matured serum (%84,78) or serum-free (%83,85) cultured media in terms of fully cumulus cell expansion. As a result of the Western blot, heat shock 70 protein band images of bovine oocytes matured in serum or serum-free culture medium could not be determined.
Benzer Tezler
- Farklı sıcaklıklarda in vitro olgunlaştırılan sığır oositlerinde ısı şok proteini 70'in belirlenmesi
Determination of heat shock protein 70 in bovine oocytes matured different culture temperatures in vitro
LEYLA BENER
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyoteknolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET KURAN
- Sığır Oositlerinin İn vitro nükleer olgunlaşması üzerine arı sütünün etkisi
The effect of honeybee royal jelly on nuclear maturation of cattle Oocytes in vitro
EMRE ŞİRİN
- Sığır oositlerinin in vitro maturasyonuna follikül uyarıcı hormon ve insan menopozal gonadotropini'nin etkisi
The effect of follicle stimulating hormone and human menopausal gonadotrophin on in vitro maturation of bovine oocytes
HASAN CEYHUN MACUN
Doktora
Türkçe
2004
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MUSTAFA KAYMAZ
- Epidermal büyüme faktörünün sığır oositlerinin in vitro maturasyonu ve fertilizasyonuna etkisi
The influence of epidermal growth factor on in vitro maturation and fertilization of bovine oocytes
BÜLENT POLAT
Doktora
Türkçe
2005
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF.DR. RIFAT SALMANOĞLU
- Sığırlarda in vitro embriyo üretiminde olgunlaştırma sıcaklığı ve antioksidan kullanımı
Maturation temperature and the use of antioxidant in in vitro embryo production in cattle
UĞUR ŞEN