Wharton jölesi mezenkimal kök hücrelerinin endotel hücrelere farklılaşmasında antioksidan moleküllerin rolünün incelenmesi
Determination of the role of antioxidant molecules in differentiation processes of wharton's jelly mesenchymal stem cells into endothelial cells
- Tez No: 550813
- Danışmanlar: PROF. DR. PINAR AKAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biochemistry, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
Giriş ve amaç: Rejeneratif tıp alanında kök hücre terapisinin başarısı, stres ortamında kök hücrelerin hayatta kalma ve hasarlı dokuları yenileme yetenekleri ile ilişkilidir. Kök hücrelerin işlevsel olarak olgunlaşmış erişkin hücrelere farklılaşması sırasında hücre içinde farklı metabolik süreçlerin devreye girdiği bilinmektedir. Kök hücre farklılaşma sürecinde olası metabolik değişim sürecini tetikleyen en önemli faktörlerden birinin hücrelerin maruz kaldığı oksidatif stres olduğu ileri sürülmektedir. Ancak kök hücrelerin endotelyal hücrelere farklılaşması esnasındaki oksidatif metabolizma değişimleri henüz net olarak tanımlanmamıştır. Çalışmamız ile multipotent mezenkimal kök hücrelerin (MKH) endotelyal hücrelere farklılaşma sürecindeki reaktif oksijen tür (ROT) düzeylerinin ve antioksidatif enzim aktivite değişimlerinin belirlenmesi amaçlandı. Ayrıca oksidatif stres üzerinde etkili olabilecek uygulamaların hücre canlılığı ve farklılaşma sürecine etkilerinin belirlenmesinin yanı sıra, WJ-MKH' lerinin izolasyonu, endotelyal hücrelere farklılaşması ve karakterizasyonu için uygulanabilir etkin bir protokolün kendi laboratuvar koşullarımızda oturtulması da hedeflendi. Yöntemler: Göbek kordonu Wharton jölelesinden (WJ) enzimatik ve eksplant yöntemi ile MKH'ler elde edilerek, proliferasyon kapasitesileri karşılaştırıldı. İzolasyon sonrası MKH karekterizasyonu için CD44, CD90, CD105 yüzey antijenlerinin gen ve protein ekspresyon düzeyleri kantitatif PZR, immunohistokimya ve akış sitometrisi yöntemleri ile gösterildi. Elde edilen MKH'lerin endotelyal hücrelere farklılaştırılma sürecine antioksidan moleküllerin etkisinin incelenmesi için N-asetil sistein (NAC), askorbik asit (AAP) ve sodyum selenit (NaSe) uygulamasının etkileri değerlendirildi.Kök hücrelerin kendi kendini yenileme ve farklılaşması sürecinde hücresel MDA, total ROT miktarı ve antioksidan enzim aktivite düzeylerinin değişimi fotometrik ve florometrik olarak incelendi. Antioksidan enzimlerin gen ekspresyon düzeyleri kantitatif PZR ile değerlendirildi. Ayrıca H2O2 ile oluşturulan oksidatif stres modelinde kök hücrelerin ve progenitör endotelyal hücrelerin reaktif oksijen türleri yanı sıra CAT, SOD ve GPx enzimlerinin değişimleri de analiz edildi. Bulgular: WJ-MKH ve entotelyal hücre karakterizasyonu kapsamında yapılan deneylerde ileri pasaj sayısının (>4-5) MKH karakterizasyonunda azalmaya yol açtığı saptandı. WJ-MKH'lerinde NAC (2mM) hücre canlılığı artırdığı gözlendi (p
Özet (Çeviri)
Introduction and aim: The success of stem cell therapy in regenerative medicine is related to the ability of stem cells to survive and to restore damaged tissues in a stressful environment. When differentiating stem cells into functionally mature adult cells, different metabolic processes are involved in the cell. It is suggested that one of the most important factors triggering the process of possible metabolic change in the process of stem cell differentiation is the oxidative stress to which the cells are exposed. However, oxidative metabolism changes during the differentiation of stem cells to endothelial cells have not been clearly defined. In our study, it was aimed to determine the reactive oxygen species (ROS) levels and antioxidative enzyme activity changes in the differentiation process of multipotent mesenchymal stem cells (MSCs) to endothelial cells. Also to determine the effects of the applications that may be effective on oxidative stress on cell viability and differentiation process of WJ-MSCs into endothelial cells were aimed. Methods: MSCs were obtained from Wharton's jelly of the umbilical cord by enzymatic and explant method and their proliferation capacity was compared. The gene and protein expression levels of CD44, CD90, CD105 surface antigens were determined by quantitative PCR, immunohistochemistry and flow cytometry methods. 2 mM N-acetyl cysteine (NAC), 300 uM ascorbic acid (AAP) and 40 nM sodium selenite (NaSe) were applied to investigate the effect of antioxidant molecules on the differentiation of MSCs to endothelial cells. In addition, 200 μM H2O2 was applied to determine the oxidative stress that is thought to affect the differentiation process. Fluorometric measurement was performed by using carboxymethyl dichlorofolorosein diacetate (CM-H2DCFDA) probe to determine ROT level against oxidative stress in WJ-MSCs. MDA analysis was also performed by HPLC method to determine cellular oxidative stress damage. The change in catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GPx) enzyme activities in the differentiation process were evaluated by using colorimetric enzyme activity measurement kits. Antioxidant molecules and changes in gene expression of CAT, SOD and GPx enzymes against H2O2 were analyzed by quantitative PCR. Results: In the experiments conducted under WJ-MSC and entothelial cell characterization, the number of advanced passages (> 4-5) was found to lead to a decrease in MSC characterization. It was observed that the treatment with NAC(2mM) increased the cell viability in WJ-MSCs (p
Benzer Tezler
- Diyabetin vasküler komplikasyonlarının, insan göbek kordon dokusu ve wharton jölesi mezenkimal kök hücre sayılarına etkileri
The effect of vascular complications of diabetes mellitus on human umbilical cord tissue and the number of wharton jelly's mesenchymal stem cells
ÇİĞDEM KARACA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
Histoloji ve EmbriyolojiGaziantep ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NURAY BOSTANCIERİ
- CRISPR-CAS9 gen düzenleme ile genetiği değiştirilmiş mezenkimal kök hücrelerinin üretimi ve karakterizasyonu
Generation and characterization of genetically modified mesenchymal stem cells by CRISPR-CAS9 gene editing
ESRA SEVDE EKİCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Moleküler Tıpİstinye ÜniversitesiKök Hücre ve Doku Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGÜR TATAROĞLU
- Mezenkimal kök hücrelerin canlılığı ve stres koşulları altındaki proliferasyonunda kalsiyum/kalmodulin-bağımlı protein kinaz 2 (CAMKII) enzim değişiminin belirlenmesi
Determination of calcium-calmodulin dependent protein kinase 2 (CAMkII) enzyme in mesenchymal stem cell viability and proliferation under the stress conditions
TUĞBA ŞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyokimyaDokuz Eylül ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR AKAN
- Nöroglial farklılaşma sürecinde AKT-AMP kinaz ve MTOR aracılı asetil KOA ve ilişkili metabolit değişimlerinin belirlenmesi
Determination of AKT-AMP kinase and MTOR-mediated acetyl coa and acetyl COA related metabolite changes in neuroglial differentiation processes
RAMAZAN UĞUR BORA
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaDokuz Eylül ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR AKAN
- Mezenkimal kök hücrelerin meme kanserine etkilerinin in vitro araştırılması
In vitro investigation of the effects of mesenchimal stem cells on breast cancer
İLKAY GÜZEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyokimyaSelçuk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BAHADIR ÖZTÜRK