HEK293 hücre hattında aşırı ifade ettirilen FOXO3 geninin etkilerinin incelenmesi
Examination of the effects of overexpressed FOXO3 gene in hek293 cell line
- Tez No: 559316
- Danışmanlar: PROF. DR. HAKKI OGÜN SERCAN, PROF. DR. GÜL HÜRAY İŞLEKEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Moleküler Tıp, Tıbbi Biyoloji, Genetics, Molecular Medicine, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 73
Özet
Amaç: FOXO proteinleri hücre homeostazı, oksidatif stres yanıtı ve apoptoz gibi fonksiyonların regülasyonunda görev yapan önemli transkripsiyon faktörleridir. Ayrıca FOXO proteinleri tümör baskılayıcılar olarak tanımlanmalarına rağmen, FOXO genlerinin yaptığı translokasyonların kanser oluşumunu desteklediği de gösterilmiştir. FOXO3 geninin MLL geni ile yaptığı translokasyon, ikincil akut lösemi ile ilişkilendirilmiştir. FOXO proteinlerinin kanser oluşumunda rol alması ve belirli hücre tiplerinde FOXO3'ün apoptoz sürecini başlatması nedeniyle bu genin HEK293 hücre hattında yapay olarak aşırı ifade ettirildiğinde, apoptoz mekanizması üzerine etkisi incelenecektir. Yöntem: Çalışmada FOXO3 geni mRNA kodlayıcı dizileri, yüksek gen ifadesi sağlayan aktif promotör barındıran pcDNA3.1 ekspresyon vektörüne PCR klonlama stratejileri kullanılarak takılmıştır. Elde edilen FOXO3/pcDNA3.1 vektörü ile HEK293 hücreleri geçici transfekte edilmiştir. Transfekte hücrelerden protein izolasyonu yapılarak western blot yöntemiyle FOXO3, beta-aktin ve PARP proteinlerine bakılmıştır. Bulgular: HEK293 hücre hattı ile gerçekleştirilen geçici transfeksiyon sonrasında, oluşturduğumuz pcDNA3.1/FOXO3 vektörü barındıran hücre hattının, kontrol hücre hattına göre 1.5 katlık bir FOXO3 ifade artışı gösterdiğini saptadık. Aynı transfeksiyon sonrasında hücre kültürüne herhangi bir apoptotik uyarı vermeden, kendiliğinden bir apoptotik uyarısı oluşturup oluşturmadığını test ettiğimizde ise FOXO3 ile transfekte hücrelerde apoptotik uyarının kontrol hücre hattına göre gerçekleştiğini PARP analizi ile saptadık. Sonuç: Gerçekleştirdiğimiz deneyler sonrasında FOXO3 geninin vektör yardımı ile aşırı ifade ettirilmesinin hücrede apoptozu uyardığını gösterdik.
Özet (Çeviri)
Objective: FOXO proteins are important transcription factors involved in the regulation of functions such as cell homeostasis, oxidative stress response and apoptosis. Also, FOXO proteins have been identified as tumor suppressors and translocations of FOXO genes have been linked to carcinogenesis. The translocation of FOXO3 gene with MLL gene has been associated with secondary acute leukemia. FOXO proteins are involved in carcinogenesis and FOXO3 initiates apoptosis in certain cell types. Hence apoptosis process will be examined by overexpression of FOXO3 gene in HEK293 cell line. Method: In this study, FOXO3 gene were inserted into the expression vector pcDNA3.1 with using PCR cloning strategies. mRNA coding sequences of pcDNA3.1 vector contains active promoter providing high gene expression. HEK293 cells were transiently transfected with the FOXO3 / pcDNA3.1 vector. The protein isolates obtained from the transfected cells therefore analyzed for FOXO3, beta-actin and PARP proteins by western blotting. Results: Hek293 cell line transfected with pcDNA3.1 / FOXO3 vector. We showed 1.5-fold increase in FOXO3 expression in transfected cells against to the control cells. When we exaimed spontaneous apoptosis without giving any apoptotic stimulation to the cell culture after the same transfection, we found apoptotic stimulation occurs in FOXO3 transfected cells by PARP analysis. Conclusion: Our experiments showed that overexpression of FOXO3 gene induces apoptosis in the cell.
Benzer Tezler
- The cytotoxic, apoptotic, genotoxic and oxidative effects of carbonic anhydrase 9 inhibitor on colorectal cancer cells
Karbonik anhidraz 9 inhibitörünün kolorektal kanser hücreleri üzerindeki sitotoksik, apoptotik, genotoksik ve oksidatif etkileri
BEWAR ALI AHMED AHMED
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Moleküler TıpYüzüncü Yıl ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YASİN TÜLÜCE
YRD. DOÇ. DR. İSMAİL KOYUNCU
- Pan-aurora kinaz inhibitörü danusertib'in pankreatik karsinoma hücrelerinde kromozomal geçiş kompleks genlerinin mrna ifade düzeylerine etkilerinin araştırılması
The investigation of the effects of pan-aurora kinase inhibitor danuserti̇b on the mrna expression levels of chromosomatransition complex genes in pancreatic carcinoma cells
CENGİZ ÇOLAK
- Coiled-coil domain containing protein 124 (Ccdc 124) artışının hücre fizyolojisine ve bölünmesine etkileri
Effects of coiled-coil domain contaning protein 124 (Ccdc 124) overexpression on cellular physiology and cell division
ÖZGE ARSLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
- Investigation of the interaction between NFI and its potential interaction partner BRG1
NFI proteininin potansiyel etkileşim partneri olan BRG1 ile etkileşiminin araştırılması
SELİM TÜRKEL
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ASLI KUMBASAR
- Böbrek hücre hattında parasetamol ile reseptör tip protein tirozin fosfataz o (PTPRO) gen ekspresyonu arasındaki ilişkinin araştırılması
Investigation of the relationship between paracetamol and receptor-type protein tyrosin phosphatase o (PTPRO) gene expression in the renal cell line
AYŞE NUR COŞKUN DEMİRKALP
Doktora
Türkçe
2021
Tıbbi BiyolojiErciyes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAMİYET ALTUNTAŞ