Kırım kongo kanamalı ateşi virüsü kelkit suşunun yapısal olmayan proteinleri ve humoral immunitedeki rolleri
Non-structural proteins of crimean congo hemorrhagic fever virus kelkit strain and their roles in humoral immunity
- Tez No: 561158
- Danışmanlar: DOÇ. DR. AYŞE SEHER BİRTEKSÖZ TAN, PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Mikrobiyoloji, Biotechnology, Genetics, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmasötik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 131
Özet
Kırım Kongo Kanamalı Ateşi Virüsü (KKKAV) yaygın görülen bir arbovirüs olup mortalite oranı yaklaşık %5-30 arasında değişen ciddi kanamalı ateşli hastalık etkenidir. Biyogüvenlik seviyesi 4 (BSL 4) ajanı olarak sınıflandırılmış olan bu virüse karşı henüz kabul edilmiş bir tedavi yöntemi veya aşı bulunmamaktadır. BSL 4 çalışma koşulları gerektirmesi araştırmacıları bu patojen ile ilgili olabildiğince fazla bilgi elde edebilmek için alternatif metodlara yöneltmiştir ve rekombinant protein teknolojisi bu metodlardandır. Rekombinant olarak elde edilen proteinler bu gibi virüslerin yaşam döngüsündeki farklı basamakları incelemek için güçlü bir araç sunmaktadır. Diğer proteinlerinin yanı sıra viral yapısal olmayan proteinler vektör/konak immün sistem ile olan interaksiyonları ve viral patogenezdeki rolleri nedeniyle öne çıkmaktadır. Viral yapısal olmayan proteinlerin viral birleşmedeki rolleri, muhtemel adaptör ve bağlayıcı protein benzeri rolleri, apoptotik/antiapoptotik aktiviteleri, interferon temelli reaksiyonların inhibisyonunda ve virüs attenüasyonundaki rolleri artropod kaynaklı bunyavirüsler dahil bir çok cinste gösterilmiştir. Viral yaşam döngüsündeki muhtemel rollerinin yanı sıra bu proteinlerin tanı, tedavi ve aşı geliştirmede işlevsel olabilecekleri gösterilmiştir. KKKAV'nin M (NSm) ve S (NSs) segmentlerinde bir veya muhtemelen iki yapısal olmayan proteini bulunmaktadır. Bu çalışmada KKKAV Kelkit06 suşunun yapısal olmayan proteinlerinin bakteriyel ekspresyonu amaçlanmıştır. Bu amaçla NSm (369 baz çifti), NSs (477 baz çifti)'in optimize sekansları pETSUMO, pET28b ve pET30b vektörlerine klonlanmış ve Escherichia coli BL21 (DE3) suşu N veya C-terminalinde His-tag barındıran proteinlerin ekspresyonunda konak olarak kullanılmıştır. Elde edilen rekombinant proteinler Western Blotlama ve enzim immün assay (EİA) ile KKKAV antikor pozitif ve negatif hasta serumlarında spesifik antikorların aranmasında kullanılmıştır. İki protein de Western Blotlamalarda KKKAV antikor pozitif hasta serumlarıyla reaksiyon vermiş, EİA ile taranan KKKAV antikor pozitif hasta serumlarının % 66'sı NSm ve NSs spesifik IgG yönünden pozitif bulunmuştur. Rekombinant proteinler ile bağışıklanan farelerden ise yüksek titrede antikor elde edilebilmiştir. Bu proteinlerin gerçek rollerinin belirlenmesi için daha ileri çalışmalar gerekmektedir.
Özet (Çeviri)
Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (CCHFV) is a widely distributed arbovirus and causative agent of a severe febrile hemorrhagic disease that have a mortality rate between 5-30%. Currently there is no approved vaccine or treatment against this agent which has been classified as a biosafety level 4 (BSL 4) pathogen. BSL 4 facility requirement directs researchers to alternative methods to gather as much information about this pathogen as possible and recombinant protein technology is one of these methods. Recombinantly expressed viral proteins are powerful tools to dissect different stages of life cycle of such viruses. Among other proteins,viral non-structural proteins stand out because of their ability to interact with vector/ host immun system and contribution to viral pathogenesis. Roles of viral non structural proteins at viral assembly, possible activities as a scaffolding proteins, apoptotic/anti-apoptotic activities, inhibition of interferon based reactions and virus attenuation have been shown in many species including arthropod-borne bunyaviruses. Besides their various biological roles at virus life cycle, it has also been shown that these proteins could have potential roles at diagnosis, treatment and vaccine development. CCHFV has one and possibly two non structural proteins originated from M segment (NSm) and S segments (NSs). In this study bacterial expression of nonstructural proteins M and S of CCHFV Kelkit06 strain is aimed. For this purpose, NSm (369 base pair) and NSs (477 base pair) optimized sequences are cloned to various expression vectors (pETSUMO, pET28b and pET30b) and Escherichia coli BL21(DE3) was utilized as an expression host for N or C-terminally His tagged proteins. Recombinant proteins were used in Western Blotting and enzyme immunoassay (EİA) tests against CCHFV antibody positive and negative human serum to detect the antibodies against these proteins. Both proteins reacted with CCHFV antibody positive human sera when tested with Western Blotting, 66 % of all tested CCHFV antibody positive human sera were found to be positive for NSm and NSs specific IgG. Also high titer NSm and NSs specific antibodies obtained from mice immunized with recombinant proteins. Further studies are warranted to specify exact roles played by these proteins.
Benzer Tezler
- Kırım Kongo Kanamalı Ateş virüsü kelkit suşu proteinlerinin ökaryotik hücrelerde stabil ifadesi
Stably expression of proteins of Crimean-Congo Hemorrhagic Aever virus kelkit strain in eukaryotic cells
ÖZLEM BAKANGİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Tokat ve Kelkit havzası civarındaki illerde kene-kökenli Kırım Kongo Kanamalı Ateşi Virüsü'nün RT-PCR yöntemi ile teşhisi
Diagnosis of tick-borne Crimean Congo Haemorrhagic Fever Virus with Rt-PCR method in Tokat and the other cities of Kelkit basin
GÜL AYDOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2008
BiyolojiGaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ŞABAN TEKİN
- Generation of plasmid-based eukaryotic model to investigate biology of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus nucleoprotein and glycoproteins
Kırım Kongo kanamalı ateşi virüsü nükleoproteinin ve glikoproteinlerinin biyolojisinin çalışılmasında plazmit temelli ökaryotik model oluşturulması
NESİBE SELMA ÇETİN
Doktora
İngilizce
2023
BiyoteknolojiBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Kırım kongo kanamalı ateş virüsü kelkit suşu gc glikoproteininin ökaryotik ekspresyon sisteminde üretilmesi
Production of crimean congo hemorrhagic fever virus glycoprotein gc in eukaryotic expression system
FİLİZ GÜNEY
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ZİYA DOYMAZ
- Koyunlarda Kırım-Kongo kanamalı ateşi virusu (Kkkav) seroprevalansının araştırılması
Investigation of Crimean-Congo hemorrhagic fever virus (Cchfv) seroprevalence in sheep
MUSTAFA ÜĞDÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Veteriner HekimliğiBurdur Mehmet Akif Ersoy ÜniversitesiViroloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HASBİ SAİT SALTIK