Polifenol oksidaz enziminin Iğdır kırmızı kişmiş üzümünden (Vitis Vinifera L.) afinite kromotografisi ile saflaştırılması, karakterizasyonu ve inhibisyonu
Purification of polyphenol oxidase enzyme from Iğdır city's grape kırmızı kişmiş (Vitis Vinifera L.) by affinity chromatography, characterization and inhibition
- Tez No: 565588
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF DUYGU KAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Iğdır Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 119
Özet
Bu çalışmada tarihi bir üzüm çeşidi olan Kırmızı Kişmiş üzümünden (Vitis vinifera L.) PFO enzimi aseton çöktürmesi ve takiben Sepharose-4B-L-tirosin-p-aminobenzoik asit afinite jeli kullanılarak, afinite kromatografisi ile saflaştırıldı ve enzimin kinetik özellikleri incelendi.Saf enzim elüatında PFO'ın varlığı, doğal ve SDS-poliakrilamid jel elektroforezlerinde tek bir bant halinde ortaya konuldu. Optimum PFO aktivitesi,4- metil katekol, katekol, L-Tirozin substratları kullanılarak belirlendi. Enzimin optimum pH'sı, 4-metil katekol, substrarı varlığında 5,0 olarak bulundu. 4-metil katekol, katekol substratları için Michaelis-Menten sabiti (Km) ve maksimum reaksiyon hızı (Vmax) hesaplandı. Menten sabiti (Km) ve maksimum hız (Vmaks) değerleri 4-metil katekol için 7,25 mM ve 2500 U/mL.dak protein olarak ve katekol için ise 24,21 mM ve 2000 U/mL.dak protein olarak belirlendi.PFO enziminin pH kararlılığı, optimum sıcaklık ve termal stabilitesi, enzim aktivitesi üzerine bazı metallerin ve inhibitörlerin etkisi gibi özellikleri 4- metil katekol substratı varlığında incelendi. Optimum sıcaklığı 30°C, stabil pH'sı 7,0 olarak belirlendi. Enzimin ısıl kararlılık profili incelendiğinde, 1 saatlik inkübasyondan sonra, 10- 40 °C aralığında oldukça kararlı olduğu gözlendi. Dört farklı gıda katkı maddesi için I50 ve Ki değerleri ve inhibisyon türleri tespit edildi. Askorbik asitin Vitis vinifera L. PFO'su üzerinde en güçlü inhibitör etkisi gösterdiği gözlemlendi. Na+ , K+ , Mg2+, Cu2+ ve Al3+ iyonlarının 1 mM ve 10 mM'lık nihai konsantrasyonlarda PFO aktivitesi üzerine etkisi incelendi.
Özet (Çeviri)
In this study, the PPO enzyme from the Kirmizi Kismis (Vitis vinifera L.), a historical grape variety, was purified by affinity chromatography using the cold acetone precipitation followed by Sepharose-4B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid affinity column and the kinetic properties of the enzyme were investigated.The purified enzyme was appeared as a single band on native- and SDS- polyacrylamide gel electrophoresis. Optimum PPO activity was determined using 4-methyl catechol, catechol, L-Tyrosine substrates.The optimum pH of the enzyme was found to be 5,0 in the presence of 4-methyl catechol substrate.The Michaelis-Menten constant (Km) and the maximum reaction velocity (Vmax) were calculated for 4-methylcatechol, catechol substrates.Menten constant (Km) and maximum velocity (Vmax) values were determined as 7,25 mM and 2500 U/mL.dak protein for 4-methyl catechol and 24,21 mM and 2000 U/mL.dak protein for catechol.PFO enzyme pH stability, optimum temperature and thermal stability, enzyme activity on the properties of some metals and inhibitors such as the effect of 4-methylcatechol substrate was examined in the presence.The optimum temperature was found as 30 °C and the stable pH value was found as 7,0.When the thermal stability profile of the enzyme was analyzed, it was very stable in the range of 10-40 °C, it was observed that after 1 hour incubation. I50 and Ki values and inhibition types were determined for four different food additive and ascorbic acid showed the strongest inhibitory effect on the Vitis vinifera L. PPO activity. The effect of Na+ , K+ , Mg2+, Cu2+ and Al3+ ions on PFO activity at final concentrations of 1 and 10 mM was investigated.
Benzer Tezler
- Polifenol oksidaz enziminin miskali üzümünden (Vitis Vinifera L.) saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı gıda katkı maddelerinin enzim aktivitesi üzerine inhibisyon etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of polyphenol oxidase enzyme from mi̇skali̇ grape (Vitis Vinifera L.) and investigation of some food additives' inhibition effects on enzyme activity
FUNDA BEDER
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikIğdır ÜniversitesiBiyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ UĞUR GÜLLER
- Polifenol oksidaz enziminin posof badele elmasından (Malus domestica L.) saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı kimyasalların ve metal iyonlarının enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification, characterization of polyphenol oxidase enzyme from posof badele apple (Malus domestica L.) and investigation of effects of some chemicals and metal ions on enzyme activity
AYHAN ÇİĞDEM
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Gıda MühendisliğiIğdır ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ UĞUR GÜLLER
- Iğdır elmasından polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
The investigations of some characteristics and the prufocolion of poliphenol oxidase enzyme from Iğdır apple
FİKRET TÜRKAN
- Zeferan şeftalisinden (Prunus persica L.) polifenol oksidaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve inhibisyonu
Purification, characterization and inhibition of Polyphenol oxidase enzyme from zeferan peach (Prunus persica L.)
EDA BECERİKLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Gıda MühendisliğiIğdır ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF DUYGU KAYA
- Aydın ilinde doğal olarak yetişen böğürtlen ve karadut meyvelerinde polifenol oksidaz (PFO) enziminin dönemsel değişimi
Periodic change of the polyphenol oxidase enzyme in blackberry and black mulberry berries growing naturally in Aydin povince
FİGEN BAĞCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Mühendislik BilimleriIğdır ÜniversitesiBahçe Bitkileri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SADİYE PERAL EYDURAN
PROF. DR. SEZAİ ERCİŞLİ