Geri Dön

Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin grafen-nanofiber matriks üzerinde nöronal farklılaşma potansiyelinin incelenmesi

Investigation of neuronal differentiation potential of adipose tissue derived mesenchymal stem cell on graphene-nanofiber biomaterial

PDF İndir

  1. Tez No: 578836
  2. Yazar: ERTUĞRUL PINAR
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. FERHAT HARMAN
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Nöroşirürji, Biochemistry, Bioengineering, Neurosurgery
  6. Anahtar Kelimeler: adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücre, grafen oksit, polikaprolakton, nanofiber skaffold, nöronal farklılaşma, adipose tissue-derived mesenchymal stem cells, graphene oxide, polycaprolactone, nanofiber scaffold, neuronal differentiation
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 136

Özet

Amaç: Bu çalışmadaki amacımız, insan cilt altı ve spinal epidural adipoz dokudan izole edilen adipoz doku kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin (AKH), grafen nanofiber matriks üzerindeki nöronal farklılaşma potansiyelini in vitro olarak incelemekti. Gereç ve Yöntem: İnsanlardan cilt altı ve spinal epidural adipoz doku örnekleri cerrahi yol ile alındı. Mekanik ve enzimatik yöntemler ile kök hücre izolasyonu yapıldı. Üretilen bu kök hücrelerin belirli yüzey belirteçlerinin ekspresyonu akım sitometri analizi ile gösterildi. Adiposit, osteosit ve nöral hücrelere farklılaşabilme potansiyeli incelendi. Grafen Oksit (GO) sentezlendi ve Polycaprolacton (PCL) ile birlikte nanofiber skaffoldlar elektroeğirme yöntemi ile üretildi ve üretilen skaffoldların kimyasal özellikleri ve yüzey morfolojileri incelenerek karakterizasyonu yapıldı. MTT analizi ile skaffoldlar üzerinde AKH'lerin canlılığı test edildi. AKH'lerin skaffoldlar üzerinde tutunması immünfloresan ve taramalı elektron mikroskobu (SEM) görüntüleri ile incelendi. AKH'lerin skaffoldlar üzerinde normal medium ve nöronal farklılaştırma mediumunda inkübasyonu sonrasında immünfloesans ve SEM görüntüleri ile farklılaşma potansiyeli incelendi. Bulgular: Cilt altı ve epidural bölgeden alınan adipoz dokudan kök hücreler izole edildi. Bu kök hücrelerin yapılan akım sitometri analizinde belirli pozitif ve negatif yüzey belirteçlerinin tespiti ve adiposit, osteosit ve nöral hücrelere farklılaşma potansiyelinin gösterilmesi ile AKH'ler oldukları kanıtlandı. Yapılan MTT analizinde PCL ve PCL+GO biyomateryalleri üzerinde AKH'lerin canlılıklarını sürdürdükleri belirlendi. PCL ve PCL+GO skaffoldları üzerinde, AKH'lerin tutundukları gösterildi. POC+GO skaffoldu üzerinde daha yoğun tutunma olduğu gözlendi. Yapılan immünfloresans görüntülemerde, PCL ve PCL+GO skaffoldları üzerinde, AKH'lerin indüksiyon ortamı olmaksızın nöronal farklılaşma potansiyelinin olduğu ve nöronal farklılaşma ortamının eklenmesi ile hücrelerin erken nörnal farklılaşma morfolojik bulgularını gösterdiği gözlendi. Ayrıca cilt altından farklı olarak epidural alandan izole edilen AKH'lerin, PCL ve PCL+GO skaffoldu üzerinde, miyelin ile ilişkili bir enzim olan CNPase ve sadece PCL+GO skaffoldu üzerinde, aksonal ve dendritik uzantıların oluşumunda mikrotübüller ile ilişkili bir protein olan Map2 eksprese ettikleri immünfloresan boyamaları ile gösterildi. Skaffoldlar üzerinde nöronal farklılaştırma ortamında bekletilen AKH'lerin yapılan SEM görüntülemerinde uzantılar ve birbirleri ile bağlantılar yaptıkları ayrıca PCL skaffoldundan farklı olarak hücrelerin PCL+GO skaffolduiçine göç ettikleri gözlendi. Sonuç: Epidural alandan alınan adipoz dokudan izole edilen kök hücrelerin, mezenkimal kök hücre özelliklerine sahip olduğu gösterildi. Ayrıca bu kök hücrelerin cilt altından farklı olarak, SSS miyelin üretiminden sorumlu olan oligodendrosit hücrelerine farklılaşma eğilimi olduğu immünhistokimyasal olarak gösterildi. PCL+GO ile üretilmiş nanofiber skaffoldu üzerinde AKH'lerin tutunması, skaffold içine göç etmesi ve nöronal farklılaşma potansiyelinin, yalnızca PCL'den oluşan skaffolda kıyasla daha fazla olduğu gözlendi.

Özet (Çeviri)

Aim: The aim of this study was to examine the neuronal differentiation potential of adipose derived mesenchymal stem cells (ADSC's) which was isolated from human subcutaneous and spinal epidural adipose tissue, on the grafen nanofiber matrix in vitro. Material methods: Subcutaneous and spinal epidural adipose tissue samples were taken from humans by surgery. Stem cell isolation was performed by mechanical and enzymatic methods. Expression of specific surface markers of these produced stem cells was demonstrated by flow cytometry analysis. The potential for differentiation into adipocytes, osteocytes and neural cells was examined. Graphene Oxide (GO) was synthesized and together with polycaprolacton (PCL) nanofiber scaffolds were produced by electrospinning method and the chemical properties and surface morphology of the produced scaffolds were characterized. The viability of AKHs on scaffolds was tested by MTT analysis. Adhesion of ADSC's on scaffolds was examined by immunofluorescence and scanning electron microscopy (SEM) images. After incubation of ADSC's in normal medium and neuronal differentiation medium on scaffolds, the potential for differentiation was examined by immunofluorescence and SEM images. Results: Stem cells were isolated from adipose tissue taken from subcutaneous and epidural regions. Flow cytometry analysis of these stem cells revealed specific positive and negative surface markers. In addition, these stem cells proved to be ADSC's by demonstrating the differentiation potential of adipocytes, osteocytes and neural cells. In MTT analysis, it was determined that ADSC's remained viable on PCL and PCL + GO biomaterials. Adhesion of ADSC's on PCL and PCL + GO scaffolds was shown. POC + GO scaffold showed more intense adhesion. Immunofluorescence imaging showed that ADSC's on PCL and PCL + GO scaffolds had neuronal differentiation potential without induction medium and the addition of neuronal differentiation medium showed the morphological findings of early neural differentiation of cells. In addition, immunofluorescence staining of ADSC's isolated from the epidural area, unlike subcutaneous, express CNPase which is a myelin-associated enzyme, on the PCL and PCL + GO scaffold and Map2 which is a protein associated with microtubules in the formation of axonal and dendritic extensions, only on PCL + GO scaffold. In the SEM images of the ADSC's which were kept in neuronal differentiation medium on the scaffolds, they made extensions and connections with each other, and unlike the PCL scaffold, the cells migrated into the PCL + GO scaffold. Conclusion: Stem cells isolated from adipose tissue from epidural area were shown to have mesenchymal stem cell characteristics. In addition, unlike the subcutaneous of these stem cells, it was shown immunohistochemically that they tend to differentiate into oligodendrocyte cells responsible for CNS myelin production. Adhesion, migration into the scaffold, and neuronal differentiation potential of ADSC's on the nanofiber scaffold produced with PCL + GO was observed to be greater than in the scaffold consisting of PCL alone.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    494661

    Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin (ad-scs) kültürasyonunda ve adipositlere farklılaştırılmasında trombositten zengin plazmanın (prp) etkinliği

    Effectiveness of platelet-rich plasma (prp) on cultivation and differentiation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ad-scs) into adipocytes

    ŞÜKRAN NOYAN SAVAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiEge Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN

  2. Tez No

    832396

    Adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin, TLT4 üzerinden pankreas kanseri hücrelerindeki antikanserojenik etkilerinin incelenmesi

    Investigation of anticarcinogenic effects of adipose tissue derivedmesenchymal stem cells on pancreatic cancer cells via TLR4

    DEMET KAÇAROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    OnkolojiSüleyman Demirel Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİLGÜN GÜRBÜZ

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SEHER YAYLACI

  3. Tez No

    295397

    Characterization of the adipogenic differentiation potential of bone marrow and adipose tissue-derived mesenchymal stem cells and dermal fibroblast

    Kemik iliği ve adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin ve dermal fibroblastların adipojenik farklılaşma potansiyellerinin karakterize edilmesi

    FAHRETTİN HACZEYNİ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  4. Tez No

    624073

    Glukagon benzeri peptid-1'in adipoz doku kökenli mezenkimal kök hücrelerin kardiyomiyosite dönüşümüne etkisi

    Effect of glucagon-like peptide-1 on differentiation of adipose derived mesenchymal stem cells into cardiomyocytes

    ÖZGÜR TEKİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    Histoloji ve EmbriyolojiEge Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DİLEK TAŞKIRAN

  5. Tez No

    619186

    Farklı doku kökenli mezenkimal kök hücreler ve propolisin diyabetik sıçanlarda oluşturulan deneysel yanık modelinde kullanılması

    Effects of mesenchymal stem cells derived from different tissues and propolis on experimental burn wound model of diabetic rats

    NAVİD HOSSEİNİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Moleküler TıpEge Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN

Geri Dön