Deve sütü laktoferrin'in kolorektal adenokarsinoma hücre hatti (CACO-2) üzerine antitümöral etkinliği
Antitumoral efficacy of camel milk lactoferrin on colorectal adenocarcinoma (CACO-2) cell line
- Tez No: 585058
- Danışmanlar: PROF. DR. ARİF ALTINTAŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 123
Özet
Çalışmada, deve sütü laktoferrin'inin insan kolo-rektal adenokarsinoma hücre hattı (Caco-2) üzerindeki antiproliferatif, antitümöral etkinliğinin incelenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, deve sütü laktoferrini izole ve liyofilize edilerek kolo-rektal adenokarsinoma hücrelerine (Caco-2) uygulanmış ve apoptotik ve antiproliferatif etkileri araştırılmıştır. Çalışmada kullanılan deve sütü Aydın ve Denizli illerinde yetiştirilen 7 baş deveden elde edilmiş ve soğuk zincir altında laboratuvara ulaştırılmıştır. Deve sütünden laktoferrin iyon değişimi kromatografik yöntemle izole edilmiştir. Laktoferrin tuzlarından ayrılarak saflaştırılmış ve EMEM tamponda hazırlanan çözeltileri Caco-2 hücre hattı üzerine uygulanmıştır. Antitümöral etkinlik hücreler üzerinde MTT canlılık testi, apoptotik belirteçler (fosfo-p53, p53, Cleaved Kaspaz-3, BAD, Fosfo-BAD ve cleaved PARP) ve apoptotik DNA laddering ve apoptotik protein ifade analizleri ile değerlendirilmiştir. Elde edilen veriler uygun istatistik yöntemler kullanılarak önemlilik dereceleri belirlenmiştir. Laktoferrin'in 10.000 µg/ml ve azalan seri dilüsyonları ile 24 ve 48 saat muamele edilen Caco-2 hücrelerinin sitotoksisiste ve canlılık değişimleri MTT canlılık testi ile analiz edilmiştir. Kontrol olarak 0 µg/ml laktoferrin örneklerinin canlılıkları tüm zaman dilimlerinde %100 olarak kabul edilmiş ve diğer örneklere ait canlılık değerleri ortalama absorbans değerlerinden orantısal olarak hesaplanmıştır. Caco-2 hücreleri 24 ve 48 saat deve sütü laktoferrini ile inkübe edildiğinde doza bağlı olarak (10.000 µg/ml; 5.000 µg/ml; 2500 µg/ml; 1250 µg/ml; 625 µg/ml ve 312,5 µg/ml) hücre canlılık oranında düşüş kaydedilmiştir (24 saat için sırasıyla %16,7; %27,84; %35,35; %43,64; %47,89 ve %62,69; 48 saat için sırasıyla %15,56; %27,85; %33,17; %43,54; %51,31 ve %76,34). Fosfo-p53 değerlerinde, Caco-2 hücrelerinin deve sütü laktoferrini ile 24 saat inkübasyonu sonunda kontrol değerlere göre 1,10 kat artışa (p>0.05), 48 saat inkubasyonda ise kontrol değerlere göre 2,06 kat artışa (p0.05) artış gerçekleşmiştir. Çalışma sonunda, deve sütü laktoferrin'inin insan kolo-rektal kanser hücre hattı (Caco-2) üzerinde apoptotik ve antikanserojen etkiye sahip olduğu ve tümör hücrelerinin gelişmesini önemli ölçüde engellediği kanısına varılmıştır. Çalışmadan elde edilen sonuçların in vivo çalışmalara temel oluşturacağı kanaatindeyiz.
Özet (Çeviri)
The aim of this study was to investigate the antiproliferative, antitumoral activity of camel milk lactoferrin on human colorectal adenocarcinoma cell line (Caco-2). For this purpose, camel milk lactoferrin was isolated and lyophilized and applied to colorectal adenocarcinoma cells (Caco-2) and its apoptotic and antiproliferative effects were investigated. The camel milk used in the study was obtained from 7 head camels reared in Aydın and Denizli provinces and delivered to the laboratory under the cold chain. Lactoferrin ion exchange was isolated from camel milk by chromatographic method. The lactoferrin was separated from the salts and purified and the solutions prepared in EMEM buffer were applied onto the Caco-2 cell line. The antitumor activity was evaluated by MTT viability test on cells, apoptotic markers (phospho-p53, p53, Cleaved Caspase-3, BAD, Phospho-BAD and cleaved PARP) and apoptotic DNA laddering and apoptotic protein expression assays. Obtained data were determined by using appropriate statistical methods. The changes in cytotoxicity and viability of Caco-2 cells treated with 10,000 µg/ml and decreasing serial dilutions of lactoferrin for 24 and 48 hours were analyzed by MTT viability test. As a control, the viability of 0 µg/ml lactoferrin samples was accepted as 100% in all time periods and the viability values of the other samples were calculated proportionally from the mean absorbance values. Caco-2 cells were incubated with camel milk lactoferrine for 24 and 48 hours, depending on the dose (10,000 µg/ml; 5,000 µg/ml; 2500 µg/ml; 1250 µg/ml; 625 µg/ml and 312.5 µg/ml decreased cell viability (for 24 hours respectively 16.7%, 27.84%, 35.35%, 43.64%,47,89% and 62.69% for 48 hours respectively 15.56%, 27.85%, 33.17%, 43.54%, 51,31% and 76.34%) After 24 hours incubation of Caco-2 cells with camel milk lactoferrine caused 1.10 times increase (p> 0.05) compared to control values and 2.06 times increase (p 0.05). At the end of the study, it was concluded that camel milk lactoferrin has an apoptotic and anticarcinogenic effect on human colorectal cancer cell line (Caco-2) and significantly inhibits the growth of tumor cells. We believe that the outcomes of the study will be the basis for in vivo studies.
Benzer Tezler
- Deve sütünün fizikokimyasal özelliklerinin ve protein yapısının belirlenmesi
Physicochemical properties of the camel milk and determination of protein structure
SEYHAN YURDAKUL
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Gıda MühendisliğiSüleyman Demirel ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZÜBEYDE ÖNER
- Deve sütü ve yağının fiziko-kimyasal özellikleri ile süt yağının nano boyuttaki görünümü
Physico-chemical properties of camel milk and nano view of milk fat
OKAN EKMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Bilim ve TeknolojiAfyon Kocatepe ÜniversitesiNanobilim ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ERMAN DUMAN
- Deve sütünden yoğurt üretimindemikrobiyal transglutaminazenziminin kullanımı
Use of microbial transglutaminase enzyme in yoghurt production from camel milk
FAHRİYE ÜMÜT
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gıda MühendisliğiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SELDA BULCA
- Kazakistan'da tüketime sunulan shubatın bazı kimyasal ve mikrobiyolojik özelliklerinin araştırılması
Investigation of some chemical and microbiological properties of shubat consumed in Kazakhstan
NAZYM TOKMAMBETOVA
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Besin Hijyeni ve TeknolojisiAtatürk ÜniversitesiGıda Hijyeni ve Teknolojisi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. Meryem AYDEMİR ATASEVER
- Mikrobiyal transglutaminazın deve ve inek sütü karışımından kefir üretiminde kullanımı ve bu enzimin kefirin bazı özellikleri üzerine etkisinin araştırılması
The use of microbial transglutaminase in the production of kefir produced with the mixture of camel and cow's milk and the investigation of the effect of this enzyme on some properties of kefir
SELİN AKBULUT TOPEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Gıda MühendisliğiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SELDA BULCA