Elongasyon faktör-2 (EF-2)'nin hücre içi dönüşüm (turnover) mekanizmaları üzerine bir çalışma: 1G2 hibridoma hücrelerinde yapılan gözlemler
A Study on intracellular turnover of EF-2: Investigation on 1G2 hybridoma cells
- Tez No: 59636
- Danışmanlar: PROF. DR. SİNA GÖKÇE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
5. ÖZET insan serum albümini (HSA) ile bağışıklanan farelerin dalak hücreleri PEG varlığında miyelom hücreleriyle füzyona sokuldu. Füzyon sonrası oluşan klonlarm özgünlüğü ELISA ile belirlendi 8 özgün klondan en aktif olanı (1G2) kültür ortamında çoğaltıldı. 1G2 hücrelerinin sentezleyip kültür üstsıvısma salgıladığı monoklonal antikorun tür özgünlüğü belirlendi. Bu monoklonal antikorun insan ve sıçan kökenli proteinlerle ve serumlarla yapılan testlerde çapraz reaksiyon vermediği gözlendi Monoklonal antikor 1G2 ve tavşanda geliştirilen poliklonal nitelikli antiserumlar immünafînite kromatografisiyle saflaştunldı. Poliklonal antiserumlardan saflaştaılan HSA' ya özgü antikorlarla Ig-AP birleşikleri hazırlandı. 1G2 ve Ig-AP birleşikleri HSA belirtimi için geliştirilen ELISA testlerinin değişik aşamalarında kullanıldı. Ticari RIA kiriyle yapılan karşılaştırmalı çalışmalar yarışmalı ELISA'nm HSA behftiminde güvenli bir şekilde kullanılabileceği gösterdi Çalışmamızın protein dönüşüm mekanizmalarının incelenmesine yönelik kısmında 1G2 hücreleri kullanıldı. 35S metionin varlığında izlenen protein sentezi ve yıkımı hücre hzatlanndaki proteinlerin elektroforez profilleri ve otoradyogram izdüşümleri ile değerlendirildi Bir protein sentez inhibitörü olan sMohekzdmit ve çeşitli ortam koşullarının protein dönüşümü üzerindeki etkileri belirlenmeye çalışıldı. 0,15,30,60,120 dak 35S metiyonin ile inkübe edilen hücrelerde 120 dak sonra 35S metiyonin inkorporasyonunun devam ettiği gözlendi 2 sa 35S metiyonin ile işlem gördükten soma belirtilen sürelerde normal medyumla inkübe edilen hücrelerde ise 120 dak sonra 95 kDa molekül ağırlıklı protein bandında halen bir sinyal gözlendi 42°C'ta inkübe edilen hücrelerde 60 ve 90 kDa molekül ağırlıklı heat shock protein ailesinden iki proteinin sentezlendiği belirlendi 71
Özet (Çeviri)
6. SUMMARY The spleen cells of mice immunized with human serum albumin (HSA) were subjected to fusion with myeloma cells in the presence of PEG. After fusion and growth in (HAT) selective medium, the screened for immunoreactivitiy with HSA by ELISA Out of eight specific clones, the most active one (1G2) was expanded. 1G2 was found to be species specific and exhibited no immunoreactivity with serum albumin of other origin. The monoclonal antibody 1G2 was purified from cell culture supernatant by immunoaffinity choromatography using a HSA-Sepharose 4B column. HSA-specific immunoglobulins were similarly purified from rabbit antiserum using same procedure. Immunoaffinity purified rabbit Ig fraction was subsequently used for preparation of Ig-alkaline phosphatase (AP) conjugate. 1G2 and Ig-AP conjugates were used for detection of HSA in different system of ELISA. Comperative tests by using a commercial RIA kit showed that indirect competitive ELISA can be used reliably in detection of HSA. 1G2 cells were also used for investigations of protein turnover. Protein synthesis and degradation were followed by use of 35S methionine cell culture medium and subsequent analysis of the cell lysate proteins by SDS-PAGE and autoradyography. The effects of cycloheximide a protein syenthesis inhibitor and of various enviromental conditions on protein turnover were investigated. 35S methionine incorporation was still shown after 120 minutes in the cells that were incubated for 0,15,30,60,120 minutes. After having been incorporated with 35S methionine for 120 minutes, cells were incubated with normal medium for the times as mentioned above. In 120th minute there was still a signal at a protein band that corresponds to 95 kDa molecular weight. Synthesis of two kinds of protein from heat shock protein family was observed at 42°C cells. 72
Benzer Tezler
- Kobayda farklı dokulardaki difteri toksini etkisi - antioksidanların bu etkideki rolü
The effect of diphtheria toxin on different tissues of guinea pig and the role of antioxidants on this effect
SABİHA TOK
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
Biyofizikİstanbul ÜniversitesiBiyofizik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. RÜSTEM NURTEN
- Elongasyon faktörü 2 (EF-2) ve protein sentezi sonrası modifikasyonlar-otokatalitik biçimde gerçekleşen ADP-ribozillenme üzerine bir çalışma
Başlık çevirisi yok
A.NUR SAYHAN(BUYRU)
- Difteri toksinine karşı moleküler baskılama yöntemi ile geliştirilen plastik antikorun ın vitro etkinliğinin belirlenmesi
Determination of in vitro activity of plastic antibody developed for diphtheria toxin by molecular imprinting
SÜLEYMAN SERDAR ALKANLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Biyofizikİstanbul ÜniversitesiBiyofizik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HANDAN AKÇAKAYA
- Elongasyon Faktör 2'nin aktif ADP-ribozillenme bölgeleri üzerine yapısal çalışmalar
Başlık çevirisi yok
KIVANÇ ERGEN