Elongasyon faktör-2 (EF-2) aktin etkileşimi
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 59295
- Danışmanlar: PROF. DR. RÜSTEM NURTEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1997
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 84
Özet
Çalışmalarda kullanılan aktin, tavşan çizgili kas dokusundan, EF-2, EF-1 ve ribozom, sıçan karaciğer dokusundan saflaştırıldı. Saflaştırılan aktinin kalitesi elekroforetik yöntemle analiz edildi. EF-2' nin saflık ve aktivitesi, elektorforez, HPLC ve ADP-ribozillenme ile test edildi. Ökaryotik elongasyon faktör-2 (EF-2)' nin GTPyS varlığında aktine bağlandığı, beraber çöktürme (co-sedimentasyon) yöntemi ile belirlendi. Aktine bağlanan EF-2 miktarı ADP-ribozillenme belirlenirken, etkileşim SDS-PAGE' de gösterildi. Bu bulgular otoradyografî ve immunblot çalışmalrı ile desteklendi. Değişik tuz konsantrasyonlarmda ve pH değerlerinde, bağlanmanın spesifik olduğu gösterildi, aktin il etkileşim açısından natif EF-2 ile ADPR-EF2 arasında farklılık olmadığı saptandı. Aktin filament uzunluğunun EF-2 bağlanması üzerine bir etkiye sahip olmadığı ve her on iki aktin monomerine bir EF-2 molekülünün bağlandığı belirlendi. EF2-aktin etkileşiminde en yüksek bağlanma (50 mM KC1, 4 mM MgCl2, 10 mM MET, 0.5 mM GTPyS, pH: 7.5) varlığında oda ısısında 6 saat sürede gerçekleştiği saptandı. Aktin bağlayan major protein EF-1 ve G-aktinin bağlanmayı inhibe ettiği, EF-1 inhibisy onunun yarışmalı G-aktin inhibisyonunun ise yarışmasız olduğu belirlendi. G-aktinin, EF2-ribozom etkileşimini inhibe ettiği, DNazI ile etkileşerek hiperkromositeyi azalttığı belirlenirken, DNazI' in de F-aktini fragmente ettiği saptandı. EF-2 varlığında DNazI' in G-aktin aracılı inhibisyonu kısmen ortadan kalkarken F-aktin fragmentasyonunda azalma olduğu görüldü. Aktin+EF-2, aktin+DNazI, aktin+EF-2+DNazI negatif boyama tekniği kullanılarak (TEM) elektron mikroskobunda gridler üzerine aktarılan aktin, değişik büyütmelerde görüntülendi. EF2-aktin etkileşim sonucunda aktin fîlamentlerinin demetler oluşturduğu gözlendi. DNazI' in aktin fragmentasyonuna sebep olduğu ve EF-2' nin bu fragmentasyonu azalttığı belirlendi.
Özet (Çeviri)
In this experiment, actin was purified from the rabbit striated muscle and EF-1, EF-2 and ribosome was purified from rat liver tissue. The quality of purified actin was analyzed by the electrophoretic method. The pureness and the activity of EF-2 was tested by the electrophoreses, HPLC and ADP- ribosylatiom. The bounding of the eukaryotik EF-2 to the actin, in the presence of GTP yS was determined by the co-sedimentation method. While the amount of bounding EF-2 to the actin was determining by the ADP-ribosylation, this interaction was indicated in the SDS-PAGE. These findings was supported by the otoradiographic and immunblot experiments. It was indicated that the bounding was specific in the different pH degrees. It was determined that there was no interaction with actin between native EF-2 and ADPR-EF-2. It was determined that there was no effect of actin filament lenght for bounding of EF-2 and each twelve actin monomer was bounded by one EF-2 molecule. The maximum bounding in the interaction of EF-2 with actin was realized in the room temperature within six hours (in the presence of 50 mM KC1, 4 mM MgCl2, 10 mM MET, 0,5 mM GTPyS, pH: 7,5). It was determined that, the major proteins EF-1 and G-actin which have binding capacity for actin, inhibited binding and it was determined the inhibition of EF-1 was competitive and the inhibition of G-actin was non-competitive. While it was determining that G-actin inhibited EF-2 interaction with ribosome and decreased hyperchromosity by interacting with DNasel. F-actin was fragmented by the DNasel, it was observed a decrease in the F-actin fragmentation while DNasel' s inhibition partly disappering by th eG-actin in the presence of EF-2. The actin (actin+EF-2, actin+DNasel, actin+EF-2+DNaseI) was transformed on the grids in the electron microscobe by using the negative staning techniques (TEM) and it was visualized by using different magnifications. It was observed that the actin filaments had formed bunches as a consequence of the interaction of EF- 2-actin and it was determined that DNasel caused the actin fragmentation and EF-2 caused a decrease in this fragmentation.
Benzer Tezler
- Elongasyon Faktör 2'nin aktif ADP-ribozillenme bölgeleri üzerine yapısal çalışmalar
Başlık çevirisi yok
KIVANÇ ERGEN
- Elongasyon faktör-2 (EF-2)'nin hücre içi dönüşüm (turnover) mekanizmaları üzerine bir çalışma: 1G2 hibridoma hücrelerinde yapılan gözlemler
A Study on intracellular turnover of EF-2: Investigation on 1G2 hybridoma cells
HANDAN TÜMER AKÇAKAYA
- The GTP hydrolysis mechanism in elongation factor-Tu (EF-Tu)
EF-Tu proteininde GTP hidroliz mekanizması
AYLA BAŞARAN KINALI
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BÜLENT BALTA
PROF. DR. VİKTORYA AVİYENTE
- Morphological and molecular characterisation of neonectria fuckeliana on spruce in Great Britain
Başlık çevirisi yok
SEZER OLİVİA KAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Ormancılık ve Orman MühendisliğiUniversity of AberdeenPROF. STEVE WOODWARD
DR. ANA PEREZ-SİERRA
