Polifenolik bileşiklerin amiloid beta plak çözündürme etkinliklerinin diferansiye-SH-SY5Y hücrelerinde araştırılması ve diferansiye hücrelerin kan-beyin bariyer bütünlüğüne etkisinin in vitro olarak incelenmesi
Investigation of the effectiveness of polyphenolic compounds on amyloid beta plaque dissociation in differentiated-SH-SY5Y cells and the effects of the differentiated cells on blood-brain barrier integrity in vitro
- Tez No: 611602
- Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE SEMRA KOÇTÜRK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıp Bilimleri Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 169
Özet
Giriş: Alzheimer hastalığı (AH), özellikle beynin hipokampus ve korteks bölgelerini etkileyen nörodejenereatif bir hastalıktır. AH'nın kompleks patogenezi nedeniyle günümüzde henüz bir tedavisi bulunmamaktadır. Son yıllarda AH'de rol oynayan amiloid plak oluşumunu engelleyen/çözünmesini sağlayan çalışmalara odaklanılmıştır. Doğal polifenoller de sahip oldukları özellikleri ile bu alanda potansiyel ajanlar olarak öne çıkmaktadırlar. Amaç: •Farklı ajanlar kullanılarak SH-SY5Y hücrelerinde en iyi nöronal diferansiyasyonu sağlayan uygulamanın ve süresinin belirlenmesi. •EGCG, Punicalagin, Ellagic asid, Gastrodin/kombinasyonlarının Aβ agregasyonu çözündürme etkinliklerinin belirlenmesi. •Diferansiye edilmiş nöronal hücreler ile in vitro ikili, üçlü hücre kültürü ile kan beyin bariyer (KBB) modellerinin oluşturulması ve modellerin karşılaştırılması. • Polifenollerin Aβ1-42 plaklarını çözündürme etkinliklerinin oluşturulan KBB'inde incelenmesi. Yöntem: SH-SY5Y hücrelerinin diferansiyasyonu morfolojik inceleme ve immunfluoresan mikroskopi ile doğrulandı. Polifenollerin ve Aβ1-42 plaklarının diferansiye SH-SY5Y hücre canlılığına etkisi WST-1 analizi ile saptandı. EGCG, Punicalagin, Ellagic asid, Gastrodin/kombinasyonlarının Aβ agregasyonunu çözündürme etkinlikleri alan emisyon taramalı elektron mikroskobi, Tiyoflavin T ve agrege Aβ ELISA yöntemleri ile belirlendi. Üçlü ve ikili hücreler kullanılarak KBB modeli oluşturuldu ve KBB bütünlüğü transendotelyal elektrik direnci (TEER) değerleri ile değerlendirildi. Oluşturulan KBB'den polifenollerin geçişi Folin Ciocalteu yöntemi ile, Aβ çözündürme etkinlikleri Tiyoflavin T ve agrege Aβ ELISA analizleri ile değerlendirildi. Bulgular: SH-SY5Y hücrelerinin diferansiyasyonun RA+BDNF+dc-AMP+KCI+B27'den oluşan ortam içeriği ile 10 gün muamele edilmesi sonucunda gerçekleştiği saptandı. Polifenollerin hücrelerde % 90 canlılık gösteren dozlarında Aβ1-42 çözündürme etkinlikleri farklı zaman dilimlerinde değerlendirildi. Tüm polifenollerin farklı dozlarda Aβ plaklarını çözündürdüğü saptandı. Kombinasyon-1 ve Kombinasyon-2'nin tekli polifenol uygulanmalarına oranla 24 saate daha fazla oranda Aβ çözündürme etkisi olduğu saptandı (sırasıyla, %75 ve %64). Oluşturulan üçlü kültür modelinin, ikili modellere göre daha yüksek TEER değerine sahip olduğu saptandı ve KBB modeli için daha uygun olduğuna karar verildi (p
Özet (Çeviri)
Introduction: Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disease that affects the hippocampal and cortical regions of the brain. Due to the complex pathogenesis of AD, currently, there is no treatment. In recent years, studies have focused on preventing or dissolving amyloid plaques that play an important role in AD. Due to their various properties, natural polyphenols might be used as potential agents in this field. Objective: •Determination of the time and administration using different agents the best neuronal differentiation in SH-SY5Y cells. •Determination of effect on Aβ aggregation dissociation of EGCG, Punicalagin, Ellagic acid, Gastrodin / combinations. •Forming and comparing blood-brain barrier (BBB) models with in vitro co-, and tri- cell culture with differentiated neuronal cells. •Investigation of the dissociation efficacy on Aβ1-42 plaques of polyphenols in the tri-cell culture BBB model. Method: The differentiation of SH-SY5Y cells was confirmed by morphologic changes with light microscopy, neurite length using neuron j program, and neuronal markers with immunofluorescence assay. The effect of polyphenols and Aβ1-42 plaques on differentiated SH-SY5Y cell viability was determined by WST-1 analysis. EGCG, Punicalagin, Ellagic acid, Gastrodin or combinations to dissociation efficiencies of Aβ aggregation were determined by Field emission scanning electron microscopy, Thioflavin T and aggregated Aβ ELISA methods. BBB model was constructed using tri- and co-cell culture, and transendothelial electrical resistance (TEER) values were compared to each other. Transition of polyphenols from the formed BBB was evaluated by Folin Ciocalteu methods and the effects of polyphenols on BBB model with Aβ toxicity were examined by ELISA and TEER values. Results: It was observed that the treatment time of differentiation of SH-SY5Y cells was 10 days and using the content of the media consisting of RA + BDNF + dc-AMP + KCI + B27 was similar and closer to the in vivo results. Aβ1-42 plaque dissolving efficacies of polyphenols whose doses resulted in 90% viability of the cells were evaluated at different time periods. All polyphenols were found to dissolve Aβ plaques at different doses. Combination-1 and Combination-2 were found to have more than 24 hours of Aβ dissolution effect (75% and 64%, respectively) than single polyphenol treatment (p
Benzer Tezler
- Polifenolik bileşiklerin kanser oluşumu ve progresyonunda görev alan bazı genlerin ekspresyon düzeylerine etkilerinin araştırılması
Researching of the effects of polyphenolic compounds on expression levels of some genes participate in cancer formation and progression
ASLI YILDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEÇİL ERDEN TAYHAN
PROF. DR. ESRA KOÇ
- Polifenolik bileşiklerin pro-oksidan aktivitelerinin ölçümü için yeni bir spektrofotometrik yöntem geliştirilmesi
Development of a new spectrophotometric method to determine pro-oxidant activities of polyphenolic compounds
ESİN KONDAKÇI
- Bazı polifenolik bileşiklerin mikrobiyal ve enzimatik transformasyonu
Microbial and enzymatic transformation of some polyphenolic compounds
DAMLA KIRCI
Doktora
Türkçe
2022
Eczacılık ve FarmakolojiAnadolu ÜniversitesiFarmakognozi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BETÜL DEMİRCİ
- Bazı polifenolik bileşiklerin antioksidan aktivitelerinin tayini
Determination of antioxidant activity of some poliphenolic compounds
SALİHA ESİN KARADEMİR
- Purification of polyphenolic compounds from crude olive leaf extract
Zeytin yaprağı ham özütünden polifenolik bileşiklerin saflaştırılması
ALİHAN KARAKAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
Kimya Mühendisliğiİzmir Yüksek Teknoloji EnstitüsüKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OĞUZ BAYRAKTAR