Antraks koruyucu antijeninin immunojenik özellik gösteren bölgelerini içeren peptitlerin farklı immünizasyon protokolleri ile etkinliklerinin belirlenmesi
Immunization effectiveness of different immunization protocols by using anthrax protective antigens immunogenic epitopes
- Tez No: 621019
- Danışmanlar: PROF. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU, DR. BERTAN KORAY BALCIOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Antraks; sporlu B.anthracis bakterisinin neden olduğu bir hastalıktır. Sporları cilt yoluyla, gastrointestinal ve solunum yoluyla bulaşabilmekte ve ölümcül olabilmektedir. İki ana virülans faktörü vardır; ilki pXO2 plazmitini tarafından sentezlenen antifagositik poli d-glutamat kılıf, diğeri ise PXO1 plazmitinin gen ürünleri olan ekzotoksinler; koruyucu antijen[PA], ödem faktör[EF] ve lethal faktör[LF] proteinleridir. Koruyucu antijen hücrenin ANTXR1 ve ANTXR2 reseptörlerine bağlanır ve katlanarak yüzük şeklinde heptamerik pre-por yapısını oluşturur. EF ve/veya LF bu heptamerik yapıya bağlanarak hücresel endositoz ile hücre içine alınır. Ödem faktör ATP'den dönüştürdüğü cAMP artışı su homeostazını değiştirerek canlıda yoğun ödeme yol açar. Lethal faktör ise MAPKK ailesinin birçok üyesinin N-terminallerini ayırır, inaktive eder ve MAPK aktivasyonunu engeller. Bu çalışmada PA proteinine karşı özgün scFv rekombinant antikoru üretilmesi amaçlanmıştır. Bu sebeple BALB/c, CD1 ve C57BL/6 fare ırklarına PA proteinin reseptöre bağlanan ve immünolojik özellik gösteren peptitleriyle farklı koşullarda immünizasyonlar yapılmıştır. Farklı fare ırklarında oluşturulan immün yanıt varlığı ELİZA yöntemi ile belirlenmiştir. Rekombinant antikor geliştirmek amacıyla hayvanların dalakları alınmış ve RNA izolasyonu yapılarak PCR ile cDNA elde edilmiştir. cDNA'dan VH ve VL gen kütüphanesi oluşturulmuştur. VH ve VL kütüphaneleri pSEX81 fajmit plazmitine klonlanmıştır. Klonlama sonrası faj gösterim teknolojisi için pSEX81 fajmit vektörü yardımcı faj M13K07 ile infektif faja dönüştürülmüştür. Fajlar PEG ile çöktürülerek biyopanning aşaması için hazır hale getirilmiştir.
Özet (Çeviri)
Anthrax is a disease caused by spores of B.anthracis. Spores can be transmitted through the skin, gastrointestinal and respiratory system and can be fatal. There are two main virulence factors; the first one is the antifagocytic poly d-glutamate capsule which is synthesized by the plasmid pXO2, and the other is the exotoxins that are products of the PXO1 plasmid; protective antigen [PA], edema factor [EF] and lethal factor [LF] proteins. The protective antigen binds to the ANTXR1 and ANTXR2 receptors of the cell and expands to form a ring-shaped heptameric pre pore structure. EF and / or LF are bound to this heptameric structure and taken into the cell by cellular endocytosis. The edema factor increases cAMP transformed from ATP leads to intensive edema in the living by altering the water homeostasis. The lethal factor separates, inactivates and inhibits MAPK activation of the N-terminal of many members of the MAPKK family. The aim of this study was to produce a specific scFv recombinant antibody against PA protein. Therefore, BALB/c, CD1 and C57BL/6 mouse strains were immunized with immunogenic epitopes of PA protein. The presence of immune response was determined by ELISA. In the aim of generating scfv RNAs were isolated from immunized spleens, then transformed into cDNA. The VH and VL gene library was generated from the cDNA. The VH and VL libraries were cloned into the phagemid vector pSEX81. For phage display technology, the pSEX81 phagmid vector was transformed into E.coli cells. Infective phages were generated by using helper phage M13K07. The phages were precipitated with PEG in order to use for the biopanning process.
Benzer Tezler
- Rekombinant dna teknolojisi ile ef antijeni üretimi ve saflaştırılması
Production and purification of ef antigen with recombinant dna technology
MELİKE OYUNCAKÇI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
GenetikGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU
- Antraks'ın PA virülans faktörüne karşı fajgösterim teknolojisiyle nötralizanantikor geliştirilmesi
Neutralizing antibodydevelopment against PA virulantfactor of anthrax with phagedisplaying technology
SERPİL BAĞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YELDA ÖZDEN ÇİFTÇİ
DR. BERTAN KORAY BALCIOĞLU
- Antraks atağında ajanın hızlı deteksiyon ve identifikasyonu için yöntemlerin irdelenerek saptanması
Comparison of the methods for rapid detection and identification of agent in any anthrax attack
MESUT ORTATATLI
- Hiperimmün at plazmasindan yüksek verimlilikte immünoglobülinG (IgG) elde edilmesinde yöntem optimizasyonlarinin sağlanmasi
Providing method optimization in high efficiency immunoglobulin G (IgG) from hyperimmune horse plasm
ÖZGE AKSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Allerji ve İmmünolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY
DR. ARZU EKİZ
- Antraks sporlarının hızlı deteksiyonuna yönelik kuartz kristal mikrobalans (QCM)yöntemine dayalı biyosensör geliştirilmesi
Development of quartz crystal microbalance (QCM) based biosensor for rapid detection of anthrax spores
ALİ ÖZTUNA