Geri Dön

Rekombinant dna teknolojisi ile ef antijeni üretimi ve saflaştırılması

Production and purification of ef antigen with recombinant dna technology

PDF İndir

  1. Tez No: 976758
  2. Yazar: MELİKE OYUNCAKÇI
  3. Danışmanlar: PROF. DR. UYGAR HALİS TAZEBAY, DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Biyoteknoloji, Biyoloji, Genetics, Biotechnology, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bu çalışmada, Bacillus anthracis EF antijeninin rekombinant DNA teknolojisi ile üretilmesi ve saflaştırılması amaçlandı. Gram pozitif bir bakteri olan B. anthracis, antraksın etken maddesidir. Bu hastalık ciltte, sindirim sisteminde ve solunum gibi formlarda ortaya çıkar. Hayvan yetiştiricileri, veterinerler ve şarbon mikropları ile çalışan insanlar risk gruplarıdır. Bu organizma kapsüllü olup toksin üretir. pXO1 yapısal toksin genleri olan pagA, lef ve cya'yı taşır. Antraks toksini üç protein, koruyucu antijen (PA), ölümcül faktör (LF) ve ödem faktörü (EF) içerir. PA ve LF kombinasyonu, antraks öldürücü toksin (LT) üretir. PA ve EF kombinasyonu ödem toksini (ET) üretir. EF, hücrelerde cAMP seviyelerini yükselterek sitozole girişte ödeme neden olan kalmodulin ve kalsiyum bağımlı bir adenilat siklazdır. Çalışmada, ticari bir firma tarafından cya geni kodon optimize (CO) dizilimle pET-30a(+) vektörüne klonlanmıştır. Ayrıca, kodon optimize cya geninin taşıdığı sinyal sekansını çıkartarak çoğaltmak üzere bir çift primer tasarlanmış ve sentezlettirilerek tarafımıza teslim edilmiştir. Sinyal sekansı çıkartılmış kodon optimize cya geni, pET-30a vektörüne T4 DNA ligaz ile klonlanmıştır. E.coli DH5α kompetent hücresine transformasyonu yapılmıştır. pET-30a-cya klonlanan vektörü protein ekspresyon çalışmaları için E. coli Rosetta 2(DE3)pLysS kompetent hücresine aktarılmıştır. Büyük ölçeklerde ve küçük ölçeklerde üretimler yapılarak EF proteinin üretimi çalışmaları yapılmıştır. Üretim aşamasında sıcaklık, indükleme süresi, IPTG konsantrasyonu, besiyeri içeriği, besiyeri ölçeği ve kimyasallar gibi farklı optimizasyonlar yapılmıştır. CapturemTM His-tag pürifikasyon kiti ve AKTA Avant cihazında His Trap High- Performance Ni+2 5 mL, Hi Trap Q High Performance Ni+2 1 mL, Mono-Q 5/50 GL kolonları kullanılarak saflaştırma çalışmaları yapılmıştır. Saflaştırma örnekleri SDS-PAGE ve Western blot yöntemleriyle izlenmiş ve EF proteinine ait sinyaller alınmıştır.

Özet (Çeviri)

This study aimed the production and purification of Bacillus anthracis EF antigen by recombinant DNA technology. B. anthracis, a gram positive bacterium, is the causative agent of anthrax. This disease occurs in the skin, gastrointestinal, inhalation forms. Animal breeders, veterinarians and people working with anthrax microbes are the risk groups. This organism is capsulogen and toxinogenic. pXO1 carries the structural toxin genes, pagA, lef and cya. The anthrax toxin consists of three proteins, protective antigen (PA), lethal factor (LF), and edema factor (EF). PA and LF combination produces anthrax lethal toxin (LT). PA and EF combination produces edema toxin (ET). EF is a calmodulin- and calcium-dependent adenylate cyclase that causes edema upon entrance into the cytosol by elevating the cAMP levels in cells. In the study, the cya gene was cloned into a pET-30a (+) vector by a codon optimized (CO) sequence by a commercial company. In addition, a pair of primers was designed to synthesize and amplify the signal sequence-removed of the codon optimized cya gene and was synthesized and delivered to us. The signal sequence-removed codon-optimized cya gene is cloned to the pET-30a vector by T4 DNA ligase. The cloned pET-30a-cya vector was transformed into E. coli DH5α competent cell. The pET-30a-cya cloned vector was transferred to E. coli Rosetta 2 (DE3) pLysS competent cell for protein expression studies. Production of EF protein was carried out in large scales and small scales. During the production phase, different optimizations such as temperature, induction time, IPTG concentration, media content, media scale and chemicals were performed. Purification studies were performed using CapturemTM His-tag purification kit and AKTA Avant device using His Trap High- Performance Ni+2 5 mL, Hi Trap Q High Performance Ni+2 1 mL, Mono-Q 5/50 GL columns. Purification samples were followed by SDS-PAGE and Western blot methods and signals of EF protein were obtained.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    649397

    Rekombinant DNA teknolojisi ile LF antijeni üretimi ve saflaştırılması

    LF antigen production and purification with recombinant DNA technology

    MUSTAFA EMREM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    GenetikGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SONAY ÖZKAN

    DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU

  2. Tez No

    552617

    Rekombinant DNA teknolojisi ile antijen üretimi ve saflaştırılması

    Antigen production and purification with recombinant DNA technology

    MENEKŞE AKKÖSE

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    MikrobiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU

    DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU

  3. Tez No

    988325

    Leptospira sp.'nın Lipl32 antijeninin rekombinant dna teknolojisi kullanılarak Escherichia coli bakterisi ve Nicotiana benthamiana (tütün) bitkisinde üretimi ve alt birim aşı geliştirilmesi

    Production of Lipl32 antigen of Leptospira sp. in both Escherichia coli and Nicotiana benthamiana (tobacco) plants by recombinant dna technology and development of subunit vaccine

    BÜŞRAN SUNYAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2025

    BiyoteknolojiIğdır Üniversitesi

    Biyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)

    PROF. DR. MEHMET HAKKI ALMA

  4. Tez No

    637249

    Evaluation of interactions between SKOV3 cells and HER2 targeted monoclonal antibody with quartz crystal microbalance with dissipation as a novel approach

    Disipasyonlu kuvars kristal mikroterazi ile SKOV3 hücreleri ve HER2 hedefli monoklonal antikor arasındaki etkileşimlerin değerlendirilmesi

    HATİCE EKER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)

    PROF. DR. FATMA NEŞE KÖK

  5. Tez No

    91478

    Rekombinant DNA teknolojisi ile rekombinant bir antijene karşı antikor üretimi

    Production of antibody against a recombinant antigen by using recombinant DNA techniques

    IŞIN NERGİZ GEREN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Tıbbi BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BEYAZIT ÇIRAKOĞLU

Geri Dön